林麗園 張甄妮 嚴(yán)姝 沈琦 閔莉靜

摘 要 用微波輔助提取竹葉提取物，用液體培養(yǎng)基稀釋法測(cè)定竹葉提取物對(duì)大腸桿菌、白葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的最低抑菌濃度（MIC）。結(jié)果表明，竹葉提取物對(duì)大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、白葡萄球菌、黑曲霉菌均有不同程度地抑制作用，其最低抑菌濃度濃度（MIC）分別為：6.5%、6.25%、6.25%、6.3%。

關(guān)鍵詞 竹葉；提取物；抑菌性

中圖分類號(hào)：S795 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B 文章編號(hào)：1673-890X（2015）36--02

竹子是禾本科（Gramineae）竹亞科（Bambusoideae）多年生常綠植物，有著復(fù)雜的次生代謝。據(jù)記載，竹葉性淡、微澀、寒，味甘、苦，具有清熱利尿，明目解毒及止血的功能。近年來(lái)，有學(xué)者在竹葉提取物中發(fā)現(xiàn)包括黃酮類化合物、酚酸類化合物、生物堿、生物活性多糖、氨基酸肽類、葸醌類和萜類內(nèi)酯等多種活性成分[1-3]。一般認(rèn)為，黃酮類化合物、蒽醌化合物、生物堿具有抗菌活性。

本文用微波輔助提取竹葉黃酮，并用測(cè)定竹葉提取物對(duì)大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、白葡萄球菌、黑曲霉菌等四種菌種的最低抑菌濃度（MIC）。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、白葡萄球菌和黑曲霉菌，以上菌種均來(lái)自湖州師范學(xué)院醫(yī)學(xué)院的標(biāo)準(zhǔn)菌株。瓊脂粉、無(wú)水乙醇、石油醚、NaCl、蛋白胨、牛肉膏、葡萄糖、甘油、真空干燥箱（DZG-6050）、高速中藥粉碎機(jī)（WK-200B）、電子天稱（BS124S）、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（RE-52A）、常壓微波輔助合成/萃取反應(yīng)儀（ZY-MAS-1）、恒溫培養(yǎng)箱（DPX-9052B-1）、數(shù)顯水浴恒溫振蕩器（SHA-B）、電熱恒溫水浴鍋（DK-S24）、磁力加熱攪拌器（78-1）、立式壓力蒸汽滅菌器（LDZX-75KB）、恒溫培養(yǎng)箱[100級(jí)（美國(guó)聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn)209b）]和凈化工作臺(tái)（DZG-6050）

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

竹葉提取物的制備：新鮮竹葉烘干，粉碎，過(guò)篩。稱取10 g竹葉粉末，加250 mL無(wú)水乙醇，浸泡30 min，微波處理（時(shí)間5 min，功率600 W，溫度60 ℃），恒溫回流提取2 h，過(guò)濾，濃縮，回收乙醇，濃縮。

培養(yǎng)基的制備：蛋白胨10.0 g；牛肉浸膏3.0 g；葡萄糖；氯化鈉5.0 g；瓊脂20.0 g；去離子水至1 000 mL培養(yǎng)基，用1 mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH7.0～7.5，121 ℃濕熱滅菌20 min，得固體培養(yǎng)基。此配方不加瓊脂為液體培養(yǎng)基。

供試菌懸液的制備：用接種環(huán)刮取適量菌種于斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)24 h，使菌種活化，然后將活化的菌種取一環(huán)接種于4.0 mL的液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)8 h，得到菌懸液。

最低抑菌濃度的測(cè)定：以適合供試菌生長(zhǎng)的液體培養(yǎng)基將被測(cè)的竹葉提取物進(jìn)行一系列對(duì)倍稀釋，濃度分別為100%，50%，25%，12.5%，6.25%，3.125%，1.56%；同時(shí)，設(shè)空白對(duì)照組。各試管加入菌懸液100 ?L，在適宜的條件下培養(yǎng)24 h，判定結(jié)果，以對(duì)照試管有細(xì)菌顯著生長(zhǎng)的時(shí)間為觀察和評(píng)定MIC的最宜時(shí)間，以含藥量低而無(wú)肉眼可見(jiàn)菌生長(zhǎng)的一管含藥量為藥物對(duì)該菌的MIC。

竹葉提取物濃度對(duì)抑菌效果的影響探討：將制備的竹葉提取物原液配制成原液、1∶1、1∶10、1∶20等不同濃度的系列溶液，浸泡濾紙，備用。分別吸取0.1 mL各菌懸液于培養(yǎng)基中，涂布均勻后，再用無(wú)菌鑷子夾取分別浸有上述系列竹葉提取物溶液及對(duì)照液（CK）的無(wú)菌濾紙片，瀝去多余試液后，貼于涂布后的含菌平皿上。每皿5片（3片為實(shí)驗(yàn)組，另3片為對(duì)照組），完成后，置于適宜溫度下培養(yǎng)24 h。測(cè)定濾紙片的抑菌圈大小，數(shù)據(jù)處理，比較抑菌效果。

2 結(jié)果與分析

由1看出，竹葉提取物對(duì)大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、白葡萄球菌、黑曲霉菌均有不同程度地抑制作用，其最低抑菌濃度濃度（MIC）分別為：6.5%、6.25%、6.25%、6.3%。

在竹葉提取物濃度對(duì)抑菌效果的影響討論實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著竹葉提取濃度的減低，抑菌圈面積逐漸減小。這表明隨著竹葉提取物濃度的減小，提取物對(duì)大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、白葡萄球菌、黑曲霉菌的抑菌效果逐漸減弱。而且大腸桿菌在比例為1∶20（提取原液：溶劑）時(shí)，抑菌圈面積為負(fù)值，說(shuō)明此濃度下的竹葉提取物對(duì)大腸桿菌沒(méi)有抑菌效果。

3 結(jié)論與討論

本論文在微波萃取竹葉提取后，初步研究了竹葉提取物對(duì)不同微生物的最低抑菌濃度（MIC）。在制備竹葉提取物的過(guò)程中，考慮到提取物的穩(wěn)定性，整個(gè)提取濃縮的過(guò)程始終控制在較低溫度下進(jìn)行，竹葉提取為對(duì)各菌種都表現(xiàn)出明顯的抑菌活性。

本實(shí)驗(yàn)中只討論了竹葉提取物對(duì)不同菌種的最低抑菌濃度及竹葉提取物濃度對(duì)抑菌效果進(jìn)行了探討，后期將進(jìn)一步討論，竹葉提取物的抑菌活性的影響因素及竹葉提取物中具有抑菌活性的有效成分的確定。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果預(yù)示著竹葉提取物可用作食品防腐劑，這無(wú)疑對(duì)竹葉開(kāi)發(fā)利用提供了一條可行的思路。目前，隨著人們生活水平的提高，安全健康消費(fèi)意識(shí)不斷增強(qiáng)，防腐劑的使用要求將更為嚴(yán)格，竹葉提取物作為天然食品防腐劑，且不含對(duì)人體有害的物質(zhì)，竹葉提取物作為防腐劑的開(kāi)發(fā)研究蘊(yùn)藏著良好的市場(chǎng)前景。

參考文獻(xiàn)

[1]張英，吳曉琴，俞卓裕.竹葉黃酮和內(nèi)酯的季節(jié)性變化規(guī)律研究[J].林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2002，22（2）：65-69.

[2]李洪玉，孫靜蕓.竹葉化學(xué)成分研究[J].中藥材，2003，26（8）：562-563.

[3]羅金岳，陳小燕.從箬竹葉中提取茶多酚的研究[J].林產(chǎn)化工通訊，2003，37（6）：15-19.

（責(zé)任編輯：趙中正）