董偉，姜艷芳，魏志，孫曉明

（1山東協(xié)和學(xué)院醫(yī)學(xué)院，濟(jì)南 250109;2中國(guó)人民解放軍濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院）

大腸癌是胃腸道常見(jiàn)惡性腫瘤，近年來(lái)我國(guó)大腸癌的發(fā)病率有日漸增高的趨勢(shì)。據(jù)研究［1］報(bào)道，國(guó)內(nèi)＜40歲青年大腸癌的發(fā)病率逐漸增高，尤其青年女性散發(fā)性大腸癌發(fā)病率增長(zhǎng)趨勢(shì)更為明顯。雌激素是一種G18類固醇激素，在調(diào)節(jié)多種組織器官的發(fā)育及維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定中發(fā)揮了重要的作用，其主要通過(guò)雌激素受體（ER）激活信號(hào)通路來(lái)調(diào)控基因表達(dá)而發(fā)揮作用。ER是類固醇受體超家族中的一員，包括ERα和Erβ兩種亞型。Bad屬于Bcl-2家族成員，可與凋亡抑制基因Bcl-2和Bcl-xl的表達(dá)產(chǎn)物形成異源二聚體，抑制其作用從而啟動(dòng)促凋亡程序。2007年12月～2014年12月，我們觀察了青年女性大腸癌患者癌組織中ERβ、Bad表達(dá)變化，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院收治的大腸癌患者42例，年齡23～40歲。所有患者均經(jīng)病理確診且術(shù)前均未行放化療或免疫治療。腫瘤部位:結(jié)腸26例，直腸16例。腫瘤分化程度:中分化25例，低分化17例。無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移19例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移23。臨床分期:Ⅰ+Ⅱ期17例，Ⅲ+Ⅳ期25例。手術(shù)留取大腸癌組織42例份（大腸癌組），另取癌旁組織（距癌組織邊緣2 cm以外）42例份（癌旁組）。

1.2 ERβ、Bad檢測(cè)方法 采用免疫組化SP法。所有標(biāo)本均經(jīng)4%甲醛溶液固定，石蠟包埋，連續(xù)切片，切片厚4 μm。石蠟切片常規(guī)脫蠟至水后以3%H2O2滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，枸櫞酸鹽緩沖液微波修復(fù)抗原后，以正常山羊血清封閉非特異性抗原，滴加適當(dāng)稀釋的特異性一抗，4℃過(guò)夜，滴加相應(yīng)二抗，37℃孵育30 min，然后滴加相應(yīng)辣根過(guò)氧化物酶工作液，37℃孵育30 min，最后經(jīng)二氨基聯(lián)苯胺過(guò)氧化氫顯色、蘇木素復(fù)染、中性樹脂封片顯微鏡下觀察結(jié)果。以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照染色。結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)［2］:以細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕褐色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，計(jì)數(shù)10個(gè)高倍視野（400倍），陽(yáng)性細(xì)胞數(shù) ＜5%為陰性，5% ～25%為1分，26% ～50%為2分，51% ～75%為3分，75%以上為4分。陽(yáng)性強(qiáng)度以淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。兩者相乘，1～4分為弱陽(yáng)性（+），5～8分為中等陽(yáng)性（++），9～12分為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組ERβ、Bad陽(yáng)性率比較 大腸癌組及癌旁組ERβ陽(yáng)性率分別為71.43%、88.09%，兩組比較，P＜0.05（χ2值為 10.496）;Bad 陽(yáng)性率分別為76.19%、85.71%，兩組比較，P＜ 0.05（χ2值為20.287）。

2.2 ERβ、Bad表達(dá)與大腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，ERβ、Bad表達(dá)均與大腸癌腫瘤分化程度有關(guān)（P均＜0.05）。

2.3 大腸癌組織中ERβ與Bad表達(dá)的關(guān)系 大腸癌組織中ERβ與Bad表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.389，P＜0.05）。

表1 ERβ、Bad表達(dá)與大腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3 討論

雌激素是一種G18類固醇激素，由雄激素主要在卵巢組織及其他包括肌肉、脂肪、神經(jīng)等組織的芳香化酶催化轉(zhuǎn)化而來(lái)［3］。雌激素在調(diào)節(jié)多種組織器官的發(fā)育及維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定中發(fā)揮了重要作用，如心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)及骨代謝等方面［4］。因此，雌激素被牽涉進(jìn)一系列病理生理學(xué)事件，包括癌癥（生殖組織及非生殖組織癌癥）［5］。雌激素主要通過(guò)ER激活信號(hào)通路來(lái)調(diào)控基因表達(dá)而發(fā)揮作用。ER是類固醇受體超家族中的一員，有ERα和Erβ兩種亞型。到目前為止，已發(fā)現(xiàn)的ERβ的亞型包括ERβ1（野生型）、ERβ2（也稱為ERcx）、ERβ3、ERβ4、ERβ5 等，其生理功能尚未完全澄清［6，7］。大量研究證實(shí)，雌激素參與了大腸癌的形成。研究［8，9］發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸癌發(fā)病率存在性別差異，男性較女性多發(fā)，但是絕經(jīng)后婦女的結(jié)直腸癌發(fā)病率呈現(xiàn)逐年升高趨勢(shì)，最終與男性發(fā)病率相持平。但是雌激素參與大腸癌的機(jī)制尚未明確，雌激素能否促進(jìn)或抑制青年女性散發(fā)性大腸癌的發(fā)生仍有爭(zhēng)論，研究表明ERβ在其中發(fā)揮了保護(hù)性作用。Rudolph等［10］發(fā)現(xiàn)，雌激素替代治療能明顯降低絕經(jīng)后女性ERβ陽(yáng)性大腸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。研究［11，12］發(fā)現(xiàn)，雌激素能上調(diào)結(jié)腸細(xì)胞錯(cuò)配修復(fù)基因（MMR）活性，從而預(yù)防MMR功能缺陷引起的結(jié)直腸癌，這一保護(hù)機(jī)制是ERβ調(diào)控miRNA的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)的。Taggarshe等［13］最近研究發(fā)現(xiàn)，女性大腸癌患者ERβ表達(dá)較正常組織低，推測(cè)ERβ在大腸癌的發(fā)病中起到保護(hù)作用，可能通過(guò)抑制細(xì)胞的增殖和促進(jìn)細(xì)胞凋亡發(fā)揮作用。Honma等［14］證實(shí)，ERβ基因重復(fù)序列多態(tài)性與結(jié)腸癌發(fā)病相關(guān)，并且年齡和激素水平在其中發(fā)揮了重要作用。Passarelli等［15］也指出，腸道中ERβ的表達(dá)缺失與結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，而ERβ基因單核苷酸多態(tài)性在ERβ和腫瘤的發(fā)生及轉(zhuǎn)移過(guò)程中扮演了重要角色。

Bad屬于Bcl-2家族成員，可與凋亡抑制基因Bcl-2和Bcl-xl的表達(dá)產(chǎn)物形成異源二聚體，抑制其作用從而啟動(dòng)促凋亡程序。Ranger等［16］研究發(fā)現(xiàn)，如果小鼠中缺乏Bad，則可以在不需要任何外在因素作用下發(fā)生腫瘤細(xì)胞的增殖，而且大多數(shù)是B淋巴細(xì)胞瘤，這一研究結(jié)論也說(shuō)明了Bad在腫瘤發(fā)生中是一種抑制腫瘤細(xì)胞的作用。若Bad發(fā)生磷酸化將會(huì)失去活性，間接發(fā)揮促進(jìn)細(xì)胞增殖、抗凋亡的作用。Stickles等［17］研究Bad介導(dǎo)的凋亡途徑在癌癥的發(fā)生和進(jìn)展中的作用時(shí)發(fā)現(xiàn)，與永生化正常細(xì)胞相比，腫瘤細(xì)胞中（卵巢癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌）的pBad表達(dá)升高。

本研究顯示，大腸癌組ERβ、Bad陽(yáng)性率均低于癌旁組，提示兩者的低表達(dá)可能與大腸癌的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)，這可能是由于細(xì)胞凋亡受到抑制使大腸癌細(xì)胞增殖過(guò)度引起的。本研究發(fā)現(xiàn)，ERβ、Bad陽(yáng)性表達(dá)與大腸癌腫瘤分化程度有關(guān)，說(shuō)明ERβ、Bad的異常表達(dá)不僅與大腸癌的發(fā)生有關(guān)，而且與其進(jìn)展也有關(guān)。本研究還發(fā)現(xiàn)，大腸癌組織中ERβ與Bad表達(dá)呈正相關(guān)，說(shuō)明ERβ可能是通過(guò)與凋亡因子Bad相互作用來(lái)誘導(dǎo)大腸癌細(xì)胞的凋亡。因此，檢測(cè)兩者大腸癌組織中的表達(dá)情況對(duì)判斷青年女性大腸癌患者預(yù)后可能具有一定的參考價(jià)值，并可有望成為大腸癌預(yù)防及治療的新靶點(diǎn)。

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