高立芳， 黃德均， 蔣 安， 周 鵬， 張 健

(重慶市畜牧科學(xué)院，重慶 400015)

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牛胚胎移植效果的影響因素分析

高立芳， 黃德均， 蔣 安， 周 鵬， 張 健*

(重慶市畜牧科學(xué)院，重慶 400015)

影響牛胚胎移植妊娠率的因素很多。從供體牛、受體牛、操作人員的技術(shù)熟練程度以及移植后受體牛的飼養(yǎng)管理等方面對牛胚胎移植效果的影響因素進(jìn)行了分析。

牛；胚胎移植；妊娠率；影響因素

胚胎移植是指將優(yōu)良母畜的胚胎移植到生理環(huán)境相同的同種母畜子宮內(nèi)進(jìn)行孕育的過程。胚胎移植技術(shù)在國外已經(jīng)是一項比較成熟的動物快速繁育技術(shù)。在國內(nèi)，由于技術(shù)和管理上的問題，胚胎移植技術(shù)仍未得到廣泛應(yīng)用。在國內(nèi)，胚胎移植費(fèi)用高、移植妊娠率低等問題嚴(yán)重影響此技術(shù)的應(yīng)用和推廣。筆者對牛胚胎移植效果的影響因素進(jìn)行了簡要分析。

1 供體牛

1.1 供體牛的選擇

供體牛是生產(chǎn)胚胎的主要載體，因此供體牛的選擇至關(guān)重要。選擇供體牛看重的是供體牛的遺傳學(xué)價值，有優(yōu)良的基因，同時體況良好，繁殖性能強(qiáng)，無生殖疾病。選好供體牛后，應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，為其發(fā)情受孕生產(chǎn)胚胎做好體能儲備。

1.2 超排處理

在胚胎移植中，獲得大量可用胚胎的主要途徑就是超數(shù)排卵(簡稱“超排”)。理論上，經(jīng)超排處理后排出的卵子越多越好，而如果1次排出的卵子太多，往往會因為促性腺激素劑量過大而影響胚胎的質(zhì)量，導(dǎo)致受精率降低，同時胚胎的回收率也會有所降低。一般認(rèn)為，牛和羊1次排出10～15枚卵子的超排效果較為理想。影響超排反應(yīng)的因素也有很多，如供體牛的品種、遺傳特性、體況、年齡、季節(jié)、胎次、營養(yǎng)及超排使用的激素種類、超排程序、母牛卵巢所處的生理狀態(tài)和卵泡發(fā)育情況等。在超排激素使用方面，許多學(xué)者做了大量研究，研究結(jié)果也不盡相同。目前，大多使用FSH進(jìn)行超排，連續(xù)注射3～5 d，每天2次，劑量依次遞減，效果較好。秦殿武等[1]使用不同廠家生產(chǎn)的FSH對草原紅牛進(jìn)行超排處理，結(jié)果發(fā)現(xiàn)進(jìn)口FSH比國產(chǎn)FSH效果理想，但成本較高。李銘等[2]使用國產(chǎn)FSH和進(jìn)口FSH對牛進(jìn)行超排，發(fā)現(xiàn)超排效果無明顯差異，但進(jìn)口FSH的可用胚數(shù)和可用胚率都較高。王峰等[3]探討了不同品種、供體牛經(jīng)產(chǎn)與否、不同營養(yǎng)水平、重復(fù)超排間隔時間、FSH開始注射時間等因素對供體牛超排效果的影響，結(jié)果表明經(jīng)產(chǎn)供體牛的超排效果優(yōu)于青年牛；不同營養(yǎng)水平和FSH開始注射時間對供體牛超排效果的影響極顯著，而供體牛品種和重復(fù)超排間隔時間對供體牛超排效果的影響不顯著。權(quán)富生等[4]對青年母牛和經(jīng)產(chǎn)母牛超排的研究表明青年牛超排平均回收胚胎總數(shù)和可用胚數(shù)稍低于成年牛，但差異不顯著(P>0.05)，與王峰等[3]的研究結(jié)果不一致。超排效果主要決定于超排時卵巢上卵泡波所處的時間及可反應(yīng)卵泡數(shù)量。供體牛超排是在發(fā)情周期的9～14 d，其中10～12 d超排效果較為理想。劉水濤等[5]研究表明由于注射FSH時卵泡波所處的階段不同，使母牛的卵泡發(fā)育出現(xiàn)了不一致的情況，所以個體間存在很大差異。因此，不同的品種、不同個體對超排反應(yīng)差異極大，超排效果很不穩(wěn)定。這直接影響著胚胎移植技術(shù)的應(yīng)用與推廣。

1.3 精液和人工授精次數(shù)

精液對胚胎數(shù)量、胚胎質(zhì)量有較大影響。為了得到較多發(fā)育正常的胚胎，要求使用活率高、密度大的精液。

供體牛經(jīng)超排處理后，應(yīng)認(rèn)真觀察母畜發(fā)情表現(xiàn)，當(dāng)母牛接受其他牛爬跨時開始推算人工授精時間，一般在超排母牛發(fā)情后的12 h或24 h進(jìn)行人工授精。關(guān)于授精次數(shù)，一般進(jìn)行2～3次人工授精，2次授精時間間隔8～10 h可提高母牛卵子的受精率，從而可以提高可用胚胎的回收率。

1.4 胚胎因素

胚胎質(zhì)量是決定胚胎移植成敗的關(guān)鍵因素。目前，通過超排生產(chǎn)的體內(nèi)胚胎的移植妊娠率為30%～60%，高于體外受精的體外胚胎的移植妊娠率(20%～40%)。同時，不同胚齡對移植的位置要求也不同。手術(shù)法移植時，將受精卵至16-細(xì)胞的胚胎移植到輸卵管中，而將16-細(xì)胞到囊胚期的胚胎移植到子宮角內(nèi)。目前，大多數(shù)采用非手術(shù)法移植胚胎，通常是在供體發(fā)情后的第7(6～8)天采集胚胎，受體的移植時間是在發(fā)情后的第7天。胚胎發(fā)育階段應(yīng)與受體牛的發(fā)情期相吻合，即桑椹胚、早期囊胚、囊胚分別移植給發(fā)情第6、7、8天的受體牛。大量研究表明，無論是體內(nèi)生產(chǎn)的胚胎還是體外生產(chǎn)的胚胎，鮮胚的移植成功率比冷凍胚胎的移植成功率高10%左右。

2 受體牛

2.1 受體牛的選擇

受體牛為移植的胚胎提供子宮環(huán)境，移植后的胚胎要在其體內(nèi)完成附植過程，并依賴受體牛的營養(yǎng)供應(yīng)生長發(fā)育直到分娩。因此，受體牛的選擇與飼養(yǎng)管理對于提高受體牛的移植可利用率、移植后的妊娠率及產(chǎn)犢率方面起著至關(guān)重要的作用。付靜濤等[6]對受體牛的品種、年齡、胎次、體況以及同期發(fā)情時卵巢狀況進(jìn)行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)這些因素影響著胚胎移植妊娠率，但無顯著差異。他們認(rèn)為，受體牛應(yīng)盡量選擇年齡2～6周歲、1～3胎經(jīng)產(chǎn)牛、體況中等以上、無繁殖障礙的牛。

2.2 胚齡和受體的發(fā)情同步化程度

胚胎著床是一個復(fù)雜的生理過程，受體母畜排卵后為了受精卵著床，內(nèi)分泌系統(tǒng)與子宮內(nèi)環(huán)境發(fā)生相應(yīng)的變化，為接納胚胎做充分準(zhǔn)備。在受體牛方面，植入胚胎時其子宮內(nèi)環(huán)境是否與胚齡相同是保證移植成功的關(guān)鍵，而簡單易行的判斷方法就是觀察受體牛是否處于發(fā)情期的第7天。

2.3 受體牛的黃體發(fā)育狀況

關(guān)于受體牛黃體狀況對胚胎移植妊娠率的影響報道很多，而國內(nèi)外專家觀點不盡一致。理論上，將胚胎移植于有孕向發(fā)育子宮的任何一側(cè)均能正常妊娠，但是由于受黃體激素分泌因素的影響，以黃體側(cè)移植時能獲得較高的妊娠率。何光中等[7]研究了受體牛黃體等級和黃體位置對胚胎移植妊娠率的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)左側(cè)、右側(cè)卵巢的黃體移植妊娠率存在差異，其中右側(cè)卵巢的黃體移植妊娠率大于左側(cè)，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。付靜濤等[6]報道左側(cè)黃體妊娠率高于右側(cè)，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義。筆者認(rèn)為，若要提高胚胎移植妊娠率，在胚齡與受體發(fā)情同步化的前提下，盡量將質(zhì)量好的胚胎移植到黃體質(zhì)量好的受體牛。

3 操作人員的技術(shù)水平

胚胎移植工作中除了胚胎室內(nèi)熟練操作的專業(yè)人員外，同樣需要掌握專業(yè)技術(shù)的胚胎移植技術(shù)人員。操作人員的技術(shù)熟練程度也是影響胚胎移植妊娠率的重要因素之一。張震等[8]認(rèn)為胚胎移植所用時間長短也會影響胚胎移植妊娠率。因此，操作人員在短時間內(nèi)使移植槍順利通過子宮頸，將胚胎移植到子宮角1/3～1/2處，使子宮頸盡可能減少刺激，也是提高妊娠率的措施之一。

4 受體牛的飼養(yǎng)管理水平

受體牛的飼養(yǎng)管理工作絕不能忽視，特別是胚胎著床前期更應(yīng)重視和加強(qiáng)受體牛的飼養(yǎng)管理。將受體牛單獨分開飼養(yǎng)管理，避免不必要的爬跨行為，防止各種意外造成流產(chǎn)。同時，不能飼喂霉變飼料，不能飲用冰冷的水。

5 小結(jié)

總而言之，牛胚胎移植妊娠率受多種因素的影響。在生產(chǎn)中，應(yīng)盡可能地做好胚胎移植的各個環(huán)節(jié)，從而提高牛胚胎移植妊娠率。

[1] 秦殿武,王浩,王大廣,等.不同廠家FSH制劑對草原紅牛超排及預(yù)后效果觀察[J].吉林畜牧獸醫(yī), 2009,261(12):3-4.

[2] 李銘,吳柱月,羅蒙和,等.不同F(xiàn)SH種類、劑量對不同品種肉牛超排效果的試驗[J].中國畜禽業(yè), 2008(11):18-20.

[3] 王峰,黃春華,張東,等.多種因素對牛超數(shù)排卵效果影響的研究[J].中國農(nóng)學(xué)通報, 2013,29(17):19-24.

[4] 權(quán)富生,馬會民,張涌,等.紅安格斯牛超數(shù)排卵和胚胎移植受體同期發(fā)情處理[J].中國畜牧雜志,2011,47(15):19-22.

[5] 劉水濤,張光偉,張建軍,等.超排后不同發(fā)情時間對荷斯坦青年母?；厥章褦?shù)和有效胚胎率的影響[J].黑龍江動物繁殖, 2011,19(4):24-25.

[6] 付靜濤,朱士恩,李樹靜,等.影響受體牛冷凍移植胚胎效果的主要因素[J].中國畜牧雜志, 2008,44(17):14-17.

[7] 何光中,龔銘,張向鵬,等.受體牛黃體位置及黃體等級對胚胎移植效果的影響[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué),2008,36(3):108-109.

[8] 張震,蔣如明,劉瑞新,等`影響牛胚胎移植成功率的主要因素分析[J].河南畜牧獸醫(yī),2007,28(5):8-9.

重慶市重點攻關(guān)項目“重慶現(xiàn)代牛羊產(chǎn)業(yè)科技支撐示范工程戰(zhàn)略規(guī)劃與管理創(chuàng)新”(cstc2014zktjccxbx0021)。

高立芳(1976- )，女，重慶人，助理研究員，碩士，從事草食動物胚胎方面的研究。*通訊作者，研究員，博士，從事牧草栽培方面的研究。

2015-11-13

S 823

A

0517-6611(2015)35-174-02