耿薇，鄭敏燕，魏永生，張君才

（咸陽(yáng)師范學(xué)院化學(xué)與化工學(xué)院，陜西咸陽(yáng)712000）

GC-MS外標(biāo)法分析椰子果肉中的脂肪酸含量

耿薇，鄭敏燕，魏永生，張君才

（咸陽(yáng)師范學(xué)院化學(xué)與化工學(xué)院，陜西咸陽(yáng)712000）

通過(guò)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）測(cè)定椰子果肉中的脂肪酸含量，用外標(biāo)法進(jìn)行定量分析。椰子果肉脂肪酸種類(lèi)豐富，選取常見(jiàn)的4種脂肪酸，在椰子果肉中的含量：棕櫚酸＞油酸＞硬脂酸，亞油酸未檢出。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD（n=5）在2.03%～10.25%之間，樣品回收率測(cè)定在77.0%～110.0%之間。

外標(biāo)法；氣質(zhì)聯(lián)用；椰子果肉；脂肪酸

椰子（Cocosnucifera L.）是棕櫚科植物椰子樹(shù)的果實(shí)，為古老的栽培作物，中國(guó)種植椰子主要集中分布于海南省。椰子的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值很高，中醫(yī)認(rèn)為，椰肉味甘，性平，具有補(bǔ)益脾胃、殺蟲(chóng)消疳的功效，椰汁及椰肉中含有蛋白質(zhì)、糖類(lèi)、油脂類(lèi)、維生素類(lèi)以及鈣、磷、鐵等微量元素及礦物質(zhì)，是藥食兩用的佳品，脂肪酸就是其中之一。脂肪酸是人體不可缺少的營(yíng)養(yǎng)成分之一，與健康密切相關(guān)[1-3]。已有報(bào)道用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）的峰面積歸一法分析椰子果肉中的脂肪酸含量[3-4]，本文通過(guò)GC-MS的外標(biāo)法測(cè)定椰子果肉中的脂肪酸含量。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑

GCMS-QP2010氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀：日本島津SHIMADZU制作所；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：上海嘉鵬科技有限公司；10μL微量進(jìn)樣器：澳大利亞SGE；SartoriusCP124S電子天平：Max120 g，d=0.1mg；20μL～200μL移液器：Thermo Finnpipette；SB4200DTD超聲波清洗機(jī)：寧波新芝生物科技股份有限公司；SHB-IIIA循環(huán)水式多用真空泵：鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司；DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器：河南省予華儀器有限公司；HR7625飛利浦食品加工機(jī)；101型電熱鼓風(fēng)干燥箱：北京科偉永興儀器有限公司；標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)篩（40目，孔徑0.45mm）；索氏提取器。

椰子果肉；硫酸；乙醚；棕櫚酸（分析純）：西安化學(xué)試劑廠；硬脂酸（分析純）：天津化學(xué)試劑廠；油酸（分析純）：天津化學(xué)試劑廠；亞油酸（99%）：百靈威科技有限公司。

所用試劑均為分析純，水為二次蒸餾水。

1.2 分析條件

氣相色譜條件：J&W DB–WAX彈性石英毛細(xì)管色譜柱（30m×0.25mm×0.25μm）；載氣為高純氦He，純度≥99.999%；柱溫：130～240。柱初溫130℃，保持1min，以20℃/min升溫至230℃，保持5min，再以20℃/min升溫至240℃，保持6.5min，共18.00min。進(jìn)樣口溫度250℃；柱前壓84.6 kPa，柱流量1.00mL/min，分流比1∶30；用微量進(jìn)樣器進(jìn)樣1.0μL。

質(zhì)譜條件：EI離子源，離子源溫度200℃，GC-MS接口溫度200℃，電子能量70 eV，電子倍增器電壓0.97 kV[3]，質(zhì)量掃描范圍29m/z～450m/z，溶劑峰切除時(shí)間1.6min，質(zhì)譜檢測(cè)起測(cè)時(shí)間1.7min。

1.3 椰子油的提取

將椰子果肉烘干，粉碎，過(guò)40目篩。稱(chēng)取一定質(zhì)量的樣品，移入濾紙筒內(nèi)，以乙醚作溶劑，采用索式提取器，30℃恒溫水浴回流3 h。倒出上清液，抽濾，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸去乙醚后，得到椰子油樣品。

1.4 脂肪酸的甲酯化

準(zhǔn)確稱(chēng)量脂肪酸或樣品于25mL比色管中，準(zhǔn)確加入1%硫酸-甲醇溶液2.0mL，于70℃水浴加熱60min。再加正己烷定容至10mL，振蕩，加水至25mL，振蕩，靜置24 h，吸取上層脂肪酸甲酯，進(jìn)行GC-MS分析。

1.5 脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

選取常見(jiàn)的4種脂肪酸：棕櫚酸，硬脂酸，油酸，亞油酸。準(zhǔn)確稱(chēng)量4種脂肪酸的標(biāo)準(zhǔn)系列（7份）于25mL比色管中，按1.4配制成標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行GC-MS分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 4種脂肪酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖1為4種脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品的GC-MS總離子流圖，對(duì)GC-MS譜圖進(jìn)行鑒定和定量分析，應(yīng)用SHIMADZUGCMS solution Release2.10專(zhuān)業(yè)分析軟件。

圖1 4種脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品的GC-MS總離子流圖Fig.1 The TIC of GC-MS of the four standard substance of fatty acids

成分鑒定根據(jù)GC-MS檢測(cè)所得到的質(zhì)譜信息，用質(zhì)譜圖計(jì)算機(jī)檢索數(shù)據(jù)庫(kù)NIST 147數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)譜圖對(duì)照以及質(zhì)譜碎片對(duì)峰的分析，確定每一個(gè)組分的化學(xué)結(jié)構(gòu)[3]。采用計(jì)算機(jī)檢索與人工解析各峰相應(yīng)的質(zhì)譜圖，1-棕櫚酸，2-硬脂酸，3-油酸，4-亞油酸。

峰面積為縱坐標(biāo)，質(zhì)量為橫坐標(biāo)，繪制四種脂肪酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程及相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表1。

2.2 樣品分析結(jié)果

圖2為椰子果肉中脂肪酸分析的GC-MS總離子流圖，通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)譜圖對(duì)照以及質(zhì)譜碎片對(duì)峰的分析，確定1-棕櫚酸，2-硬脂酸，3-油酸。

表1 4種脂肪酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程及相關(guān)系數(shù)Table1 The calibration curve equation and correlation coefficent of the four fatty acids

圖2 椰子果肉中脂肪酸分析的GC-MS總離子流圖Fig.2 The TIC of GC-MS of fatty acids from the coconut flesh

根據(jù)峰面積及表1的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程得到椰子果肉中四種脂肪酸的含量見(jiàn)表2，棕櫚酸＞油酸＞硬脂酸，亞油酸未檢出。

表2 椰子果肉中4種脂肪酸的含量Table2 The content of four fatty acids from the coconut flesh mg/g

2.3 回收率與精密度

準(zhǔn)確稱(chēng)取樣品（5份）于25mL比色管中，分別都加入棕櫚酸、硬脂酸、油酸和亞油酸標(biāo)準(zhǔn)品，按1.4配制溶液，進(jìn)行GC-MS分析，得到樣品的回收率與精密度見(jiàn)表3。

表3 四種脂肪酸的回收率與精密度Table3 The recovery and precision of four fatty acids

由表3可知，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD（n=5）在2.03%～10.25%之間，樣品回收率測(cè)定在77.0%～110.0%之間。

3 結(jié)論

GC-MS外標(biāo)法分析椰子果肉中的脂肪酸含量，是絕對(duì)定量，需要標(biāo)準(zhǔn)樣品，做標(biāo)準(zhǔn)曲線，與GC-MS的峰面積歸一法相比，準(zhǔn)確度較高。

[1]吳惠勤,黃曉蘭,林曉珊,等.脂肪酸的色譜保留時(shí)間規(guī)律與質(zhì)譜特征研究及其在食品分析中的應(yīng)用[J].分析化學(xué),2007,35(7)：998-1003

[2]魏永生,鄭敏燕,耿薇,等.常用動(dòng)、植物食用油中脂肪酸組成的分析[J].食品科學(xué),2012,33(16)：188-193

[3]耿薇.新鮮椰子果肉脂肪酸成分的GC-MS分析[J].廣東化工, 2010,37(1)：122-123

[4] 楊春英,劉學(xué)銘,陳智毅,等.15種食用植物油脂肪酸的氣相色譜-質(zhì)譜分析[J].食品科學(xué),2013,34(6)：211-214

Fatty Acid Analysis of Coconut Flesh by GC-MS External Standard Method

GENG Wei，ZHENG Min-yan，WEI Yong-sheng，ZHANG Jun-cai
（College of Chemistry and Chemical Engineering，Xianyang Normal University，Xianyang712000，Shaanxi，China）

The fatty acid in coconut flesh were analyzed by GC-MS，using the external standard method to analyze quantitatively.There are different kinds of fatty acid in coconut flesh.The content of the four fatty acids in coconut flesh：Palmitic acid＞oleic acid＞stearic acid，Linoleic acid was not checked out.The RSD of results was between 2.03%and 10.25%.The recovery rate of sample was from 77.0%to110.0%.

external standard method；GC-MS；coconut flesh；fatty acid

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.06.025

2014-01-10

咸陽(yáng)師范學(xué)院專(zhuān)項(xiàng)科研基金項(xiàng)目（14XSYK017）

耿薇（1982—），女（漢），工程師，碩士，主要從事分析測(cè)試方面的研究工作。