蔡智慧，梁義娟，王偉明，劉金，張惠，張艷艷

（1.河北大學(xué)附屬醫(yī)院婦科，河北 保定 071000；2.河北省保定市望都縣醫(yī)院婦產(chǎn)科，河北 保定 071000）

不孕癥患者自身抗體含量及T細(xì)胞亞群的變化

蔡智慧1，梁義娟1，王偉明1，劉金1，張惠1，張艷艷2

（1.河北大學(xué)附屬醫(yī)院婦科，河北 保定 071000；2.河北省保定市望都縣醫(yī)院婦產(chǎn)科，河北 保定 071000）

目的分析不孕癥患者自身抗體含量及T細(xì)胞亞群的變化。方法選擇在該院接受治療的不孕癥患者117作為觀察組，其中原發(fā)性不孕49例、繼發(fā)性不孕68例，另取正常妊娠78例作為正常對照組，檢測各組患者的抗精子抗體（ASAb）、抗子宮內(nèi)膜抗體（AEmAb）、抗卵巢抗體（AVoAb）、抗滋養(yǎng)層抗體（ATAb）、抗人絨毛膜促性腺激素抗體（AhCGAb）及抗透明帶抗體（AZpAb）等自身抗體含量，T細(xì)胞亞群包括CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平，進一步分析自身抗體含量與T細(xì)胞亞群水平的相關(guān)性。結(jié)果原發(fā)性不孕組及繼發(fā)性不孕組患者的ASAb、AEmAb、AVoAb、ATAb、AhCGAb及AZpAb含量顯著高于正常對照組（P＜0.05）；血清CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平顯著低于正常對照組（P＜0.05），各組間CD8+水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；不孕癥患者的ASAb、AEmAb、AVoAb、ATAb、AhCGAb及AZpAb等自身抗體含量與CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論不孕癥患者的血清相關(guān)抗體含量大幅上升，T細(xì)胞亞群水平紊亂，可能直接參與不孕癥的發(fā)生、發(fā)展，有望成為治療不孕癥的新靶點。

不孕癥；自身抗體；T細(xì)胞亞群

不孕癥一直是困擾育齡期女性的世界性難題，在不孕癥病因中免疫因素占據(jù)重要地位，在較多不孕癥患者體內(nèi)檢測出高于正常濃度的自身抗體，推測其在不孕癥發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，若對自身抗體進行積極干預(yù)有望改變不孕癥結(jié)局。維持機體正常免疫功能狀態(tài)有賴于各種免疫細(xì)胞尤其是T細(xì)胞亞群水平的平衡，適度的免疫應(yīng)答可以確保機體組織不受損傷[1]。不孕癥患者除自身抗體水平存在異常，其T細(xì)胞亞群水平也出現(xiàn)紊亂。本次研究主要分析不孕癥患者自身抗體含量及T細(xì)胞亞群的變化，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 病例選擇

選取2013年10月-2014年10月在本院確診的不孕癥患者117例，年齡25～39歲，根據(jù)病史分為原發(fā)性不孕組（49例）、繼發(fā)性不孕組（68例）。另選取正常體檢的孕婦（無自然流產(chǎn)史）78例作為對照組，年齡23～38歲。各組在年齡、其他系統(tǒng)伴發(fā)疾病等方面比較差異無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。

1.2 標(biāo)本采集

入組患者晨起采集空腹靜脈血，選擇肘靜脈采集凝固血2 ml，3 000 r/min，5 min離心取上清后放入-20℃冰箱保存。

1.3 檢測儀器及試劑

流式細(xì)胞儀（美國BD公司，型號FACSCalibur），酶標(biāo)儀（美國Bio-tek，型號Multishan Go）。

1.4 檢測方法

自身抗體：采用酶聯(lián)免疫吸附法測定入組對象上清液中抗精子抗體（antisperm antibody，ASAb）、抗子宮內(nèi)膜抗體（antiendometrium antibody，AEmAb）、抗卵巢抗體（antiovarian antibodies，AVoAb）、抗滋養(yǎng)層抗體（antitrophoblast antibody，ATAb）、抗人絨毛膜促性腺激素抗體（humananti-chorionicgonadotropin-antibody，AhCGAb）及抗透明帶抗體（anti-pellucid zone antibody，AZpAb）含量。T細(xì)胞亞群：取入組對象外周靜脈血，EDTA抗凝后加入單克隆抗體CD3-PC5/CD4-FITC/CD8-PE，1 200 r/min離心去上清液后，流式細(xì)胞儀檢測1×104個淋巴細(xì)胞。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間用t檢驗、三組間用方差分析，相關(guān)性分析用一元線性回歸，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組患者的自身抗體含量

原發(fā)性不孕組及繼發(fā)性不孕組患者的ASAb、AEmAb、AVoAb、ATAb、AhCGAb及AZpAb含量顯著高于正常對照組（P＜0.05），見附圖。

圖1 各組患者的自身抗體ASAb、AEmAb、AVoAb、ATAb、AhCGAb及AZpAb含量

2.2 各組患者的T細(xì)胞亞群水平

原發(fā)性不孕組及繼發(fā)性不孕組的血清CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平顯著低于正常對照組（P＜0.05），各組間CD8+水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 各組患者的T細(xì)胞亞群水平比較（±s）

表1 各組患者的T細(xì)胞亞群水平比較（±s）

組別CD3+CD4+CD8+CD4+/CD8+原發(fā)性不孕組63.28±4.18 28.16±2.56 24.82±2.091.09±0.12繼發(fā)性不孕組65.92±4.73 25.39±2.1 8 25.77±2.1 51.03±0.09對照組77.92±6.16 42.04±5.11 27.13±2.621.62±0.21 F值6.399.280.196.38 P值0.0140.0030.1420.014

2.3 自身抗體含量與T細(xì)胞亞群水平的相關(guān)性

不孕癥患者的ASAb、AEmAb、AVoAb、ATAb、AhCGAb及AZpAb自身抗體含量與CD3+、CD4+及CD4+/CD8+水平呈負(fù)相關(guān)。見表2。

表2 自身抗體含量與T細(xì)胞亞群水平的相關(guān)性

3 討論

不孕癥的定義為有正常性生活且不采取避孕措施2年內(nèi)無法生育者。國際衛(wèi)生組織（WHO）的研究顯示，目前全球已婚夫婦中不孕不育者＞10%，其中女性因素占25%～35%。導(dǎo)致女性不孕的原因眾多，包括內(nèi)分泌紊亂、子宮結(jié)構(gòu)及功能異常、輸卵管炎癥堵塞及免疫因素等，其中免疫性不孕癥的治療難度較大，在不孕癥患者發(fā)病過程中占據(jù)重要地位，是目前臨床研究的重點及難點[2]。

ASAb、AEmAb、AVoAb、ATAb、AhCGAb及AZpAb是目前與不孕癥相關(guān)的最主要的6種抗體類型[3]。ASAb是精子抗原產(chǎn)生自身免疫反應(yīng)的產(chǎn)物，可以活化巨噬細(xì)胞并影響精子運行，已經(jīng)證實其具有抗生育及不孕作用[4]。AVoAb與抗原結(jié)合形成抗原抗體免疫復(fù)合物可以引起卵巢免疫損傷、卵子退化，產(chǎn)生抗生育效應(yīng)。AEmAb可以激活補體反應(yīng)，破壞子宮內(nèi)膜組織，降低子宮內(nèi)膜對孕卵的接受性及孕卵著床成功率。AhCGAb可以降低受孕率，增加胎孕死亡率[5]。

上述多種不孕相關(guān)自身抗體的聯(lián)合檢測，有望解開不孕癥之謎，同時為遠(yuǎn)期的不孕癥臨床治療提供新思路。上述研究對比各組患者的體內(nèi)相關(guān)抗體的陽性表達(dá)。結(jié)果顯示，原發(fā)性不孕組及繼發(fā)性不孕組患者的ASAb、AEmAb、AVoAb、ATAb、AhCGAb及AZpAb含量顯著高于正常對照組（P＜0.05），繼發(fā)性不孕組患者的以上抗體陽性率高于原發(fā)性不孕組，但是差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），提示以上自身抗體在不孕癥的發(fā)生過程中發(fā)揮重要作用，對其自身抗體進行干預(yù)有望成為治療不孕癥的有效手段之一。

有研究證實，正常的妊娠過程中，以Th2型細(xì)胞因子分泌為主，Th1處于相對抑制狀態(tài)，而當(dāng)Th1型細(xì)胞因子過度表達(dá)時將對妊娠組織產(chǎn)生毒性效應(yīng)，繼而發(fā)生不孕。機體維持正常的免疫狀態(tài)有賴于各種免疫細(xì)胞尤其是T細(xì)胞亞群的協(xié)作與制約，最終產(chǎn)生適度的免疫應(yīng)答，在發(fā)揮清除異物抗原效果的同時又可避免產(chǎn)生組織損傷[6]。CD4+與CD8+之間的恒定比例構(gòu)成細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)的重要環(huán)節(jié)，其平衡紊亂有可能導(dǎo)致機體免疫紊亂，產(chǎn)生針對自身抗原的自身抗體，無法有效清除免疫復(fù)合物，干擾相應(yīng)器官的正常生理功能，促進炎性介質(zhì)對輸卵管組織的損傷，最終產(chǎn)生不孕[7-8]。上述研究對各組患者的細(xì)胞免疫水平進行檢測。結(jié)果顯示，不孕癥患者與正常妊娠人群相比，CD4+水平與CD4+/CD8+比例大幅下降，其中繼發(fā)性不孕組患者上述指標(biāo)值下降幅度更大，提示其發(fā)生T細(xì)胞亞群比例失調(diào)，出現(xiàn)異常免疫調(diào)節(jié)。

在不孕癥患者中，相關(guān)自身抗體與T細(xì)胞亞群水平發(fā)生異常，在對不孕癥患者的自身抗體與T細(xì)胞亞群水平進行相關(guān)性分析后發(fā)現(xiàn)，不孕癥患者的ASAb、AEmAb、AVoAb、ATAb、AhCGAb及AZpAb自身抗體含量與CD3+、CD4+和CD4+/CD8+水平呈負(fù)相關(guān)，提示T細(xì)胞亞群水平異常的育齡期女性很可能存在自身抗體水平異常，應(yīng)早期進行自身抗體水平檢測并加以干預(yù)。不孕癥患者的自身抗體水平大幅上升，伴有T細(xì)胞亞群的紊亂，可能是造成女性不孕的直接原因，對以上相關(guān)因素進行及時干預(yù)有望改變不孕癥結(jié)局。

[1]TAN S,DIETERLE S,PECHLAVANIS S,et al.Thyroid autoantibodies per se do not impair intracytoplasmic sperm injection outcome in euthyroid healthy women[J].Eur J Endocrinol,2014, 170(4):495-500.

[2]鄧世英,石姜,聶紅.不孕相關(guān)抗體檢測女性不孕癥的實驗研究[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2014,35(15):2037-2040.

[3]BEHROUZ GF,FARZANEH GS,LEILA J,et al.Presence of auto-antibody against two placental protein's annexin A1 and vitamin D binding protein,in sera of women with pre-eclampsia[J]. J Reprod Immunol,2013,99(1/2):10-16.

[4]SLIWA L,MACURA B,MAJEWSKA-SZCZEPANIK M,et al. Lack of TCR alpha beta+CD8+and TCR gammadelta+lymphocytes ameliorates LPS induced orchitis in mice-preliminary histological observations[J].Folia Biol,2014,62(1):67-71.

[5]WAMBACH CM,PATEL SN,KAHN DA.Maternal and fetal factors that contribute to the localization of T regulatory cells during pregnancy[J].Am J Reprod Immunol,2014,71(5):391-400.

[6]GISPERT S,PARGANLIJA D,KLINKENBERG M,et al.Loss of mitochondrial peptidase clpp leads to infertility,hearing loss plus growth retardation via accumulation of CLPX,mtDNA and inflammatory factors[J].Hum Mol Genet,2013,22(24):4871-4887.

[7]RILEY MM,ZURENSKI MA,FRAZER LC,et al.The recall response induced by genital challenge with chlamydia muridarum protects the oviduct from pathology but not from reinfection[J]. Infect Immun,2012,80(6):2194-2203.

[8]王海芳,吳曉娟,何宗忠,等.女性不孕不育患者DNT細(xì)胞與T細(xì)胞亞群變化及意義[J].廣東醫(yī)學(xué),2014,35(23):3654-3658.

（童穎丹 編輯）

Evaluation of autoantibody and T cell subset content in female infertility patients

Zhi-hui CAI1,Yi-juan LIANG1,Wei-ming WANG1,Jin LIU1, Hui ZHANG1,Yan-yan ZHANG2
(1.Department of Gynecology,the Affiliated Hospital of Hebei University,Baoding, Hebei 071000,P.R.China;2.Department of Gynecology,the People's Hospital of Wangdu County,Baoding,Hebei 071000,P.R.China)

【Objective】To evaluate the autoantibody and T cell subset content in female infertility patients.【Methods】A total of 117 cases of female infertility patients in our hospital were chosen as observation group,with 49 cases of primary infertility and 68 cases of secondary infertility.At the same time 78 normal pregnant women were chosen as control group.The content of anti-sperm antibody(ASAb),anti-endometrial antibody(AEmAb),anti-ovarian antibody(AVoAb),anti-trophoblast antibody(ATAb),anti-human chorionic gonadotropin antibody(AhCGAb),anti-zona pellucida antibody(AZpAb),and T cell subset levels including CD3+,CD4+,CD8+and CD4+/CD8+were tested in both groups.The correlations between the autoantibody content and T cell subset levels were further analyzed.【Results】In the primary infertility group and secondary infertility group,ASAb,AEmAb,AVoAb,ATAb,AhCGAb and AZpAb content was significantly higher than that in the control group(P＜0.05)；the serum CD3+,CD4+and CD4+/CD8+levels were significantly lower than those in the control group(P＜0.05)；while CD8+level showed no significant difference between the groups(P＞0.05).Infertility patient's ASAb,AEmAb,AVoAb,ATAb,AhCGAb and AZpAb were in negative correlations with CD3+,CD4+and CD4+/CD8+levels.【Conclusions】In female infertility patients,the content of autoantibodies greatly increases,and T cell subset levels are in significant disorders,which may be directly involved in the development of infertility and will be a new target for treatment of infertility.

infertility；autoantibody；T cell subset

R711.6

B

1005-8982（2015）29-0091-03

2014-05-12

梁義娟，E-mail：czh20106152@163.com