孟志強　郭斌　吳若丹　白云鶴　周三國

【摘要】 目的 通過對比分析熱休克蛋白（HSP27）表達(dá)的變化并探討甲基強的松龍（MP）在預(yù)防脊髓缺血再灌注損傷脊髓中的最佳用藥時間。方法 30只 SD大鼠， 分為甲、乙、丙、丁、戊組， 每組6只。甲組暴露腹主動脈， 無其他治療；乙、丙、丁、戊組關(guān)閉30 min主動脈造成脊髓缺血再灌注損傷， 乙組在損傷前30 min尾靜脈注射生理鹽水， 丙、丁、戊組分別與損傷前30、60、180 min尾靜脈注射生理30 mg/kg的MP。甲組于術(shù)后、其他組于損傷后180 min行免疫組化染色檢測， 觀察對比各組HSP27的相對含量。結(jié)果 HSP27相對含量比較， 乙組和戊組比較， 差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；丙組和丁組比較， 差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；丙組和丁組的HSP27表達(dá)強于乙組和戊組， 比較差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 在脊髓缺血再灌注損傷前30 min應(yīng)用MP， 可減輕脊髓缺血再灌注損傷， 提升HSP27的表達(dá)強度， 具有極高的應(yīng)用價值。

【關(guān)鍵詞】 熱休克蛋白；大鼠脊髓缺血再灌注損傷脊髓；甲基強的松龍

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.01.214

脊髓缺血再灌注損傷指的是脊髓功能沒有在去除脊髓缺血因素后恢復(fù)正常， 嚴(yán)重情況下脊髓神經(jīng)元發(fā)生不可逆的遲發(fā)性死亡。作為一種保護(hù)性蛋白， HSP27具有廣泛且關(guān)鍵的作用， 能增強細(xì)胞在不利環(huán)境下的適應(yīng)能力。相關(guān)的研究證實[1]， MP可增強急性脊髓損傷局部脊髓組織中的HSP27表達(dá)， 但其脊髓缺血再灌注損傷局部脊髓組織中HSP27表達(dá)的影響研究較少。本研究旨在通過對比分析HSP27表達(dá)的變化并探討MP在預(yù)防脊髓缺血再灌注損傷脊髓中的最佳用藥時間[2， 3]?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料 選用由某動物實驗中心提供的30只純種SD大鼠作為研究對象， 均為雄性， 4月齡， 平均體重（252±18）g。隨機將其分為甲、乙、丙、丁、戊組， 每組6只。甲組暴露腹主動脈， 無其他治療；乙、丙、丁、戊組關(guān)閉30 min主動脈造成脊髓缺血再灌注損傷， 乙組在損傷前30 min尾靜脈注射生理鹽水， 丙、丁、戊組分別與損傷前30、60、180 min尾靜脈注射生理30 mg/kg的MP。

1. 2 動物模型制作及標(biāo)本制備 脊髓缺血再灌注損傷動物模型通過關(guān)閉主動脈的方式建立[4， 5]， 腹腔麻醉以6 ml/kg注射7%水合氯醛完成。按照無菌操作打開腹腔， 暴露主動脈， 于右腎動脈分支下、左腎動脈分支， 夾閉腹主動脈， 停止血流， 維持30 min。甲組大鼠于術(shù)后、其他組大鼠于缺血再灌注后180 min處死大鼠， 取圓錐上l cm處的脊髓做常規(guī)石蠟橫切片， 每個標(biāo)本4張， 3張備用， 1張行免疫組化染色檢測。

1. 3 組織學(xué)檢查 每只大鼠取1張切片行免疫組化染色， 采用計算機圖像分析系統(tǒng)測量， 400倍光鏡下6個不同視野中的染色陽性物質(zhì)的吸光度A， 以吸光度表示HSP27的相對含量。

1. 4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；免疫組化陽性物質(zhì)吸光度A， 用LSD分析組間差異。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

組間吸光度值差異用LSD分析， 乙組和戊組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）， 丙組和丁組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）， 且丙組和丁組的HSP27表達(dá)強于乙組和戊組， 比較差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

有多種途徑和因素可導(dǎo)致脊髓缺血再灌注損傷， 歸納包括：①細(xì)胞內(nèi)Ca2+在興奮性氨基酸的誘導(dǎo)下大量堆積， 引發(fā)介導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞的凋亡；②細(xì)胞膜的組成成分（酶、RNA、DNA）與細(xì)胞內(nèi)形成的氧自由基共價結(jié)合， 引發(fā)細(xì)胞膜功能和結(jié)構(gòu)的變化；③白細(xì)胞在白細(xì)胞介素-1、白細(xì)胞介素-8以及細(xì)胞間黏附分子-1水平升高的情況下， 其不斷聚集并相互粘附， 引發(fā)炎癥。臨床上尚無治療脊髓缺血再灌注損傷的特效藥， MP、地塞米松可在損傷早期有效減輕炎癥反應(yīng)。近年來， 不斷有治療脊髓缺血再灌注損傷的新藥， 比如強力霉素、右羥嗎喃、尼莫地平、放線菌酮環(huán)己酰亞胺等， 盡管在促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)上有所療效， 但其他療效并不明顯， 有待進(jìn)一步研究。而MP的應(yīng)用較為廣泛， 其療效明顯， 其抗炎作用是氫化可的松的4倍、鹽皮質(zhì)激素的5倍。MP是一種合成糖皮質(zhì)激素， 不僅能抗氧化、抗炎， 還能減少興奮性氨基酸的釋放和細(xì)胞內(nèi)Ca2+的水平， 在脊髓缺血再灌注損傷的臨床治療中具有廣泛的應(yīng)用， 但學(xué)界對MP在預(yù)防脊髓缺血再灌注損傷的作用研究尚少。

HSP27是一種小分子熱休克蛋白， 能保護(hù)細(xì)胞， 增強細(xì)胞的適應(yīng)力， 可用染色陽性物質(zhì)的吸光度A表示其表達(dá)強度， 學(xué)界通常以HSP27的表達(dá)強度來量化MP的療效。在本次研究中， HSP27表達(dá)強度比較， 乙組和戊組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）， 丙組和丁組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）， 且丙組和丁組的HSP27表達(dá)強于乙組和戊組， 比較差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

綜上所述， 在脊髓缺血再灌注損傷前30 min應(yīng)用MP， 可減輕脊髓缺血再灌注損傷， 提升HSP27的表達(dá)強度， 具有極高的應(yīng)用價值。

參考文獻(xiàn)

[1] 齊兵獻(xiàn).參附注射液對大鼠脊髓缺血再灌注損傷NF-κBp65和IκB-α影響的實驗研究.甘肅中醫(yī)學(xué)院， 2012.

[2] 周若南.甲基強的松龍上調(diào)缺血再灌注損傷脊髓熱休克蛋白27表達(dá)的劑量研究.鄭州大學(xué)， 2010.

[3] 張子峰， 白玉樹， 侯鐵勝， 等.甲基強的松龍與鈣蛋白酶抑制劑對大鼠缺血再灌注損傷脊髓保護(hù)作用比較.中國矯形外科雜志， 2011， 19（12）：1026-1029.

[4] 孟志強.甲潑尼松龍預(yù)干預(yù)脊髓缺血再灌注損傷對Caspase-3表達(dá)的影響.鄭州大學(xué)， 2011.

[5] 王文剛， 夏磊， 劉國強， 等.早期應(yīng)用甲基強的松龍上調(diào)受損脊髓細(xì)胞內(nèi)hsp27蛋白的表達(dá)醫(yī)藥論壇雜志， 2007， 28（3）：6-8.

[收稿日期：2015-07-17]