華建江，何維娜，杜紀(jì)坤，梁巧玲，徐志康，黃江浩，鐘 瑜

枸櫞酸鈉粉劑抗凝管的制備及其應(yīng)用評(píng)價(jià)

華建江，何維娜，杜紀(jì)坤，梁巧玲，徐志康，黃江浩，鐘 瑜

目的：制備并評(píng)價(jià)枸櫞酸鈉粉劑抗凝管在糾正乙二胺四乙酸（EDTA）依賴性假性血小板減少癥（EDTA-dependent pseudothrombocytopenia，EDTA-PTCP）中的應(yīng)用效果。方法：取109 mmol/L枸櫞酸鈉三鈉溶液至玻璃管經(jīng)56℃烘干制成各含量的粉劑抗凝管，用儀器法、光學(xué)法、手工法和染色法檢測(cè)238例不同抗凝劑標(biāo)本的血小板（PLT）結(jié)果，分析其與枸櫞酸鈉水劑、肝素標(biāo)本抗凝效果的異同。結(jié)果：50例正常人12.8 mg含量枸櫞酸鈉粉劑抗凝標(biāo)本的PLT接近EDTA-K2標(biāo)本結(jié)果，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；采血量為200～600 μL時(shí)，枸櫞酸鈉粉劑標(biāo)本的PLT與EDTA-K2標(biāo)本結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；除白細(xì)胞（WBC）外，枸櫞酸鈉粉劑標(biāo)本的PLT、紅細(xì)胞（RBC）、血紅蛋白（HGB）與EDTA-K2標(biāo)本結(jié)果相一致（P＞0.05）；28例EDTA-PTCP患者枸櫞酸鈉粉劑、枸櫞酸鈉水劑、肝素抗凝標(biāo)本的PLT分別為（193.89± 50.62）×109/L、（164.86±48.11）×109/L和（108.79±29.33）×109/L，與手工法結(jié)果（199.14±47.99）×109/L相比，前者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），后兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；枸櫞酸鈉粉劑抗凝標(biāo)本24 h內(nèi)PLT結(jié)果穩(wěn)定，鏡下未見血小板聚集現(xiàn)象。結(jié)論：自制枸櫞酸鈉粉劑抗凝管的最佳抗凝含量為12.8 mg/管，最佳采血量為200～600 μL，在糾正EDTA-PTCP中效果優(yōu)于枸櫞酸鈉水劑抗凝管和肝素抗凝管。

枸櫞酸鈉；干粉；EDTA依賴性假性血小板減少癥

0 引言

乙二胺四乙酸（EDTA）依賴性假性血小板減少癥（EDTA-dependent pseudothrombocytopenia，EDTA-PTCP）在近幾年屢見報(bào)道，其發(fā)生率（0.07%～0.20%）[1-2]雖然不高，但EDTA-PTCP一旦出現(xiàn)，極易導(dǎo)致臨床誤診誤治，存在較大的醫(yī)療風(fēng)險(xiǎn)。用枸櫞酸鈉真空抗凝管采血行血小板計(jì)數(shù)是糾正EDTAPTCP的有效方法之一，然而此管所含抗凝劑為0.3 mL的枸櫞酸鈉溶液，占3 mL靜脈血總體積的10%，用其采血計(jì)數(shù)血小板必然導(dǎo)致結(jié)果偏低，且無(wú)法應(yīng)用于靜脈采血困難的嬰幼兒EDTA-PTCP的排查。為解決上述問(wèn)題，本研究將制備出的枸櫞酸鈉粉劑抗凝管應(yīng)用于臨床，嘗試確定其最佳抗凝濃度，并探討其在糾正EDTA-PTCP中的實(shí)際應(yīng)用效果。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本資料

所有標(biāo)本均來(lái)自2012年1月至2013年12月深圳市寶安區(qū)沙井人民醫(yī)院住院及門診患者，分為正常對(duì)照組、血小板（PLT）增多組、真性PLT減少組和EDTA-PTCP組。

1.1.1 正常對(duì)照組

為體檢健康且無(wú)血小板相關(guān)疾病的志愿者150例，其中男78例，女72例，年齡19～71歲。

1.1.2 PLT增多組

隨機(jī)選取PLT＞300×109/L患者30例，其中男16例，女14例，年齡3～68歲。

1.1.3 真性PLT減少組

為疾病原因引起的血小板減少（EDTA鹽抗凝和枸櫞酸鹽抗凝血標(biāo)本測(cè)得的血小板均減少）。隨機(jī)選取PLT＜100×109/L患者30例，其中男13例，女17例，年齡4～65歲。

1.1.4 EDTA-PTCP組

定義為EDTA鹽抗凝血中EDTA誘導(dǎo)血小板中的特殊蛋白使血小板發(fā)生凝集，且在全自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀上檢測(cè)時(shí)，其血小板計(jì)數(shù)發(fā)生假性減少（涂片鏡檢可見血小板聚集、經(jīng)更換不同抗凝劑重測(cè)血小板計(jì)數(shù)正常、患者無(wú)出血傾向）的現(xiàn)象。2 a共檢出28例EDTA-PTCP患者，其中男17例、女11例，年齡4個(gè)月～72歲（4個(gè)月～1歲6例，其余22例為成人）。疾病分布為惡性腫瘤8例、上呼吸道感染5例、血小板減少3例、晚期妊娠2例、貧血3例、手外傷1例、高血壓1例、電擊傷1例、肺炎1例、體檢3例。

1.2 方法

1.2.1 儀器和試劑

Sysmex XE-2100全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀及其原裝試劑、質(zhì)控品和校準(zhǔn)品（日本希森美康公司）；血細(xì)胞計(jì)數(shù)板（江蘇海門市天龍實(shí)驗(yàn)器材廠）；CX31顯微鏡（日本Olympus公司）；101-1型電熱鼓風(fēng)干燥箱（江蘇通州凌云電器廠）；枸櫞酸鈉三鈉（Na3C6H5O7· 2H2O，分析純，上海試劑一廠）；草酸銨（北京化學(xué)試劑公司），草酸銨稀釋液按照第3版《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》配制；瑞氏-吉姆薩染色液（珠海貝索公司）；EDTA-K2真空抗凝管（深圳美瑞公司）；肝素鋰真空抗凝管（廣州陽(yáng)普公司）；枸櫞酸鈉真空抗凝管（或稱枸櫞酸鈉水劑抗凝管，美國(guó)BD公司）。

1.2.2 枸櫞酸鈉粉劑抗凝管的制備

準(zhǔn)確稱取分析純的枸櫞酸鈉三鈉（Na3C6H5O7· 2H2O）16 g完全溶于500 mL的蒸餾水中，配制成109 mmol/L的枸櫞酸鈉溶液，分別取200、300、400、500 μL溶液加于一批干燥、潔凈的玻璃小試管內(nèi)（每管分別含6.4、9.6、12.8、16.0 mg枸櫞酸鈉），置于101-1型電熱鼓風(fēng)干燥箱56℃、數(shù)小時(shí)均勻烘干后備用。

1.2.3 儀器法

在使用Sysmex配套試劑且室內(nèi)質(zhì)控在控的基礎(chǔ)上，將Sysmex XE-2100、XS-1000i分析儀全血細(xì)胞的計(jì)數(shù)結(jié)果校準(zhǔn)到差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，嚴(yán)格按儀器操作規(guī)程對(duì)靜脈采血標(biāo)本（血量＜300 μL用XS-1000i，≥300 μL用XE-2100）進(jìn)行全血細(xì)胞計(jì)數(shù)。

1.2.4 光學(xué)法

光學(xué)法是用Sysmex XE-2100全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀的網(wǎng)織紅計(jì)數(shù)通道進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)的方法。其原理是用半導(dǎo)體激光加熒光染料染色血小板后儀器可準(zhǔn)確計(jì)數(shù)血小板。此法在很大范圍內(nèi)與衛(wèi)生部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)血小板的參考方法相關(guān)性良好[3]，因此，本研究將光學(xué)法的血小板計(jì)數(shù)結(jié)果作為確定枸櫞酸鈉粉劑抗凝管最佳抗凝含量及最佳采血量的參考值。

1.2.5 手工法

采集新鮮指血20 μL，加入加有0.38 mL草酸銨稀釋液的試管中，充分混勻，注入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板內(nèi)，靜置15 min后，置于顯微鏡下目視計(jì)數(shù)PLT。血小板手工計(jì)數(shù)由本室工作經(jīng)驗(yàn)超過(guò)8 a且具有中級(jí)以上技術(shù)職稱的技術(shù)人員嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行，每份標(biāo)本計(jì)數(shù)2次（誤差控制在5%以內(nèi)），結(jié)果取其均值。將此結(jié)果作為EDTA-PTCP患者PLT計(jì)數(shù)的參考值。

1.2.6 染色法

用EDTA-K2、枸櫞酸水劑和枸櫞酸粉劑抗凝標(biāo)本制成血涂片，待其自然干燥后，進(jìn)行瑞氏-吉姆薩染色，在顯微鏡下觀察抗凝5 min、2 h、24 h后血小板形態(tài)和聚集情況。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料數(shù)值用±s表示，組間比較采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 枸櫞酸鈉粉劑抗凝管最佳抗凝濃度的確定

早上空腹采集50例正常人靜脈血，加入4種含量（6.4、9.6、12.8、16.0 mg）的枸櫞酸鈉粉劑抗凝管（0.4 mL/管）和EDTA-K2真空抗凝管（2 mL/管），充分混勻，用儀器法檢測(cè)枸櫞酸鈉粉劑抗凝管標(biāo)本的PLT，用光學(xué)法檢測(cè)EDTA-K2抗凝標(biāo)本的PLT。以光學(xué)法結(jié)果為PLT的參考值，找到與光學(xué)法結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的那組枸櫞酸鈉粉劑抗凝管相應(yīng)濃度為其最佳抗凝濃度，結(jié)果見表1。

表1 不同濃度枸櫞酸鈉粉劑抗凝管與EDTA-K2抗凝管PLT計(jì)數(shù)結(jié)果比較（±s）

表1 不同濃度枸櫞酸鈉粉劑抗凝管與EDTA-K2抗凝管PLT計(jì)數(shù)結(jié)果比較（±s）

抗凝管種類 n PLT（×109/L） t P EDTA-K2真空抗凝管 50 271.89±85.55 6.4 mg枸櫞酸鈉粉劑抗凝管 50 235.82±89.95 -3.031 9.6 mg枸櫞酸鈉粉劑抗凝管 50 246.67±94.53 -2.624 12.8 mg枸櫞酸鈉粉劑抗凝管 50 274.64±88.62 -0.794 16.0 mg枸櫞酸鈉粉劑抗凝管 50 252.47±93.57 -2.406 0.013（＜0.05）0.026（＜0.05）0.450（＞0.05）0.038（＜0.05）

由表1可見，枸櫞酸鈉粉劑抗凝管的最佳抗凝濃度為12.8 mg/管。

2.2 枸櫞酸鈉粉劑抗凝管標(biāo)本最佳采血量范圍的確定

早上空腹采集50例正常人靜脈血，分別加100、150、200、300、400、500、600、700、800 μL至12.8 mg/管的枸櫞酸鈉粉劑抗凝管，另加2 mL至EDTA-K2真空抗凝管，充分混勻，用儀器法在Sysmex XS-1000上檢測(cè)枸櫞酸鈉粉劑抗凝血標(biāo)本PLT，用光學(xué)法檢測(cè)EDTA-K2抗凝標(biāo)本的PLT。找到與光學(xué)法PLT結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的那組采血量為粉劑抗凝管的最佳采血量，結(jié)果見表2。由表2可見，枸櫞酸鈉粉劑抗凝管標(biāo)本的最佳采血量為200～600 μL。

表2 不同采血量枸櫞酸鈉粉劑抗凝管與EDTA-K2抗凝管PLT計(jì)數(shù)結(jié)果比較（±s）

表2 不同采血量枸櫞酸鈉粉劑抗凝管與EDTA-K2抗凝管PLT計(jì)數(shù)結(jié)果比較（±s）

采血量/μL n PLT（×109/L） t P 2000（EDTA-K2真空抗凝管） 50 229.65±46.35 100（枸櫞酸鈉粉劑抗凝管） 50 201.45±44.47 -9.437 0.000（＜0.01）150（枸櫞酸鈉粉劑抗凝管） 50 214.37±44.95 -6.224 0.000（＜0.01）200（枸櫞酸鈉粉劑抗凝管） 50 225.00±43.64 -2.003 0.058（＞0.05）300（枸櫞酸鈉粉劑抗凝管） 50 231.47±46.66 -0.922 0.368（＞0.05）400（枸櫞酸鈉粉劑抗凝管） 50 228.00±45.34 -0.903 0.378（＞0.05）500（枸櫞酸鈉粉劑抗凝管） 50 227.95±46.76 -0.732 0.473（＞0.05）600（枸櫞酸鈉粉劑抗凝管） 50 227.05±44.32 -1.525 0.144（＞0.05）700（枸櫞酸鈉粉劑抗凝管） 50 216.23±46.51 -5.586 0.008（＜0.01）800（枸櫞酸鈉粉劑抗凝管） 50 206.61±47.38 -6.786 0.000（＜0.01）

2.3 枸櫞酸鈉粉劑抗凝管標(biāo)本全血細(xì)胞計(jì)數(shù)的結(jié)果評(píng)價(jià)

分別用枸櫞酸鈉粉劑抗凝管（12.8 mg/管）、枸櫞酸鈉水劑抗凝管和EDTA-K2真空抗凝管采集110例（30例真性血小板減少患者、50例正常人和30例血小板增多患者）靜脈血標(biāo)本，用儀器法檢測(cè)枸櫞酸鈉抗凝標(biāo)本的白細(xì)胞（WBC）、紅細(xì)胞（RBC）、血紅蛋白（HGB）和PLT結(jié)果，用光學(xué)法檢測(cè)EDTA-K2抗凝標(biāo)本結(jié)果，以光學(xué)法結(jié)果為參考值，結(jié)果見表3。結(jié)果顯示，枸櫞酸鈉粉劑抗凝標(biāo)本除WBC結(jié)果稍高外（P＜0.05），PLT、RBC、HGB結(jié)果均與于EDTA-K2抗凝標(biāo)本的結(jié)果相一致，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而枸櫞酸鈉水劑抗凝標(biāo)本由于受抗凝劑溶液體積的影響，其全血細(xì)胞結(jié)果均明顯低于參考值，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.4 EDTA-PTCP患者不同抗凝劑標(biāo)本PLT計(jì)數(shù)的結(jié)果比較

表3 3種抗凝劑標(biāo)本全血細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果的比較（±s）

表3 3種抗凝劑標(biāo)本全血細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果的比較（±s）

注：與EDTA-K2標(biāo)本結(jié)果相比，*P＜0.05，**P＜0.01；與枸櫞酸鈉粉劑標(biāo)本結(jié)果相比，△P＜0.01

檢測(cè)項(xiàng)目 WBC（×109/L）RBC（×1012/L）枸櫞酸鈉粉劑抗凝管8.39±2.19* 4.34±0.41 HGB/（g·L-1）127.33±15.20 PLT（×109/L）251.53±68.35枸櫞酸鈉水劑抗凝管6.93±1.67**△ 3.96±0.37**△115.47±14.47**△218.53±56.61**△EDTA-K2真空抗凝管7.63±1.96 4.34±0.41126.53±15.20257.02±72.28

用4種抗凝管采集28例EDTA-PTCP患者靜脈血，用儀器法檢測(cè)其PLT數(shù)量，以新鮮末梢血標(biāo)本的手工法結(jié)果為參考值，結(jié)果見表4。結(jié)果顯示，枸櫞酸鈉粉劑抗凝標(biāo)本的PLT結(jié)果最接近手工法的參考值，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其抗凝效果優(yōu)于枸櫞酸鈉真空抗凝管和肝素抗凝管。

表4 28例EDTA-PTCP患者不同抗凝劑采血標(biāo)本的PLT計(jì)數(shù)結(jié)果比較（±s）

表4 28例EDTA-PTCP患者不同抗凝劑采血標(biāo)本的PLT計(jì)數(shù)結(jié)果比較（±s）

標(biāo)本類型 方法 PLT（×109/L） t P新鮮末梢血標(biāo)本 手工法 199.14±47.99 EDTA-K2真空抗凝管標(biāo)本 儀器法 054.07±23.55 -15.001 0.000（＜0.01）肝素鋰真空抗凝管標(biāo)本 儀器法 108.79±29.33 -15.862 0.000（＜0.01）枸櫞酸鈉水劑抗凝管標(biāo)本 儀器法 164.86±48.11 -11.163 0.000（＜0.01）枸櫞酸鈉粉劑抗凝管標(biāo)本 儀器法 193.89±50.62 0-1.761 0.090（＞0.05）

選擇多例住院EDTA-PTCP患者，用儀器法檢測(cè)4種抗凝標(biāo)本的PLT結(jié)果，以手工法的檢測(cè)結(jié)果作參考，觀察各種抗凝標(biāo)本PLT結(jié)果在不同檢測(cè)時(shí)間（24 h內(nèi)）的變化趨勢(shì)，結(jié)果大致相近。選擇其中1例患者（男，63歲），采用手工法檢測(cè)PLT為232×109/L，結(jié)果如圖1所示。由圖1可知，EDTA-PTCP患者EDTA-K2標(biāo)本的PLT采血后在短時(shí)間內(nèi)應(yīng)迅速降低（由即時(shí)116×109/L降至10 min時(shí)的17×109/L），然后隨檢測(cè)時(shí)間的延長(zhǎng)（15 min～24 h），PLT計(jì)數(shù)結(jié)果仍維持在極低水平（約9×109/L）；肝素鋰抗凝標(biāo)本PLT結(jié)果在24 h內(nèi)變化不大，基本維持在100×109/L水平上；枸櫞酸鈉真空抗凝管標(biāo)本PLT在2 h內(nèi)結(jié)果較穩(wěn)定（約170×109/L），但低于參考值，2 h后開始下降；枸櫞酸鈉粉劑抗凝標(biāo)本在24 h內(nèi)PLT結(jié)果非常穩(wěn)定，基本維持在220×109/L水平，最接近手工

圖1 不同抗凝劑采血標(biāo)本PLT計(jì)數(shù)結(jié)果隨時(shí)間變化趨勢(shì)圖

2.5 EDTA-PTCP患者標(biāo)本在不同檢測(cè)時(shí)間的PLT結(jié)果比較法的參考值。

2.6 EDTA-PTCP患者3種方法抗凝5 min、2 h、24 h后血小板聚集情況

對(duì)上例EDTA-PTCP患者的3種方法抗凝（EDTA-K2、枸櫞酸鈉水劑和枸櫞酸鈉粉劑）標(biāo)本在抗凝5 min、2 h、24 h后進(jìn)行瑞氏-吉姆薩染色，用油鏡觀察血小板分布情況，如圖2所示。結(jié)果表明，EDTA-K2誘導(dǎo)血小板產(chǎn)生了快速且不可逆轉(zhuǎn)的強(qiáng)聚集，直接導(dǎo)致了患者EDTA-PTCP的發(fā)生；枸櫞酸鈉真空抗凝（水劑）標(biāo)本在一定時(shí)間內(nèi)（本例為2 h內(nèi)）有良好的抗凝效果，但隨后血小板也產(chǎn)生了較弱的聚集，導(dǎo)致PLT數(shù)量的進(jìn)一步下降；枸櫞酸鈉粉劑抗凝標(biāo)本在24 h內(nèi)PLT均呈單個(gè)散在分布，幾乎沒(méi)有觀察到聚集現(xiàn)象，顯示出很強(qiáng)的抗凝效果。

圖2 油鏡下3種方法抗凝5 min、2 h、24 h后血小板聚集圖（×1 000）

3 討論

近年來(lái)，EDTA依賴性假性血小板減少癥（EDTA-PTCP）引起臨床誤診誤治的報(bào)道逐漸增多[4-5]，其解決措施主要有更換非EDTA抗凝劑計(jì)數(shù)、血小板手工計(jì)數(shù)（草酸銨法）、血涂片染色計(jì)數(shù)、采用免疫標(biāo)記的流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)和血小板聚集體計(jì)數(shù)[6]等。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用較多的非EDTA抗凝劑是枸櫞酸鈉水劑，其采血標(biāo)本由于已稀釋不適于細(xì)胞計(jì)數(shù)[7]，雖可糾正EDTA-PTCP，但不能準(zhǔn)確計(jì)數(shù)PLT。用粉劑枸櫞酸鈉作抗凝劑采血或許能消除其體積對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響，目前國(guó)內(nèi)尚未有相關(guān)報(bào)道，本研究將就其粉劑抗凝管的制備及抗凝效果作出新的嘗試。

枸櫞酸鈉粉劑抗凝管的制備較為簡(jiǎn)單，關(guān)鍵在于其最佳抗凝比例的確定。本研究結(jié)果顯示，自制枸櫞酸鈉粉劑抗凝管的最佳抗凝含量為12.8 mg/管，最佳采血量為200～600 μL，當(dāng)用此抗凝比例（1 mg枸櫞酸鈉抗凝15.6～46.9 μL血）采血進(jìn)行全細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，正常人、真性血小板減少患者和血小板增多患者標(biāo)本的PLT、RBC、HGB均可獲得準(zhǔn)確的計(jì)數(shù)結(jié)果，僅WBC計(jì)數(shù)高于光學(xué)法結(jié)果，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而鏡檢未見血小板聚集對(duì)WBC計(jì)數(shù)造成的干擾，原因有待進(jìn)一步研究。枸櫞酸鈉水劑標(biāo)本由于受抗凝劑溶液體積的影響，其全血細(xì)胞結(jié)果均明顯低于參考值，證實(shí)了許洪鈞[7]的研究結(jié)果。近2 a沙井人民醫(yī)院血常規(guī)的日均檢測(cè)量700～1 000人，其中PLT＜100×109/L的有 5～15人。根據(jù)血細(xì)胞分析儀復(fù)檢規(guī)則[8-9]，對(duì)PLT減少的所有患者結(jié)果進(jìn)行了復(fù)核確認(rèn)，共檢出28例EDTA-PTCP患者，包括6例4個(gè)月～1歲的患兒。通過(guò)對(duì)28例EDTA-PTCP患者PLT的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，其肝素抗凝標(biāo)本PLT遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于手工法結(jié)果，說(shuō)明肝素抗凝標(biāo)本不適用于PLT計(jì)數(shù)；枸櫞酸鈉水劑抗凝標(biāo)本可糾正EDTA-PTCP，但其PLT結(jié)果亦明顯低于枸櫞酸鈉粉劑抗凝標(biāo)本及手工法結(jié)果，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其原因可能是抗凝比例不同引起：經(jīng)換算，枸櫞酸鈉水劑抗凝比例為1 mg枸櫞酸鈉抗凝312.5 μL血，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于枸櫞酸鈉粉劑的1∶15.6～1∶46.9，其抗凝標(biāo)本僅適合做凝血功能檢測(cè)而不適于做PLT計(jì)數(shù)。本研究在24 h內(nèi)對(duì)EDTA-PTCP患者不同抗凝劑標(biāo)本PLT結(jié)果隨檢測(cè)時(shí)間的變化作了持續(xù)觀察，同時(shí)選擇抗凝5 min、2 h、24 h后的血涂片染色鏡檢加以觀察血小板分布、聚集情況。結(jié)果顯示，EDTA-K2標(biāo)本的PLT在采血后幾分鐘內(nèi)就迅速降低，隨后長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)PLT仍維持在極低水平，鏡檢結(jié)果顯示EDTA-K2誘導(dǎo)血小板產(chǎn)生了快速且不可逆轉(zhuǎn)的強(qiáng)聚集；枸櫞酸鈉水劑抗凝標(biāo)本PLT在2 h內(nèi)結(jié)果較穩(wěn)定，PLT沒(méi)有發(fā)生聚集，但在2 h后PLT開始下降，鏡檢發(fā)現(xiàn)了小簇狀聚集的PLT，與鄺妙歡[10]的研究結(jié)果一致。進(jìn)一步的研究表明[11]，離體2 h后血小板表面糖蛋白PAC-1、CD62P、CD63及凝血酶敏感蛋白（TSP）表達(dá)量明顯增加，血小板活化后導(dǎo)致了其聚集性的增加；枸櫞酸鈉粉劑抗凝標(biāo)本在24h內(nèi)PLT結(jié)果非常穩(wěn)定，與手工法的結(jié)果基本一致，涂片血小板均呈單個(gè)散在分布，幾乎沒(méi)有觀察到聚集現(xiàn)象，顯示出很強(qiáng)的抗凝效果。

EDTA-PTCP的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，可能與纖維蛋白原受體、糖蛋白（GPⅡb/Ⅲa）、血小板表面的隱匿性抗原有關(guān)[12-13]。周小棉等[14]報(bào)道了1例非常罕見的包括EDTA鹽、枸鹽酸鈉、肝素鋰、氟化鈉等多種抗凝劑所致的血小板假性減少癥患者，發(fā)現(xiàn)只有高濃度的丁胺卡那霉素才能抑制血小板聚集，足以說(shuō)明EDTA-PTCP形成原因的復(fù)雜性。在糾正EDTA-PTCP的主要方法中，免疫標(biāo)記的流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)和血小板聚集體計(jì)數(shù)因需要用到特殊儀器而限制了它們的應(yīng)用，血涂片染色計(jì)數(shù)則要求檢驗(yàn)人員具備血液學(xué)的相關(guān)知識(shí)，手工計(jì)數(shù)法作為血小板計(jì)數(shù)的參考方法，也存在精密度差、準(zhǔn)確度低等缺點(diǎn)，一般用于血小板計(jì)數(shù)的校準(zhǔn)。而自制枸櫞酸鈉粉劑抗凝管具有制備簡(jiǎn)單、計(jì)數(shù)準(zhǔn)確、所需標(biāo)本量少等優(yōu)點(diǎn)，在糾正EDTA-PTCP中效果顯著，尤其適用于靜脈采血困難嬰幼兒EDTA-PTCP的排查。然而，本研究尚屬初步研究，列入觀察的EDTA-PTCP患者例數(shù)不多，且血小板聚集受多種因素（如麻醉、抗血栓藥物的使用、手術(shù)、血小板功能缺陷等）影響，因而枸櫞酸鈉粉劑抗凝管糾正EDTA-PTCP的效果或許存在個(gè)體差異，但仍不失為一種簡(jiǎn)單、實(shí)用的方法。

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（收稿：2014-03-21 修回：2014-07-20）

Preparation of sodium citrate powder tubes for anticoagulation and evaluation of its clinical application

HUA Jian-jiang,HE Wei-na,DU Ji-kun,LIANG Qiao-ling,XU Zhi-kang,HUANG Jiang-hao,ZHONG Yu
（Department of Clinical Laboratory Medicine,Shenzhen Shajing Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University,Shenzhen 518104,Guangdong Province,China）

ObjectiveTo prepare sodium citrate powder tubes and evaluate its application in EDTA-dependent pseudothrombocytopenia(EDTA-PTCP).MethodsNa3C6H5O7·2H2O(109 mmol/L)of different volumes were added into different glass tubes and dried to powder at 56℃,respectively.The different tubes were used to deal with the blood samples. Four methods including apparatus method,optical method,manual method,and staining method were used to detect the PLT of 238 specimens,and the differences were compared between the anticoagulation effects with sodium citrate powder tubes,sodium citrate solution tubes and heparin lithium anticoagulant tubes.ResultsThe PLT of anticoagulant specimens (with 12.8 mg sodium citrate powder)for control(n=50)was close to the result of EDTA-K2method,and no significant difference was found between the two methods.The result of PLT was similar with that of EDTA-K2method when the blood volume for the anticoagulant specimens was between 200 and 600 μL.In control group,the PLT,RBC,and HGB of the anticoagulant specimens were similar with those by EDTA-K2method(P＞0.05)except the WBC.In the EDTAPTCP group(n=28),the PLT of sodium citrate powder tubes,sodium citrate solution tubes,and heparin lithium anticoagulant tubes were（193.89±50.62）×109/L,（164.86±48.11）×109/L,and（108.79±29.33）×109/L,respectively,and the result of manual method were(199.14±47.99)×109/L;no significant difference was found between the sodium citrate powder tube method and manual method,while significant difference was found between the sodium citrate solution tubes,heparin lithium anticoagulant tubes and manual method (P＜0.01).The result of PLT for the anticoagulant specimens was stable within 24 hours,and no platelet aggregation was observed.ConclusionThe best anticoagulation content of the self-manufactured sodium citrate powder tube is 12.8 mg per tube,and the best amount of blood sampling is between 200 and 600 μL. The self-manufactured sodium citrate powder tube has the accuracy in correcting EDTA-PTCP better than that of sodium citrate solution tubes and heparin lithium anticoagulant tubes.[Chinese Medical Equipment Journal，2015，36（1）：82-86]

sodium citrate;dry powder;EDTA-dependent pseudothrombocytopenia

R318.6；R558.2

A

1003-8868（2015）01-0082-05

10.7687/J.ISSN1003-8868.2015.01.082

深圳市寶安區(qū)科技計(jì)劃資助項(xiàng)目（2013143）

華建江（1973—），男，副主任技師，主要從事血液疾病檢驗(yàn)方面的研究工作，E-mail：hjianjiang13@163.com。

518104廣東深圳，深圳市寶安區(qū)沙井人民醫(yī)院檢驗(yàn)科（華建江，何維娜，杜紀(jì)坤，梁巧玲，徐志康，黃江浩，鐘 瑜）