孫盛明 朱 健* 戈賢平 江曉浚

(1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心，農(nóng)業(yè)部淡水漁業(yè)和種質(zhì)資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，無(wú)錫 214081;2.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)無(wú)錫漁業(yè)學(xué)院，無(wú)錫 214081)

生物絮團(tuán)技術(shù)(biofloc technology，BFT)被認(rèn)為是解決集約化養(yǎng)殖水質(zhì)污染的有效技術(shù)，利用這種養(yǎng)殖技術(shù)，可以實(shí)現(xiàn)水產(chǎn)養(yǎng)殖少換水甚至不換水，同時(shí)還維持了養(yǎng)殖水體生態(tài)的穩(wěn)定［1］。碳氮比一直是生物絮團(tuán)技術(shù)的主要研究熱點(diǎn)之一，控制合適的碳氮比是形成絮團(tuán)的必要條件。Avnimelech［2］建立假設(shè)模型計(jì)算得出當(dāng)養(yǎng)殖水體中碳氮比為15.75時(shí)，可以促進(jìn)微生物合成菌體蛋白，并有效去除養(yǎng)殖水體氨氮和亞硝酸鹽氮。團(tuán)頭魴(Megalobrama amblycephala)是我國(guó)的四大家魚之一，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中占有極為重要的地位。本實(shí)驗(yàn)室前期研究已經(jīng)證實(shí)，生物絮團(tuán)技術(shù)應(yīng)用于團(tuán)頭魴的養(yǎng)殖體現(xiàn)出飼料系數(shù)降低、水質(zhì)環(huán)境改善和生長(zhǎng)加快等綜合效應(yīng)［3］，而生物絮團(tuán)對(duì)團(tuán)頭魴腸道菌群結(jié)構(gòu)的調(diào)控作用未見(jiàn)專門報(bào)道。

長(zhǎng)期以來(lái)，研究者們主要通過(guò)純培養(yǎng)的方法對(duì)腸道菌群的構(gòu)成進(jìn)行研究。然而，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，目前研究人員越來(lái)越多的使用變性梯度凝膠電泳(denaturing gradient gel electrophoresis，DGGE)等方法對(duì)腸道中的微生物進(jìn)行全面的分析［3－6］。近年來(lái)，以454焦磷酸測(cè)序?yàn)榇淼男乱淮鷾y(cè)序技術(shù)憑借低成本、高通量、流程自動(dòng)化的優(yōu)勢(shì)為研究微生物群落結(jié)構(gòu)提供了新的技術(shù)平臺(tái)［7］，目前已應(yīng)用到人類、昆蟲和魚類等腸道菌群結(jié)構(gòu)的研究中［8－10］。本研究通過(guò)使用454焦磷酸測(cè)序技術(shù)同時(shí)結(jié)合PCR-DGGE技術(shù)研究零換水條件下養(yǎng)殖水體中碳氮比對(duì)生物絮團(tuán)形成和團(tuán)頭魴腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響，為生物絮團(tuán)技術(shù)在淡水魚養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)Avnimelech［2］總結(jié)的生物絮團(tuán)養(yǎng)殖系統(tǒng)的碳氮比公式計(jì)算得出碳源葡萄糖的添加量，根據(jù)飼料投喂量調(diào)整葡萄糖的添加量以保持各組的碳氮比，試驗(yàn)中的碳氮比指添加物質(zhì)(飼料和葡萄糖)的碳元素與氮元素的質(zhì)量比。水體中碳、氮含量的計(jì)算公式如下:

式中:ΔC為碳含量;ΔCH為所需要的碳水化合物的添加量;%C為碳水化合物中碳的百分含量;ΔN為氮含量;feed為每天投喂給團(tuán)頭魴的飼料量;%N feed為飼料中的氮的百分含量;%N excretion為團(tuán)頭魴的排泄物中氮的百分含量。

根據(jù)上述計(jì)算方法推算，本試驗(yàn)設(shè)置了5個(gè)碳氮比組，其碳氮比分別為8(CN8組，設(shè)為對(duì)照組)、12(CN12組)、16(CN16組)、20(CN20組)、24(CN24組)，碳源葡萄糖的添加方式為每次投喂飼料后1 h，把投喂的碳源與少量養(yǎng)殖水體混合攪拌，全池均勻潑灑。

1.2 試驗(yàn)魚與飼養(yǎng)管理

養(yǎng)殖試驗(yàn)在中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心大浦試驗(yàn)基地進(jìn)行，試驗(yàn)所用團(tuán)頭魴由中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心南泉試驗(yàn)基地提供，馴化14 d后，將300尾體質(zhì)健康、規(guī)格一致的團(tuán)頭魴幼魚隨機(jī)分入15個(gè)室內(nèi)水泥池(1.0 m×4.0 m×0.6 m)，平均水深 0.4 m，放養(yǎng)密度為20尾/池。將15個(gè)水泥池隨機(jī)分為5組，每組設(shè)置3個(gè)平行，每個(gè)水泥池中設(shè)置微孔增氧管，置于水泥池的底部，微孔增氧管通過(guò)無(wú)規(guī)共聚聚丙烯管(PPR管)與池邊一個(gè)5 kW的鼓風(fēng)機(jī)相連接，保持連續(xù)充氣。養(yǎng)殖期間每天定時(shí)投喂3次團(tuán)頭魴商品飼料(粗蛋白質(zhì)含量為30%)，每天定量投食，日投飼量為團(tuán)頭魴體質(zhì)量的3%左右，每周根據(jù)攝食和生長(zhǎng)情況作適當(dāng)調(diào)整。試驗(yàn)期間不換水，只補(bǔ)充因滲漏、蒸發(fā)及采樣而丟失的水量。試驗(yàn)期間24 h不間斷供氧，期間水溫為18～24℃，pH 為 7.7～8.5，溶解氧濃度＞5 mg/L。養(yǎng)殖水源為經(jīng)過(guò)沉淀、過(guò)濾后的池塘水。試驗(yàn)過(guò)程中盡量減少人為干擾，防止對(duì)魚產(chǎn)生額外應(yīng)激，每日觀察魚攝食及死亡情況，發(fā)現(xiàn)死魚及時(shí)撈出稱重記數(shù)，并檢查死亡原因。

養(yǎng)殖周期8周，每隔1周采集水樣1次。采樣時(shí)，在09:00用1 L柱狀采水器在水泥池四角和中央采集水樣5 L，混合待用。取混合水樣550 mL，冷藏帶回實(shí)驗(yàn)室用于檢測(cè)相關(guān)水質(zhì)指標(biāo)。檢測(cè)指標(biāo)包括:氨氮(NH3-N)、亞硝酸鹽氮()及生物絮團(tuán)含量。生物絮團(tuán)含量測(cè)定用1 L柱狀采水器，分別于每組3個(gè)平行中取水樣3 L混合，再取混合水樣1 L倒入英霍夫錐形管中，靜止沉淀30 min后，根據(jù)英霍夫錐形管所標(biāo)刻度讀數(shù)。

1.3 樣品采集

在不同碳氮比組分別隨機(jī)挑選3尾魚，無(wú)菌采集腸道內(nèi)容物，裝入經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)處理過(guò)的 Eppendrorf管中，經(jīng)液氮預(yù)凍后，－80℃保存。

1.4 DNA提取和454焦磷酸測(cè)序及數(shù)據(jù)分析

分別提取不同碳氮比組中的腸道內(nèi)容物樣品DNA。DNA提取和PCR擴(kuò)增參照Z(yǔ)hang等［11］的方法。PCR產(chǎn)物割膠回收，測(cè)定DNA濃度。每組的3個(gè)生物學(xué)重復(fù)的PCR產(chǎn)物，分別取100 ng等量混合。由上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司通過(guò)高通量測(cè)序平臺(tái)454 GS FLT Titanium對(duì)樣品16S rRNA基因的V3區(qū)進(jìn)行測(cè)序。參照文獻(xiàn)［12－15］，將獲得的序列通過(guò)Mothur軟件，刪掉長(zhǎng)度小于200 bp的序列，根據(jù)DNA barcode將序列確定到每個(gè)樣品，并去除barcode和引物序列件。去雜后的數(shù)據(jù)與Sliva數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，利用Mothur軟件分別進(jìn)行二次去雜和去除嵌合體。將相似度大于97%的DNA序列歸為1個(gè)操作分類單元(OUT)，利用Mothur軟件對(duì)序列進(jìn)行OUT聚類，用于樣品間的相似性分析，并繪制樣品的稀疏曲線，評(píng)估不同樣品的多樣性。將序列提交至RDP數(shù)據(jù)庫(kù)得到每條序列的分類單元(RDP分類對(duì)屬的域值為0.5)，物種分類單元為6層(界、門、綱、目、科、屬)，并分析零換水養(yǎng)殖條件下不同碳氮比對(duì)團(tuán)頭魴魚種腸道菌群相對(duì)豐度的影響。

1.5 變性梯度凝膠電泳測(cè)定方法

1.5.1 16S rDNA-V3 可變區(qū)的 PCR 擴(kuò)增

本試驗(yàn)采取將DNA提取物稀釋100倍的純化方法。按文獻(xiàn)［16］提供的擴(kuò)增方法，采用帶GC夾(GC-clamp)細(xì)菌通用引物341F(5'－CCTACGGGAGGCAGCAG－3')和 534R(5'－ATTACCGCGGCTGCTGG－3')進(jìn)行細(xì)菌基因組DNA的擴(kuò)增，GC-clamp序列為 CGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGCGGGGGCACGGGG GGGGG，擴(kuò)增片段為細(xì)菌的16S rDNA的V3可變區(qū)。PCR擴(kuò)增采用50μL體系，其中包括:10×LAPCR Buffer(Mg2+Plus)5 μL，10 mmol/L dNTP 4μL，10μmol/L 上、下游引物各 1μL，5 U/μL LATaq DNA 聚合酶 0.5 μL，50 ng/μL 模板 DNA 2.0 μL，滅菌去離子水 37.5 μL。整個(gè)過(guò)程采用降落PCR模式(touchdown-PCR)，程序如下:94℃預(yù)變性5 min，94℃變性30 s，65℃退火30 s，72℃延伸90 s，之后每個(gè)循環(huán)退火溫度降低0.5℃，循環(huán)20次，在這個(gè)退火溫度下再進(jìn)行15個(gè)循環(huán)，72℃最終延伸5 min。擴(kuò)增產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。從瓊脂糖凝膠中回收純化PCR產(chǎn)物，采用大連寶生物工程公司的膠回收純化試劑盒(TaKaRa Agarose Gel DNA Purification Kit)進(jìn)行，過(guò)程參照試劑盒中的使用說(shuō)明進(jìn)行操作。

1.5.2 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物的 DGGE

將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物通過(guò)DGGE進(jìn)行分離，采用的凝膠變性梯度為35%～55%，濃度為8%的聚丙烯酰胺凝膠(化學(xué)變性劑為100%尿素7 mol/L和40%的丙烯酰胺)，在 1×TAE緩沖液中 150 V 60℃下電泳5 h，電泳完畢后采用銀染的方法進(jìn)行染色，銀染結(jié)束后利用凝膠成像儀觀察并記錄結(jié)果。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

部分試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件包中的單因素方差分析(one-way ANOVA)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，若差異顯著時(shí)，再進(jìn)行Tukey’s多重比較，顯著水平為 P＜0.05，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SE)表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 零換水條件下養(yǎng)殖水體中碳氮比對(duì)水質(zhì)的影響

由圖1可知，零換水條件下養(yǎng)殖水體中不同碳氮比形成的生物絮團(tuán)含量不同，CN20和CN24組生物絮團(tuán)含量高于其他組;各組氨氮和亞硝酸鹽氮含量在前期都出現(xiàn)了一個(gè)高峰，并均在第35天降到一個(gè)較低點(diǎn)，之后比較穩(wěn)定;不同養(yǎng)殖時(shí)間時(shí)CN20和CN24組氨氮和亞硝酸鹽氮含量均低于對(duì)照組。結(jié)果顯示，碳氮比≥16時(shí)，生物絮團(tuán)在一定程度上降低了水體中的氨氮和亞硝酸鹽氮含量，進(jìn)而改善了水質(zhì)。

圖1 各組養(yǎng)殖水體中生物絮團(tuán)、氨氮、亞硝酸鹽氮含量變化Fig.1 Changes of bioflocs，NH3-N andcontents in cultured water in different groups

2.2 零換水條件下養(yǎng)殖水體中碳氮比對(duì)團(tuán)頭魴腸道菌群多樣性的影響

圖2 為不同碳氮比組團(tuán)頭魴腸道菌群的稀疏曲線，橫坐標(biāo)代表隨機(jī)抽取的測(cè)序數(shù)據(jù)量，縱坐標(biāo)代表觀測(cè)到的OUT數(shù)。相同序列數(shù)時(shí)低碳氮比(CN8和 CN12組)比高碳氮比(CN16、CN20、CN24組)的OUT數(shù)多，表明零換水養(yǎng)殖條件下高碳氮比時(shí)團(tuán)頭魴腸道菌群多樣性低于低碳氮比時(shí)，說(shuō)明養(yǎng)殖水體中碳氮比能夠影響團(tuán)頭魴的腸道菌群的多樣性。

2.3 零換水條件下養(yǎng)殖水體中碳氮比對(duì)團(tuán)頭魴腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響

由表1可知，團(tuán)頭魴魚種腸道中厚壁菌門(Firmicutes)和變形菌門(Proteobacteria)為優(yōu)勢(shì)菌，二者占菌群總量的80%以上。各組團(tuán)頭魴腸道中放線菌門(Actinobateria)含量變化不顯著(P＞0.05)。與對(duì)照組相比，CN16和CN20組團(tuán)頭魴腸道厚壁菌門含量顯著增加(P＜0.05)，而梭桿菌門(Fusobacteria)和變形菌門含量顯著減少(P＜0.05)。對(duì)各組團(tuán)頭魴腸道中厚壁菌門進(jìn)行深入分析發(fā)現(xiàn)，在綱水平上其組成也各不相同(表2)。與對(duì)照組相比，CN16、CN20和CN24組團(tuán)頭魴腸道中梭菌綱(Clostridia)含量顯著減少(P＞0.05)，而芽孢桿菌綱(Baccilli)含量顯著增加(P＞0.05)。

圖2 各組團(tuán)頭魴的腸道菌群稀疏曲線分析Fig.2 Rarefaction curve analysis of intestinal microflora of blunt anout bream(Megalobrama amblycephala)in different groups

表1 各組團(tuán)頭魴的腸道菌群結(jié)構(gòu)Table 1 Intestinal microflora structure of blunt anout bream(Megalobrama amblycephala)in different group %

表2 各組團(tuán)頭魴腸道菌群中厚壁菌門在綱水平上的組成Table 2 Firmicutes composition by class in intestinal microflora of blunt anout bream(Megalobrama amblycephala)in different groups %

2.4 團(tuán)頭魴腸道細(xì)菌16Sr DNA DGGE指紋圖譜建立、聚類分析及相似系數(shù)分析

由圖3可知，比較團(tuán)頭魴腸道微生物16S rDNA V3可變區(qū)片段的DGGE指紋圖譜中各條帶的相對(duì)光密度發(fā)現(xiàn)，部分條帶光密度變化明顯受到不同養(yǎng)殖水體碳氮比的影響。有的條帶在各組中均出現(xiàn)，如條帶18;有的條帶只在對(duì)照組中出現(xiàn)，如條帶 1和 2，有的條帶只在試驗(yàn)組(CN12、CN16、CN20和 CN24組)中出現(xiàn)，如條帶 14、15和16。

圖3 不同碳氮比養(yǎng)殖條件下團(tuán)頭魴腸道細(xì)菌16S r DNA DGGE指紋圖譜Fig.3 Intestinal microflora 16S rDNA PCR-DGGE fingerprint of blunt anout bream(Megalobrama amblycephala)cultured in different C/N ratios

由圖4可知，不同碳氮比養(yǎng)殖條件明顯改變團(tuán)頭魴幼魚腸道的微生態(tài)環(huán)境，團(tuán)頭魴腸道樣品在聚類圖上各自聚為一簇，其中碳氮比較高的2個(gè)組(CN20和CN24組)相似性最高，聚為一類后再與CN16組聚為一類;碳氮比的較低的對(duì)照組與其他組相似性最低，說(shuō)明零換水養(yǎng)殖條件下適宜碳氮比能夠保持團(tuán)頭魴腸道細(xì)菌群落組成相對(duì)穩(wěn)定性。

圖4 不同碳氮比養(yǎng)殖條件下團(tuán)頭魴腸道菌群的聚類分析Fig.4 Cluster anlysis of intestinal microflora of blunt anout bream(Megalobrama amblycephala)cultured in different C/N ratios

3 討論

以色列學(xué)者Avbimelech系統(tǒng)地提出了養(yǎng)殖系統(tǒng)中投入的碳氮比對(duì)養(yǎng)殖系統(tǒng)水質(zhì)調(diào)控的生物絮團(tuán)反應(yīng)機(jī)制理論，并將生物絮團(tuán)技術(shù)應(yīng)用到實(shí)際生產(chǎn)中，有效降低了養(yǎng)殖水體中的氨氮以及亞硝酸氮含量［2］。自2001年起，美國(guó)南卡羅來(lái)納州已將生物絮團(tuán)技術(shù)應(yīng)用到海水對(duì)蝦的養(yǎng)殖系統(tǒng)中，不僅可以調(diào)節(jié)水質(zhì)，提高對(duì)蝦成活率，而且可以轉(zhuǎn)化殘餌糞便，降低飼料系數(shù)，在高密度對(duì)蝦養(yǎng)殖過(guò)程中效果尤為顯著［17－18］。近幾年，生物絮團(tuán)技術(shù)也應(yīng)用到羅非魚(Oreochromis niloticus)［19］、草魚(Ctenopharyngodon idellus)［20］和 鳙 (Aristichthys nobilis Richardson)［21］等淡水魚類養(yǎng)殖中，本實(shí)驗(yàn)室近期研究表明，草食性魚類團(tuán)頭魴能夠攝食生物絮團(tuán)作為魚類潛在的天然餌料，以降低魚類的飼料系數(shù)并促進(jìn)其生長(zhǎng)［22］。生物絮團(tuán)的形成需要依靠異養(yǎng)微生物，會(huì)消耗養(yǎng)殖水體的氨氮和亞硝酸鹽氮作為其生長(zhǎng)繁殖所需氮源，與此同時(shí)也需消耗大量有機(jī)碳源，合理的碳氮比是形成生物絮團(tuán)的必要條件［23］。本試驗(yàn)結(jié)果表明，團(tuán)頭魴養(yǎng)殖水體中適宜碳氮比能夠有效增加水體中生物絮團(tuán)含量，有效降低氨氮和亞硝酸鹽氮含量，故此，生物絮團(tuán)技術(shù)應(yīng)用于團(tuán)頭魴養(yǎng)殖適宜的碳氮比為≥16，該比值能促進(jìn)生物絮團(tuán)的形成，并能有效降低水中的氨氮、亞硝酸鹽氮含量，這與盧炳國(guó)等［20］對(duì)草魚的研究結(jié)果相一致。

夏耘等［24］報(bào)道，生物絮團(tuán)優(yōu)勢(shì)菌與草魚腸道內(nèi)容物細(xì)菌構(gòu)成上有相似之處。本研究發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)殖水體中不同碳氮比形成的生物絮團(tuán)對(duì)團(tuán)頭魴腸道內(nèi)容物中梭桿菌門和放線菌門含量無(wú)顯著影響，而顯著影響了厚壁菌門和變形菌門含量。當(dāng)養(yǎng)殖水體中碳氮比為16～20時(shí)，厚壁菌門含量顯著高于其他試驗(yàn)組，而變形菌門顯著低于其他試驗(yàn)組。芽孢桿菌綱是厚壁菌門的一綱，包含有芽孢桿菌目和乳桿菌目2目，其下包含有芽孢桿菌屬等革蘭氏陽(yáng)性菌，在維持動(dòng)物腸道健康中起重要作用。變形菌門是革蘭氏陰性細(xì)菌，是細(xì)菌中最大的一門，包括很多病原菌，如大腸桿菌、沙門氏菌、弧菌、螺桿菌等種類［25］。已有研究報(bào)道，芽孢桿菌(Bacillus)為絮團(tuán)培養(yǎng)至10 d時(shí)的特異菌，也是一類重要的產(chǎn)絮菌［26－27］。沈斌乾等［28］研究發(fā)現(xiàn)，芽孢桿菌能改善養(yǎng)殖用水水質(zhì)，作為飼料添加劑使用時(shí)能促進(jìn)養(yǎng)殖動(dòng)物生長(zhǎng)，提高機(jī)體免疫及抗病能力。值得關(guān)注的是，本研究采用焦磷酸測(cè)序法發(fā)現(xiàn)了團(tuán)頭魴腸道中存在藍(lán)菌門，藍(lán)菌又稱藍(lán)藻、藍(lán)細(xì)菌、藍(lán)綠菌或藍(lán)綠藻，原被認(rèn)為是一門藻類植物，后有人把藍(lán)菌劃為原核生物的一門，稱為藍(lán)菌門(Cyanobacteria)［25］，這或許與團(tuán)頭魴的草食食性相關(guān)。由此可見(jiàn)，整個(gè)腸道菌群的數(shù)量和適當(dāng)?shù)谋壤龑?duì)于維持腸道內(nèi)環(huán)境微生態(tài)平衡以及魚類的腸道健康等有重要意義，而團(tuán)頭魴腸道菌群結(jié)構(gòu)隨養(yǎng)殖水體環(huán)境的變化而改變，這與Wu等［15］對(duì)草魚的研究結(jié)果相吻合。

變性凝膠電泳圖譜分析結(jié)果也發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)殖水體中適宜的碳氮比形成的生物絮團(tuán)能夠改變團(tuán)頭魴的腸道菌群結(jié)構(gòu)。江曉浚等［22］發(fā)現(xiàn)，團(tuán)頭魴能夠攝食生物絮團(tuán)，并且添加不同碳源形成的生物絮團(tuán)顯著影響團(tuán)頭魴生長(zhǎng)、消化酶活性和抗氧化能力，故此推測(cè)，團(tuán)頭魴通過(guò)攝食不同含量生物絮團(tuán)改變了其腸道菌群結(jié)構(gòu)。不同碳氮比形成的生物絮團(tuán)存在著特定的生態(tài)位群落結(jié)構(gòu)，陶金莉等［29］提供了一個(gè)比較合理的解釋，芽孢桿菌屬通過(guò)寡肽介導(dǎo)的群體效應(yīng)實(shí)現(xiàn)自身能力維持及孢子的形成，氣單胞菌屬通過(guò)群體效應(yīng)產(chǎn)生胞外蛋白酶，并能促進(jìn)生物膜的形成，對(duì)生物絮團(tuán)結(jié)構(gòu)的維持可能起到一定作用。由此可見(jiàn)，零換水養(yǎng)殖水體中不同含量的生物絮團(tuán)對(duì)維持團(tuán)頭魴腸道內(nèi)環(huán)境微生態(tài)平衡具有重要作用。

4 結(jié) 論

①養(yǎng)殖水體中碳氮比增加，團(tuán)頭魴腸道菌群多樣性降低，團(tuán)頭魴腸道中厚壁菌門含量顯著增加，梭桿菌門和變形菌門含量顯著降低。

②以團(tuán)頭魴腸道菌群結(jié)構(gòu)為評(píng)價(jià)指標(biāo)，零換水條件下團(tuán)頭魴養(yǎng)殖水體中適宜碳氮比為16～20。

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