■廖 滿 段 瑞 謝佳倩 譚靈琳 易 丹 丁斌鷹 楊書慧

（動物營養(yǎng)與飼料安全湖北省協(xié)同創(chuàng)新中心動物營養(yǎng)與飼料科學(xué)湖北省重點實驗室武漢輕工大學(xué)動物科學(xué)與營養(yǎng)工程學(xué)院，湖北武漢 430023）

應(yīng)激被認為是一種脆弱的體內(nèi)平衡狀態(tài)，惡劣的環(huán)境和不良管理容易引起應(yīng)激。因環(huán)境低溫所導(dǎo)致的冷應(yīng)激常引起肉雞機體抵御能力減弱，表現(xiàn)為肉雞生長緩慢、發(fā)病率高及死亡率高等[1-4]。寒冷應(yīng)激常常會使養(yǎng)禽場造成嚴重的經(jīng)濟損失。因此，冷應(yīng)激問題已成為制約當前養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的重要因素之一，研究冷應(yīng)激肉雞的調(diào)控措施對于家禽的健康養(yǎng)殖具有重要意義。

三乳酸甘油酯由乳酸和甘油酯化而成[5]，能夠作為機體的能源物質(zhì)，并且具有良好的抑菌效果，能抑制炎性因子的分泌[6]。橄欖油富含脂溶性多種維生素、胡蘿卜素及多種微量元素等天然營養(yǎng)物質(zhì)，油中不飽和脂肪酸達82%～87%，有獨特芳香和美味，對機體具有多種保健功效，特別對減少心血管疾病和促進幼兒骨骼及神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、健美肌膚具有特殊功效。橄欖油中含有角鯊烯物質(zhì)，是一種天然的抗氧化劑[7]。肖穎等[8]報道，橄欖油對大鼠高血膽固醇、甘油三酯有降低作用,并能改善高脂所致體內(nèi)過氧化狀態(tài)異常，減輕對機體的過氧化損傷。黃惠娟等[9]研究表明，橄欖油能有效地減輕大鼠卵巢切除術(shù)引起的骨質(zhì)丟失，可能通過補充植物雌激素發(fā)揮擬雌激素樣作用。但是，關(guān)于三乳酸甘油酯和橄欖油在肉雞冷應(yīng)激方面的研究尚未見報道。因此，本試驗旨在探索三乳酸甘油酯和橄欖油對冷應(yīng)激肉雞生長性能、血液生化指標、血液抗氧化功能的改善作用，為三乳酸甘油酯和橄欖油在肉雞生產(chǎn)中的應(yīng)用提供理論依據(jù)，并為探尋營養(yǎng)手段緩解肉雞冷應(yīng)激提供思路。

1 材料與方法

1.1 試驗材料與基礎(chǔ)日糧

三乳酸甘油酯和橄欖油為市售產(chǎn)品（純度≥99%）?；A(chǔ)日糧采用玉米-豆粕型日糧，基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。乳酸甘油酯組的三乳酸甘油酯添加量為500 mg/kg，添加劑量的選擇依據(jù)本課題組的前期研究結(jié)果（李嬌龍等，2014），而橄欖油組日糧配方中豆油全部由橄欖油替代，用玉米調(diào)整各組能量平衡。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.2 試驗動物及設(shè)計

選用200只1日齡科寶肉雞（45±0.5）g，按體重相近原則隨機分為4組（對照組、冷應(yīng)激組、乳酸甘油酯組、橄欖油組），每組5個重復(fù)，每個重復(fù)10只雞。對照組和冷應(yīng)激組飼喂基礎(chǔ)日糧，乳酸甘油酯組飼喂添加500 mg/kg三乳酸甘油酯的基礎(chǔ)日糧，橄欖油組飼喂以橄欖油替代配方中豆油的基礎(chǔ)日糧。試驗于2014年12月5日至2015年1月15日進行，試驗周期42 d。

1.3 飼養(yǎng)管理

肉雞采用網(wǎng)上平養(yǎng)的方式，每籠10只。試驗前將雞舍、雞欄、料槽、飲水器等徹底打掃干凈消毒，并且對雞舍整體進行熏蒸消毒。于第7、21日齡接種新城疫疫苗，14、28日齡接種法氏囊疫苗。肉雞自由采食和飲水，24 h光照，定期打掃并消毒。試驗第1周（1～7日齡）各組溫度控制在32～34℃，第2周（8～14日齡）控制在30～32℃。試驗第3～6周（15～42日齡）冷應(yīng)激組、乳酸甘油酯組、橄欖油組控制在(10±2)℃，而對照組維持在(26±2)℃，濕度50%～60%。

1.4 樣品采集與處理

試驗開始后，每周對試驗肉雞稱重并記錄每天采食量。于第43日齡時每重復(fù)隨機取2只體重相近肉雞稱重，并翅下靜脈采血，離心（3 000 r/min、10 min）取血清置于-20℃冰箱待測，采血完后屠宰，取胸腺、脾臟、法氏囊、心臟、肝臟、肺臟、胸肌、腿肌等稱重并記錄。

1.5 指標測定及方法

1.5.1 生長性能測定

生長性能包括1～21日齡、22～42日齡和1～42日齡肉雞平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）、料重比（F/G）等。

1.5.2 器官組織相對重量

器官組織相對重量（%）=器官組織重量/個體活重×100。器官組織包括胸腺、脾臟、法氏囊、心臟、肝臟、肺臟、胸肌、腿肌等。

1.5.3 血液生化指標

采用日立7020全自動生化分析儀測定血液中總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、總膽紅素（TBIL）含量及谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）活力。

1.5.4 血清抗氧化能力

血清中總超氧化物歧化酶（superoxidase，SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSHPx）的活力和丙二醛（malonald-ehyde，MDA）含量的測定參照Yi等[10]方法，用試劑盒法（南京建成生物工程研究所）測定。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗結(jié)果用“平均值±標準差”表示。試驗數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計軟件SPSS17.0進行單因素方差（one-way ANOVA分析）和Duncan's法多重比較檢驗，以P＜0.05為差異顯著性標準。

2 結(jié)果與分析

2.1 三乳酸甘油酯和橄欖油對冷應(yīng)激肉雞生長性能的影響（見表2）

表2 三乳酸甘油酯和橄欖油對冷應(yīng)激肉雞生長性能的影響

由表2可知，與對照組相比，冷應(yīng)激處理降低了肉雞（1～21、22～42及1～42日齡）平均日增重（ADG）（P＜0.05），提高了料重比（F/G）（1～21、22～42及1～42日齡）（P＜0.05）；與冷應(yīng)激組相比，乳酸甘油酯降低了22～42和1～42日齡肉雞的平均日采食量（P＜0.05），但對平均日增重、料重比均無影響（P＞0.05）；與冷應(yīng)激組相比，橄欖油組對生長性能無影響（P＞0.05）。

2.2 三乳酸甘油酯和橄欖油對冷應(yīng)激肉雞組織器官相對重量的影響（見表3）

由表3可知，與對照組相比，冷應(yīng)激處理降低了42日齡肉雞的胸腺、法氏囊和腿肌相對重量（P＜0.05），但提高了心臟相對重量（P＜0.05）。而與冷應(yīng)激組相比，乳酸甘油酯組及橄欖油組組織器官相對重量均無顯著差異（P＞0.05），表明在日糧中添加500 mg/kg三乳酸甘油酯或以橄欖油替代日糧中豆油未能改善由冷應(yīng)激引起的組織器官發(fā)育不良及免疫功能下降。

表3 三乳酸甘油酯和橄欖油對冷應(yīng)激肉雞組織器官相對重量的影響（42日齡）（%）

2.3 三乳酸甘油酯和橄欖油對冷應(yīng)激肉雞血液生化指標的影響（見表4）

由表4可知，與對照組相比，冷應(yīng)激處理提高了血液ALP活力（P＜0.05）；與冷應(yīng)激組相比，乳酸甘油酯組顯著降低血液中ALT、ALP的活力和TBIL含量（P＜0.05），而橄欖油組顯著提高了血液中TP、GLB含量（P＜0.05），降低血液中TBIL含量（P＜0.05）。

2.4 三乳酸甘油酯和橄欖油對冷應(yīng)激肉雞血清抗氧化能力的影響(見表5)

表4 三乳酸甘油酯和橄欖油對冷應(yīng)激肉雞血液生化指標的影響

表5 三乳酸甘油酯和橄欖油對冷應(yīng)激肉雞血清抗氧化能力的影響

由表5可知，與對照組相比，冷應(yīng)激處理組顯著降低了血清中SOD酶活力（P＜0.05）；而與冷應(yīng)激組相比，日糧中添加500 mg/kg三乳酸甘油酯或以橄欖油替代日糧中大豆油均能顯著提高血清中SOD和GSH-Px的酶活力（P＜0.05），且兩組之間無顯著差異（P＞0.05）。

3 討論

3.1 三乳酸甘油酯和橄欖油對冷應(yīng)激肉雞生長性能的影響

有關(guān)三乳酸甘油酯和橄欖油對冷應(yīng)激肉雞生長性能的報道很少。冷應(yīng)激顯著降低了肉雞的采食量和日增重，同時增大了料重比，給肉雞生產(chǎn)帶來顯著的負面影響。研究表明，在寒冷環(huán)境中，肉雞需要消耗大量的飼料用于維持產(chǎn)熱調(diào)節(jié)體溫，只有部分用于脂肪沉積，使得整個飼養(yǎng)期間料重比升高[3,11]，增大養(yǎng)殖成本，同時冷應(yīng)激使得肉雛雞發(fā)病率和死亡率明顯提高。本研究結(jié)果與前人研究結(jié)果一致。另外，本試驗結(jié)果還表明，日糧中添加500 mg/kg三乳酸甘油酯能顯著降低冷應(yīng)激肉雞的平均日采食量（22～42和1～42日齡），可能與三乳酸甘油酯有一定氣味有關(guān)，但對平均日增重及料重比無顯著影響，與李嬌龍等[12]的結(jié)果一致，而以橄欖油替代日糧中豆油對冷應(yīng)激肉雞的生長性能無顯著影響。

3.2 三乳酸甘油酯和橄欖油對冷應(yīng)激肉雞組織器官相對重量的影響

研究表明，冷應(yīng)激會導(dǎo)致肉雞免疫器官發(fā)育不良，免疫功能降低[13]，抗病力下降，最終導(dǎo)致死亡率升高。本試驗中，冷應(yīng)激抑制了肉雞免疫器官（胸腺、法氏囊）的發(fā)育及肌肉（腿?。┥L，并促使心臟增大（見表3），而日糧中添加500 mg/kg三乳酸甘油酯或以橄欖油替代日糧中的豆油，并未改善由冷應(yīng)激引起的器官發(fā)育不良和免疫力下降等不良影響。

3.3 三乳酸甘油酯和橄欖油對冷應(yīng)激肉雞血液生化指標的影響

TP是反映動物營養(yǎng)狀況的重要指標之一，主要包括白蛋白和球蛋白，良好的營養(yǎng)狀況可以促進血漿蛋白的合成。TP主要維持血漿膠體滲透壓與pH值平衡，具有運輸、凝血、免疫、供應(yīng)能量等作用。ALB是最重要的特異性蛋白，具有調(diào)節(jié)滲透壓、運輸代謝產(chǎn)物、貯存物質(zhì)等生理功能。GLB則主要與免疫有關(guān)。ALT是在肝細胞內(nèi)合成的，主要分布在肝細胞的胞質(zhì)中，當肝細胞受損時會釋放入血，是反映肝細胞炎癥受損最敏感的指標。AST可以從受損的肝細胞、心肌細胞、肌肉細胞或腦細胞中釋放入血。肝臟中的AST主要存在于線粒體中，AST升高說明細胞器受損，肝臟損害嚴重。肝臟中含有高濃度的ALP，血液中ALP升高是肝臟受損的一種表現(xiàn)。TBIL主要用來診斷肝臟或膽道是否發(fā)生異常，當肝臟受損時，TBIL會升高。由此可見，血液中ALT、AST、ALP和TBIL濃度升高可能是由肝臟受損所導(dǎo)致[12]。而營養(yǎng)物質(zhì)在肝臟修復(fù)方面起著重要作用[14]。李嬌龍等[12]的研究表明，日糧中添加三乳酸甘油酯能夠降低LPS刺激肉雞的血清ALT、AST、ALP水平。高珊等[15]的研究表明，橄欖油能夠提高小鼠血清中ALB含量。在本試驗中，冷應(yīng)激顯著升高了血液ALP酶活力，添加500 mg/kg三乳酸甘油酯能夠降低冷應(yīng)激肉雞血液中ALT、ALP和TBIL含量，可能是緩解了冷應(yīng)激肉雞肝臟損傷情況。而橄欖油組則提高了血清中TP，主要是GLB含量，降低TBIL含量，提示橄欖油可能對冷應(yīng)激肉雞的免疫力及肝臟功能具有積極作用。

3.4 三乳酸甘油酯和橄欖油對冷應(yīng)激肉雞血液抗氧化能力的影響

機體清除自由基的主要抗氧化酶有SOD、GSHPx等。因此，測定SOD和GSH-Px活性的高低可以間接反映機體清除自由基的能力。而MDA作為脂質(zhì)氧化反應(yīng)的穩(wěn)定終產(chǎn)物，其含量高低反映自由基對機體脂肪的損傷程度[16]。據(jù)報道，冷應(yīng)激可以改變生物體的促氧化和抗氧化間的平衡，通過黃嘌呤氧化酶活性的升高和髓過氧化物酶活性的降低使機體產(chǎn)生過多的自由基，導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化作用增強，誘發(fā)氧化損傷，對機體造成損傷[17-19]。關(guān)于三乳酸甘油酯對冷應(yīng)激肉雞抗氧化影響方面的研究尚未見報道。研究表明，橄欖油中含有多種抗氧化劑，橄欖油酚類化合物具有抗氧化、抗炎、抗菌的作用[20-21]。本試驗研究表明，冷應(yīng)激顯著降低了肉雞血液中SOD酶活力水平，而乳酸甘油酯及橄欖油組均顯著提高血液中SOD和GSH-Px酶活力水平，對MDA含量無顯著影響，表明在日糧中添加三乳酸甘油酯或以橄欖油替代日糧中豆油均能提高冷應(yīng)激肉雞的血液抗氧化能力。

4 結(jié)論

日糧中添加500 mg/kg三乳酸甘油酯或用橄欖油替代日糧中豆油可改善冷應(yīng)激肉雞血液生化指標，提高冷應(yīng)激肉雞血液的抗氧化能力。