姚造極　江　勇

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院急診科，福建　福州　350004)

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鹽酸戊乙奎醚對百草枯中毒大鼠血清TGF-β1、HIF-α1表達的影響

姚造極江勇

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院急診科，福建福州350004)

摘要〔〕目的探討鹽酸戊乙奎醚對百草枯中毒大鼠血清及肺組織轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β1、缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)-1α表達的影響。方法選擇百枯草中毒大鼠80只，隨機分成兩組各40只。對照組給予生理鹽水灌胃干預(yù)。觀察組：鹽酸戊乙奎醚大鼠尾靜脈注射。觀察不同時點兩組大鼠血清及肺組織TGF-β1、HIF-1α的水平與表達情況。結(jié)果觀察組大鼠血清TGF-β1、HIF-1α含量都低于對照組(P<0.01)。實驗后7、14 d，觀察組大鼠的血清及肺組織TGF-β1、HIF-1α水平都低于對照組(P<0.01)。結(jié)論鹽酸戊乙奎醚通過調(diào)節(jié)百草枯中毒大鼠血清及肺組織TGF-β1、HIF-1α的表達來減慢肺纖維化的產(chǎn)生、改善大鼠缺氧狀況、進一步減輕肺損傷。

關(guān)鍵詞〔〕百草枯中毒；鹽酸戊乙奎醚；轉(zhuǎn)化生長因子-β1；缺氧誘導(dǎo)因子-1α

百草枯中毒后肺組織受影響最明顯，中毒初期以肺泡上皮細胞受損、炎癥細胞浸潤為主，晚期可能會出現(xiàn)肺纖維化〔1〕。轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β1、缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)-1α等細胞因子在肺纖維化的形成過程中有著重要作用。TGF-β1能夠改變細胞外基質(zhì)成分、促進膠原合成，被普遍認為是纖維化進程的開關(guān)因子〔2〕。HIF-1α具有介導(dǎo)哺乳動物細胞低氧反應(yīng)的核轉(zhuǎn)錄因子的作用，可有效調(diào)節(jié)組織纖維化進程〔3〕。有研究發(fā)現(xiàn)〔4〕，鹽酸戊乙奎醚對百草枯中毒大鼠肺纖維化具有干預(yù)效果。本文探討鹽酸戊乙奎醚對百草枯中毒大鼠血清及肺組織TGF-β1、HIF-1α表達的影響。

1資料與方法

1.1一般資料選擇健康雄性SD大鼠80只，隨機分成兩組各40只。對照組：重量205～249 g，平均(222.9±17.2)g；周齡4～6 w，平均(5.1±0.3)w。觀察組：重量208～247 g，平均(225.4±17.8)g；周齡：4～7 w，平均(5.2±0.4)w。兩組大鼠重量、周齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，有可對比性。

1.2方法兩組大鼠均用百草枯(上海譜振生物科技有限公司提供)腹腔注射染毒。TGF-β1、HIF-1α的酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)試劑盒均由上海常斤生物科技有限公司提供。TGF-β1、HIF-1α免疫組化試劑盒、抗體由圣克魯斯生物技術(shù)公司提供。對照組：大鼠百草枯中毒6 h后，給予生理鹽水250 mg/kg灌胃干預(yù)。觀察組：大鼠百草枯中毒6 h后，鹽酸戊乙奎醚(成都力思特制藥股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H20051948)大鼠尾靜脈注射，0.15 mg/kg，用生理鹽水稀釋成1 ml，1次/d。

1.3觀察指標(biāo)于實驗后的第1、7、14天在大鼠腹腔內(nèi)注射水合氯醛麻醉大鼠，取腹主動脈血，離心取血清。應(yīng)用ELISA法測定兩組大鼠血清TGF-β1、HIF-1α水平〔5〕，嚴(yán)格按照試劑盒的操作說明進行。開胸獲取大鼠兩側(cè)肺組織，用10%甲醛液體保存，通過免疫組化染色測定肺組織TGF-β1、HIF-1α表達，嚴(yán)格按照試劑盒的操作說明進行。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS13.0軟件進行t檢驗、χ2檢驗。

2結(jié)果

2.1血清TGF-β1、HIF-1α含量觀察組大鼠血清TGF-β1、HIF-1α含量〔(142.77±18.16)pg/ml,(13.36±4.04)pg/ml〕都低于對照組〔(193.18±29.81)pg/ml,(22.32±5.79)pg/ml〕(P<0.01)。

2.2血清TGF-β1水平實驗后7、14 d，觀察組大鼠的血清TGF-β1、HIF-1α水平都低于對照組(P<0.01)。見表1。

2.3肺組織TGF-β1、HIF-1α的表達實驗后7、14 d，觀察組大鼠的肺組織TGF-β1表達都低于對照組(P<0.01)。見表1，圖1，圖2。

組別血清TGF-β1實驗后1d實驗后7d實驗后14d血清HIF-1α實驗后1d實驗后7d實驗后14d對照組170.53±22.89202.83±28.46196.23±25.4410.12±2.5632.57±7.3323.68±5.81觀察組169.38±23.40151.76±18.19132.22±14.479.87±2.2020.65±4.7310.29±2.62t/P值0.222/>0.059.563/<0.0113.832/<0.010.468/>0.058.642/<0.013.364/<0.01組別肺組織TGF-β1實驗后1d實驗后7d實驗后14d肺組織HIF-1α實驗后1d實驗后7d實驗后14d對照組0.713±0.1350.916±0.0490.868±0.0430.601±0.0220.843±0.0391.147±0.059觀察組0.689±0.1310.641±0.0450.592±0.0270.596±0.0250.623±0.0310.885±0.047t/P值0.807/>0.0526.143/<0.0134.379/<0.010.950/>0.0527.929/<0.0121.967/<0.01

第一作者：姚造極(1974-)，男，主治醫(yī)師，主要從事急診醫(yī)學(xué)研究。

圖1　兩組大鼠肺組織TGF-β1免疫組化(DAB，×200)

圖2　兩組大鼠肺組織HIF-1α免疫組化(DAB，×200)

3討論

百草枯是一種聯(lián)吡啶類除草劑，口服5～10 ml 20%濃度的百草枯即可致人死亡。百草枯中毒后，肺組織中的藥物濃度最高，會造成肺泡的水腫與出血以及肺部嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)，進而誘發(fā)肺纖維化，引起氣體交換障礙，導(dǎo)致缺氧而死亡。研究發(fā)現(xiàn)，肺纖維化與細胞因子的作用有關(guān)〔6〕。TGF-β1水平過高是肺纖維化發(fā)生、發(fā)展的重要原因之一〔7〕。HIF-1α主要存在于慢性缺氧細胞中，與機體缺氧存在緊密的聯(lián)系。百草枯中毒后肺組織細胞會表現(xiàn)出低氧的狀態(tài)〔8〕，是肺組織纖維化產(chǎn)生的重要原因。抑制HIF-1α的表達一方面能夠減輕肺組織損傷，也有利于延緩組織纖維化的進程〔9〕。

雖然臨床上烏司他丁、依達拉奉、丙泊酚等藥物在百草枯中毒后肺損傷保護中發(fā)揮出積極顯著的作用〔10〕。但是，如何抑制百草枯中毒后肺纖維化的出現(xiàn)以及減緩肺纖維化的發(fā)展仍是臨床關(guān)注的重點。鹽酸戊乙奎醚又名長托寧，是一種新型的抗膽堿能藥物〔11〕，可以抑制炎性介質(zhì)與多種細胞因子的釋放而防止全身炎癥反應(yīng)的發(fā)生〔12〕。本研究表明鹽酸戊乙奎醚通過降低百草枯中毒大鼠血清及肺組織TGF-β1、HIF-1α的表達減慢肺纖維化的產(chǎn)生，改善大鼠缺氧狀況，進一步減輕肺損傷。

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〔2015-05-17修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

通訊作者：江勇(1969-)，男，主治醫(yī)師，主要從事急診醫(yī)學(xué)研究。

基金項目：福建省衛(wèi)生廳青年科研基金資助項目(No.2003A044)

中圖分類號〔〕R595.9〔

文獻標(biāo)識碼〕A〔

文章編號〕1005-9202(2015)24-7005-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.24.017