聶曉紅，熊曙光，何瀚夫，劉鵬(核工業(yè)四一六醫(yī)院，成都6005;四川省干細胞庫)

CIK細胞自體回輸治療Ⅳ期非小細胞肺癌臨床觀察

聶曉紅1，熊曙光1，何瀚夫1，劉鵬2
(1核工業(yè)四一六醫(yī)院，成都610051;2四川省干細胞庫)

摘要:目的觀察細胞因子誘導的殺傷細胞(CIK細胞)自體回輸治療Ⅳ期非小細胞肺癌(NSCLC)患者的生活質(zhì)量、療效、免疫功能及不良反應。方法將確診為Ⅳ期的NSCLC患者118例分為4組，對照組28例給予對癥最佳支持治療，CIK組30例給予單純CIK細胞治療，放化療組30例給予單純放化療，放化療+ CIK組30例給予放化療聯(lián)合CIK治療。觀察治療前及治療后8周患者的卡氏評分、細胞外周血T細胞亞群、癌胚抗原(CEA)、細胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、肝腎功能的變化及臨床療效，并觀察CIK細胞治療期間的不良反應。結(jié)果CIK組治療后患者的卡氏評分有效率90.0%、疾病控制率(DCR)86.7%，CD+3、CD4/CD8及CD+56均有不同程度升高，CEA及CYFRA21-1值有明顯下降，與對照組或治療前比較差異均有統(tǒng)計學意義(P均＜0.05)。放化療+ CIK組治療后卡氏評分有效率及DCR均為93.3%，CEA、CYFRA21-1均較治療前下降顯著(P均＜0.01)，細胞免疫功能略有升高;放化療組治療后卡氏評分有效率及DCR均為73.3%、CEA、CYFRA21-1、細胞免疫功能有所下降(P均＜0.05)。CIK組及放化療+ CIK組在輸注CIK細胞時有7例次出現(xiàn)畏寒及發(fā)熱，CIK細胞治療后肝腎功能無明顯改變。結(jié)論CIK細胞自體回輸治療能改善Ⅳ期NSCLC患者的生活質(zhì)量及免疫功能，提高近期療效，且較為安全。

關(guān)鍵詞:細胞因子誘導的殺傷細胞;非小細胞肺癌; T細胞

近年來，北美、歐洲等發(fā)達國家腫瘤的總體發(fā)病率、病死率均有下降趨勢［1］。在我國，與環(huán)境和生活方式密切相關(guān)的肺癌、乳腺癌等發(fā)病率和病死率呈上升趨勢［2］，且肺癌男性發(fā)病率高于女性［3］。目前非小細胞肺癌(NSCLC)發(fā)病率呈上升趨勢，占肺癌總數(shù)的80%～85%［4］。手術(shù)、化療、放療等傳統(tǒng)療法雖取得一定成效，但5年生存率仍較低。細胞免疫治療目前已成為腫瘤治療的第4大主要治療方法［5］，其既能直接殺死腫瘤細胞又能增加機體免疫功能，且無明顯不良反應。而細胞因子誘導的殺傷細胞(CIK細胞)因其強大的抗腫瘤活性，成為腫瘤免疫治療的熱點。2013年1月～2014年12月，我們對60例Ⅳ期NSCLC患者采取CIK細胞自體回輸治療，取得較好效果。現(xiàn)報告如下。

1　資料與方法

1.1臨床資料NSCLC患者118例，肺癌的診斷依據(jù)2015年中國原發(fā)性肺癌診療規(guī)范［6］，并經(jīng)病理學檢查證實，且為Ⅳ期，生存質(zhì)量評分(KPS)≥60分，預計生存期大于3個月。排除標準:對細胞因子過敏、T細胞淋巴瘤者、臟器移植者、長期使用免疫抑制藥物或正在使用的自身免疫性疾病者、身體狀況較差、伴嚴重心肺肝及腎功能不良者、腦轉(zhuǎn)移并伴意識障礙者、精神疾病者、急性肝炎或其他急性感染病活動期、HIV感染者、懷孕或哺乳期婦女。拒絕行放化療的30例患者采取CIK治療(CIK組)，傳統(tǒng)放化療結(jié)束2周期后行CIK細胞治療30例(放化療+ CIK組)。其中男41例、女19例，年齡44～73 歲;鱗癌37例，腺癌23例。另選取28例只愿行對癥支持治療患者作為對照組，30例初次行2周期放化療的NSCLC患者30例(放化療組)。其中男42例、女16例，年齡46～75歲;鱗癌34例，腺癌24例。四組患者的KPS評分、病情狀況和年齡等方面均具有可比性。

1.2治療方法化療方案為長春瑞濱+順鉑(NP方案: NVB 25mg/m2第1天、第8天，DDP 75mg/m2第1天，每3～4周為一療程)或吉西他濱+順鉑(GP方案: GEM 1 000mg/m2第1天、第8天，DDP75mg/m2第1天，每3～4周為一療程)。細胞采集及CIK培養(yǎng)由四川省干細胞庫完成。在患者或家屬(法定委托人)簽署知情同意書后，抽取患者(聯(lián)合放化療者在第2療程當天抽血后再化療)空腹外周血80～100mL，分離血漿50mL備用，經(jīng)淋巴細胞分離液分離收集單個核細胞。吸出富含白細胞層的細胞約15mL，PBS洗滌2次，將細胞按2×

109/L數(shù)量懸浮于RPMI 1640完全培養(yǎng)基中，加至經(jīng)抗CD3單抗包被的175mL細胞培養(yǎng)瓶。加入白細胞介素(IL)-2和干擾素(IFN)-γ，置于37℃條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)12～14d后，經(jīng)微生物及細胞活性檢測合格后，分離細胞，重懸于生理鹽水中，加入2× 104U的rIL-2，終細胞數(shù)為(1.3～1.6)×109個。靜脈回輸時配制成150mL的細胞懸液，用輸血器1 h內(nèi)輸入，連續(xù)回輸4d為一療程。在接受治療后8周進行療效評價。

1.3觀察指標及其檢測方法①生活質(zhì)量:參照《肺癌患者生活質(zhì)量評估測量表》評估兩組患者治療前后生活質(zhì)量。采取KPS評分，升高≥10分為提高，下降≤10分為下降，升高或下降不足10分為穩(wěn)定，提高與穩(wěn)定判定為有效。②免疫功能:采用流式細胞儀檢測CD+3、CD4、CD8、CD+56，評估患者治療前后免疫功能改善情況。③療效:按照RECIST1.1版評定標準［7］，根據(jù)肺癌靶病灶大小的變化判定近期療效，即以治療前及治療后8周影像學檢查為依據(jù)進行評價，分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、病灶穩(wěn)定(SD)和進展(PD)。計算疾病控制率(DCR)=(CR + PR + SD)/(CR + PR + SD + PD)。④癌胚抗原(CEA)、細胞角蛋白19片段(CYFRA21-1):采用化學發(fā)光法(原裝西門子試劑)檢測，標準試劑盒血清CEA臨界值為4.7 μg/L，CYFRA21-1臨界值為3.5 μg/L。⑤不良反應:在輸注CIK細胞過程中觀察有無寒戰(zhàn)、發(fā)熱及過敏等癥狀，同時8周后復查肝腎功能等。

1.4統(tǒng)計學方法采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。計量資料以珋x±s表示，兩組比較用配對t檢驗，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

2.1生活質(zhì)量變化對照組生活質(zhì)量提高2例，無變化16例，下降10例，有效率為64.3%，CIK組分別為14、13、3例，90.0%，兩組有效率比較，P＜0.05。放化療組生活質(zhì)量提高6例，無變化16例，下降8例，有效率73.3%，放化療+ CIK組分別為13、15、2例，93.3%，兩組有效率比較，P＜0.05。

2.2細胞免疫功能變化單純CIK細胞治療后患者的CD+3、CD4/CD8及CD+56均有不同程度的升高(P＜0.05)，而對照組無升高，反而略有下降;放化療+ CIK治療后患者的細胞免疫功能較治療前略有提高，而單純放化療后細胞免疫功能反而較治療前顯著下降(P＜0.05)。見表1。

表1　四組治療前后細胞免疫功能比較()

表1　四組治療前后細胞免疫功能比較()

注:與同組治療前比較，▲P＜0.05，◆P＜0.01。

組別　n　CD+3(%)治療前　　治療后CD4/CD8治療前　　治療后CD+56(%)治療前　　治療后對照組　28　57.39±3.82　56.68±3.57　1.01±0.28　0.97±0.25　20.12±4.11　18.98±3.24 CIK組　30　58.02±4.05　64.89±3.87▲　0.98±0.24　1.25±0.31▲　19.97±3.02　25.81±3.38◆放化療組　30　58.45±5.11　53.21±4.04▲　0.92±0.31　0.74±0.21▲　18.89±3.38　15.37±3.46▲放化療+ CIK組　30　57.72±4.96　60.17±4.51　0.96±0.30　1.02±0.33　19.26±4.30　21.52±4.02

2.3療效評估CIK組中PR5例，SD21例，PD4例，DCR為86.7%;對照組SD18例，PD10例，DCR 為64.3%，CIK組與對照組DCR比較，P＜0.05。放化療組中PR7例，SD15例，PD8例，DCR為73.3%;放化療+ CIK組PR12例，SD16例，PD2例，DCR為93.3%，放化療+ CIK組與放化療組DCR比較，P＜0.05。

2.4腫瘤標志物變化CIK組患者治療后CEA及CYFRA21-1水平較治療前均明顯下降(P＜0.05)，而對照組治療后CEA及CYFRA21-1水平較治療前無明顯下降。放化療+ CIK組及放化療組治療后CEA、CYFRA21-1均較治療前明顯下降(P均＜0.05)，見表2。

2.5不良反應CIK組及放化療+ CIK組共60例患者在輸注CIK細胞后有7例/次出現(xiàn)畏寒及發(fā)熱(＜39.0℃)，對癥治療后很快消失。兩組CIK治療前后肝腎功能無明顯變化。

表2　四組治療前后腫瘤標志物水平比較(ng/L，)

表2　四組治療前后腫瘤標志物水平比較(ng/L，)

注:與同組治療前比較，▲P＜0.05，◆P＜0.01。

組別　n CEA治療前　　治療后CYFRA21-1治療前　　治療后CIK組　30　28.57±12.24 22.46±11.03▲　5.49±1.97　4.31±1.87▲放化療組　30　26.76±14.17 21.31±13.21▲　5.24±2.29　4.02±1.96▲放化療+CIK組　30　27.08±13.78 19.65±12.77◆　5.72±2.54　4.10±2.01◆對照組　28　27.81±13.36 29.12±15.31　5.63±2.16　6.24±2.23

3　討論

腫瘤的發(fā)生發(fā)展與機體免疫功能密切相關(guān)，惡性腫瘤患者自身的免疫細胞受到自身免疫機制影響，不能有效抑制癌細胞增殖。NSCLC患者就診時70%處于晚期，晚期患者本身腫瘤負荷較大，免疫功能低下，由于生理儲備的減退、長期疾病的消耗及遠處轉(zhuǎn)移，已喪失根治性手術(shù)切除范圍或即使手術(shù)亦不徹底［8］;且部分患者經(jīng)過手術(shù)、放化療之后免疫

功能進一步損傷，不能繼續(xù)耐受亦不愿意行放化療，進而病情持續(xù)進展。

CIK細胞具有體外增殖倍數(shù)高、抗瘤譜廣、殺瘤活性強、不良反應小等特點而受到關(guān)注［9］，目前已逐步用于臨床，尤其適用于不能繼續(xù)耐受手術(shù)及放化療的腫瘤患者［10］。CIK細胞是將人外周血單個核細胞在體外由多種細胞因子誘導而成的對多種腫瘤具有殺傷活性的細胞毒性T細胞。是同時表達CD3+、CD5+6的異質(zhì)細胞群，兼具有T細胞特異性殺傷及NK細胞非主要組織相容性復合體限制性殺傷能力。CIK細胞治療是將從患者外周血中采集的單個核細胞在體外經(jīng)多種細胞因子(如抗CD3單抗、IFN-γ及IL-1α、IL-2)修飾、刺激、培養(yǎng)、增殖后回輸至患者體內(nèi)，能迅速殺傷腫瘤，緩解放化療毒性的作用［11］。我們研究發(fā)現(xiàn)單純放化療后患者外周血中CD3+、CD4/CD8及CD5+6均較治療前有不同程度下降，證實患者經(jīng)放化療后免疫功能有所下降。而單獨CIK細胞治療及CIK細胞聯(lián)合放化療后分別較最佳支持治療和單純放化療患者外周血中CD3+、CD4/CD8及CD5+6均有升高，提示CIK細胞可一定程度增強患者細胞免疫功能。目前了解到CIK細胞作用機制有:①CIK細胞能以不同的機制識別腫瘤細胞，通過直接的細胞質(zhì)顆粒穿透封閉的腫瘤細胞膜進行胞吐，實現(xiàn)對腫瘤細胞的裂解;②通過誘導腫瘤細胞凋亡或壞死殺傷腫瘤細胞;③CIK細胞分泌IL-2、IL-6、IFN-γ等多種抗腫瘤的細胞因子;④CIK細胞回輸后可激活機體免疫系統(tǒng)，提高機體免疫功能。

本研究結(jié)果顯示，患者經(jīng)CIK細胞治療后大部分患者食欲增加，睡眠改善，體力增強，疼痛減輕，KPS評分得到改善，與張涵等［12］的研究一致，表明CIK細胞治療能在一定程度上改善患者的生活質(zhì)量，從而使患者對治療更有信心，依從性更好。我們還發(fā)現(xiàn)，部分患者復查胸部CT病灶有所縮小，患者治療前有胸膜轉(zhuǎn)移，治療后胸水減少，短期內(nèi)疾病控制率達86.7%，尤其是疾病進展病例較對照組明顯減少;聯(lián)合放化療后，疾病控制率達93.3%，較單純放化療的疾病控制率(73.3%)有顯著提高，此與尹先哲等［13］結(jié)果基本一致。若CIK細胞治療與化療聯(lián)合，能提高晚期NSCLC患者的近期療效［14］。單純CIK細胞治療或與放化療聯(lián)合治療患者腫瘤標志物如CEA和CYFRA21-1較治療前有顯著下降，而對照組無明顯下降，單純放化療組下降幅度輕微，提示CIK細胞治療后可使患者病情得到一定控制［15］。研究還發(fā)現(xiàn)CIK細胞對耐藥的腫瘤細胞亦有殺傷作用，這是CIK用于已經(jīng)耐藥的晚期NSCLC患者的基礎(chǔ)，可能是多耐藥腫瘤的潛力性治療略［16］。我們發(fā)現(xiàn)，60例患者CIK細胞回輸后1～h有7例出現(xiàn)中等程度的畏寒發(fā)熱，對癥處理后1 2 h體溫恢復正常，患者的肝腎功能無明顯影響可見，CIK細胞自體回輸治療晚期NSCLC療效顯，生活質(zhì)量、疾病控制率較高，具有良好的安全性但本研究病例數(shù)有限，且僅為Ⅳ期NSCLC患者，療僅一周期，觀察期亦較短，遠期療效及安全性有進一步研究證實。

參考文獻:

［1］Siegel RI，Ma J，Zou Z，et al.Cancer statistics，2014［J］.C Cancer J Clin，2014，64(1): 9-29.

［2］曾紅梅，陳萬青.中國癌癥流行病學與防治研究現(xiàn)狀［J］.化進展，2013，25(9): 1415-1420.

［3］姚曉軍，劉倫旭.肺癌的流行病學及治療現(xiàn)狀［J］.現(xiàn)代腫瘤學，2014，22(8): 1982-1986.

［4］Zheng YW，Li RM，Zhang XW，et a1.Current adoptive immun therapy in non-small cell lung cancer and potential influence therapy outcome［J］.Cancer Invest，2013，3l(3): 197-205.

［5］Arashar Arafar.Cytokine induced killer cell immunotherapy cancer treatment: from bench to bedsides［J］.Biomed Res Ther py，2014，1(2): 71-77.

［6］支修益，石遠凱，于金明.中國原發(fā)性肺癌診療規(guī)范(2015 版)［J］.中華腫瘤雜志，2015，37(1): 67-78.

［7］Eisenhauer EA，Therasseb P，Bogaerts J，et al.New response valuation criteria in solid tumours: Revised RECIST guideline(ve sion 1.1)［J］.Eur J Cancer，2009，45(2): 228-247.

［8］柏薔，李龍蕓.協(xié)和呼吸病學［M］.北京:中國協(xié)和醫(yī)科大學版社，2011: 1203-1221.

［9］張毅.腫瘤的細胞免疫治療［J］.鄭州大學學報(醫(yī)學版)2011，46(2): 165-169.

［10］Schmeel LC，Schmeel FC，Coch C，et al.Cytokine-induced kill(CIK)cells in cancer immuno-therapy: report of the internation registry on CIK cells(IRCC)［J］.J Cancer Res Clin Onco 2015，141(5): 839-849.

［11］羅虎，周向東.CIK細胞及其在肺癌治療中的研究進展［J］.國肺癌雜志，2011，14(12): 954-959.

［12］張涵，張家洪，馬經(jīng)平.CIK治療晚期非小細胞肺癌的臨床研［J］.基層醫(yī)學論壇，2013，17(7): 865-867.

［13］尹先哲，王苗，杜峰，等.CIK細胞與白介素-2回輸聯(lián)合同步療治療晚期非小細胞肺癌臨床研究［J］.山東醫(yī)藥，2012，5(28): 21-22，25.

［14］Li R，Wang C，Liu L，et al.Autologous cytokine-induced kill cell immunotherapy in lung cancer: a phase II clinical study［J］Cancer Immunol Immunother，2012，61(11): 2125-2133.

［15］Shepherd FA，Douillard JY，Blumenschein GR Jr.Immunothera for non-small cell lung cancer: novel approaches to improve patie outcome［J］.J Thorac Oncol，2011，6(10): 1763-1773.

［16］李世俊，龐華.針對多藥耐藥腫瘤的潛力性治療策略--CIK細［J］.山東醫(yī)藥，2012，52(1): 104-106.

收稿日期:( 2015-04-02

文章編號:1002-266X(2015)33-0058-03

文獻標志碼:B

中圖分類號:R730.51; R734.2

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.33.022