史俊友++景年華++趙紅艷

摘要：以大葉白麻（Poacynum hendersonii）葉為原料，乙醇為浸提溶劑對大葉白麻多酚的提取工藝進(jìn)行了探討，首先采用單因素試驗考察溶劑類型、溶劑濃度、料液比、提取時間、提取溫度對大葉白麻多酚提取的影響。以此為基礎(chǔ)，通過L9（34）正交試驗對提取工藝進(jìn)一步優(yōu)化。結(jié)果表明，各因素對多酚提取效率的影響大小為溶劑濃度>水浴時間>料液比>水浴溫度。大葉白麻多酚的最佳提取工藝以乙醇為提取溶劑，浸提溫度為80 ℃，乙醇體積分?jǐn)?shù)為40%，提取時間30 min，料液比為1∶20（g∶mL），該條件下大葉白麻多酚含量為10.21 mg/g。

關(guān)鍵詞：大葉白麻（Poacynum hendersonii）；多酚；乙醇浸提法；正交試驗

中圖分類號：S563.3；R284.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2015）16-4016-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.16.047

Study on the Extraction of Total Polyphenol from Poacynum hendersonii

SHI Jun-you， JING Nian-hua， ZHAO Hong-yan

（College of Chemistry and Chemical Engineering， Qujing Normal University， Qujing 655011，Yunnan，China）

Abstract： In this study， the extraction technology of total polyphenols from Poacynum hendersonii was studied and optimized with the ethanol. The influence of extraction solvent， solvent concentration， solid-liquid ratio， extraction time and extraction temperature had been investigated. On the basis of single factor experiments， the L9（34） orthogonal experiment was then applied in the process of optimization. And the results showed that the influence of the investigated factors on the polyphenols extraction yield was in the order as： solvent concentration > extraction time> solid-liquid ratio > extraction temperature.And the optimal technological conditions for the exaction of polyphenols from Poacynum hendersonii were as follows： ethanol was the best solvent， temperature 80 ℃， ethanol concentration 40%， the ratio of solid to liquid 1：20， exaction time 30 min. In this condition， the best yield of polyphenols was 10.21 mg/g.

Key words： Poacynum hendersonii； total polyphenols； ethanol extraction； orthogonal test

大葉白麻（Poacynum hendersonii）俗稱“大花羅布麻”，又稱野麻，為夾竹桃科白麻屬多年生草本植物[1，2]，主要分布于青海、新疆和甘肅等省區(qū)的沙漠邊緣、鹽堿荒地、河流沿岸沖積平原地帶[3]。作為新疆羅布麻葉浸膏及其制劑的主要原料，大葉白麻被證明具有延緩衰老、降壓、降脂、抗感冒、鎮(zhèn)靜安神、保護(hù)腦神經(jīng)等功效[4-8]，目前常被用來制作降壓藥和降壓保健茶。成分研究表明，大葉白麻葉中含有酚類、鞣質(zhì)、多糖、黃酮、強心苷、內(nèi)酯、香豆素、甾體等物質(zhì)[9]。

植物多酚是廣泛存在于植物體內(nèi)的多酚類物質(zhì)，具有抗氧化、抗衰老、抗菌消炎、抗癌、抗病毒、減少心血管疾病等功效，目前已被廣泛用于醫(yī)學(xué)、食品、制革和日用化工等相關(guān)領(lǐng)域[10，11]。但到目前為止，大葉白麻中多酚提取還未有系統(tǒng)報道。本試驗選取乙醇為提取溶劑，對大葉白麻中總多酚進(jìn)行浸提及含量測定，以期為大葉白麻的進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

大葉白麻葉采自格爾木市；焦性沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品，上海撫生生物技術(shù)有限公司；磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、丙酮、乙酸乙酯、七水硫酸亞鐵、四水合酒石酸鉀鈉、無水乙醇均為分析純。

SHZ-D（Ⅲ）型循環(huán)真空泵，鄭州博科儀器設(shè)備有限公司；紫外-可見分光光度計，上海儀電分析儀器有限公司；MSE323S型電子天平，德國賽多利斯公司；FW177型中草藥粉碎機(jī)，天津泰斯特儀器有限公司；DZKW型恒溫水浴鍋、101-1ES型干燥箱，北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 樣品預(yù)處理 將采摘的大葉白麻葉用清水洗凈后陰干，均勻攤開后放入70 ℃的烘箱中烘烤4 h，取出后將烘干的大葉白麻葉放入中藥高速粉碎機(jī)中粉碎，粉碎后過20目篩備用。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 參照賢景春等[12]、牛春燕等[13]的試驗方法，以焦性沒食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品，采用可見分光光度法測定大葉白麻葉中多酚的含量。取0.25 mg/mL焦性沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL分別置于25 mL的容量瓶中，加去離子水5 mL，酒石酸鐵溶液5 mL，用pH 7.5的磷酸鹽緩沖溶液定容；振蕩混勻靜置后，在波長為540 nm下測其吸光度。然后以標(biāo)準(zhǔn)液濃度為橫坐標(biāo)，以其吸光度為縱坐標(biāo)，得標(biāo)準(zhǔn)曲線：A=0.101 26+15.744 2C，R2=0.999 2。

1.2.3 大葉白麻多酚的提取 稱取一定質(zhì)量的大葉白麻葉粉末，置于回流反應(yīng)裝置中，按比例加入設(shè)定濃度的溶劑，控制反應(yīng)條件，水浴加熱反應(yīng)一定時間后，經(jīng)循環(huán)多用真空泵抽濾，轉(zhuǎn)移至50 mL的容量瓶中，用去離子水定容，待測。

準(zhǔn)確量取定容后的多酚溶液1 mL于10 mL的容量瓶中，分別加入去離子水，酒石酸鐵溶液1 mL，用pH 7.5的磷酸鹽緩沖溶液定容；振蕩混勻靜置后，在波長為540 nm下測其吸光度，然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算多酚的含量。

1.2.4 單因素試驗

1）提取溶劑。準(zhǔn)確稱取4.0 g大葉白麻葉粉末，置于冷凝回流裝置中，分別加入等體積的去離子水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯，水浴加熱反應(yīng)50 min后，趁熱抽濾，收集濾液，配制成一定濃度溶液，測定其吸光度。

2）乙醇體積分?jǐn)?shù)。稱取4.0 g大葉白麻葉粉末，置于回流反應(yīng)裝置中，按料液比1∶10（g∶mL，下同）分別加入60%、70%、80%、90%的乙醇溶液，水浴加熱反應(yīng)50 min后，趁熱抽濾，收集濾液，配制成一定濃度溶液，測定其吸光度。

3）料液比。準(zhǔn)確稱取4.0 g大葉白麻葉粉末，置于冷凝回流裝置中，分別按料液比1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、1∶25加入50%乙醇溶液，水浴加熱反應(yīng)50 min后，趁熱抽濾，收集濾液，配制成一定濃度溶液，測定其吸光度。

4）水浴溫度。稱取4.0 g大葉白麻葉粉末，置于回流反應(yīng)裝置中，按料液比1∶10加入，50%乙醇溶液，分別在水浴溫度30、40、50、60、70、80、85、90、95 ℃下反應(yīng)50 min后，趁熱抽濾，收集濾液，配制成一定濃度溶液，測定其吸光度。

5）提取時間。稱取4.0 g大葉白麻葉粉末，置于回流反應(yīng)裝置中，按料液比1∶10加入50%乙醇溶液在水浴溫度80 ℃分別反應(yīng)10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60 min，然后趁熱抽濾，收集濾液，配制成一定濃度溶液，測定其吸光度。

1.2.5 正交試驗設(shè)計 在單因素試驗的基礎(chǔ)上，選取提取溫度（A）、乙醇體積分?jǐn)?shù)（B）、水浴時間（C）、料液比（D）為主要考察因素，設(shè)計了4因素3水平正交試驗，正交試驗因素與水平見表1。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗結(jié)果

2.1.1 提取溶劑對大葉白麻多酚含量的影響 試驗選取去離子水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等4種較為常用的溶劑對多酚進(jìn)行提取，并對它們的提取效果進(jìn)行比較（圖1）。由圖1可知，在4種溶劑中丙酮提取多酚含量較低，去離子水、乙醇和乙酸乙酯的提取含量較高，效果接近。但考慮到水提物雜質(zhì)較多，后續(xù)較難處理，乙酸乙酯存在一定毒性，后續(xù)試驗選取生活中常用的乙醇作為提取溶劑。

2.1.2 乙醇體積分?jǐn)?shù)對大葉白麻多酚含量的影響 因多酚極性一般較大，選取體積分?jǐn)?shù)較低的乙醇進(jìn)行提取，并對30%、40%、50%、60%乙醇的提取情況進(jìn)行考察（圖2）。由圖2可知，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加，多酚的浸出量先增加后減少，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%時多酚的提取效果最好，故選擇50%乙醇作為考察對象。

2.1.3 料液比對大葉白麻多酚含量的影響 由圖3可知，隨著溶劑的增加，多酚的浸出量先增加后減少，大葉白麻質(zhì)量與乙醇溶劑體積之比為1∶20時，多酚的提取量達(dá)到最高。故后續(xù)試驗中選擇料液比為1∶20作為考察對象。

2.1.4 水浴溫度對大葉白麻多酚含量的影響 由圖4可知，隨著提取溫度的升高，大葉白麻多酚的含量呈上升趨勢，當(dāng)溫度為80 ℃時，大葉白麻多酚的含量達(dá)到最高，其主要原因為高溫提高了分子擴(kuò)散速度，有利于多酚從細(xì)胞壁中溶出。當(dāng)溫度繼續(xù)升高時含量開始下降，這可能是由于大葉白麻多酚熱穩(wěn)定性較差，易被氧化分解所致。故選擇80 ℃的乙醇溶液作為考察對象。

2.1.5 提取時間對大葉白麻多酚含量的影響 由圖5可知，隨著提取時間的增加，多酚的浸出量先增加后減少，當(dāng)水浴時間為25 min時，多酚的提取效果最好，所以選擇水浴時間為25 min作為考察對象。

2.2 正交試驗結(jié)果

參考單因素試驗的結(jié)果，以料液比、提取時間、溶劑體積分?jǐn)?shù)和提取溫度等4個因素進(jìn)行正交試驗設(shè)計，優(yōu)化乙醇提取大葉白麻多酚的最佳工藝。正交試驗結(jié)果見表2。分析表2中的極差R值可知，4個因素影響順序為B>C>D>A，即溶劑體積分?jǐn)?shù)>水浴時間>料液比>水浴溫度，最佳組合為A2B1C2D3。即最佳提取工藝條件為浸提溫度80 ℃，溶劑體積分?jǐn)?shù)40%，水浴時間30 min，料液比1∶20。為了驗證正交試驗結(jié)果，在此條件下進(jìn)行了3次驗證試驗，多酚的平均提取率為10.21 mg/g，表明該方法可行。

3 小結(jié)

通過單因素試驗，確定采用乙醇作為提取溶劑對大葉白麻多酚進(jìn)行浸提，在進(jìn)一步正交試驗的基礎(chǔ)上，確定了大葉白麻中多酚的最佳提取工藝條件： 浸提溫度為80 ℃，乙醇體積分?jǐn)?shù)為40%，水浴時間30 min，料液比為1∶20，該條件下大葉白麻多酚的含量可達(dá)10.21 mg/g。

參考文獻(xiàn)：

[1] 中國科學(xué)院植物志編委會.中國植物志[M].北京：科學(xué)出版社，1977.

[2] 董正鈞.羅布麻[M].北京：科學(xué)出版社，1958.

[3] 張紹武.我國羅布麻分布區(qū)的地理區(qū)劃[J].西北植物學(xué)報，2002，22（7）：1-5.

[4] 錢增年，顧振綸，方幾希，等.大花羅布麻葉的藥理學(xué)研究-Ⅱ.大花羅布麻葉延緩衰老作用的實驗觀察[J].中成藥，1990，12（3）：28-31.

[5] 錢增年，顧振綸，金黎清，等.大花羅布麻的藥理學(xué)研究-Ⅲ-對心血管系統(tǒng)的影響[J].中成藥，1991，13（7）：27-29.

[6] 顧振綸.大花羅布麻葉的藥理學(xué)研究-Ⅰ-對血小板聚集性的影響[J].中成藥，1989，11（11）：28-30.

[7] 馬 成，馬 龍，RAUSCH W D.大花羅布麻對MPTP型小鼠的多巴胺能神經(jīng)保護(hù)作用研究[J].中國藥理學(xué)通報，2010，26（3）：397-400.

[8] 莊魯江，孫江兵，周 軍.大花羅布麻葉總黃酮對腦缺血保護(hù)作用的研究[J].中華神經(jīng)外科疾病研究雜志，2013，12（4）：360-361.

[9] 王 寧，趙 明.柴達(dá)木盆地大葉白麻葉化學(xué)預(yù)試及總黃酮提取研究[J].青?？萍?，2007，14（3）：27-30.

[10] 宋立江.植物多酚研究與利用的意義及發(fā)展趨勢[J].化學(xué)進(jìn)展，2000（5）：161-170.

[11] 張力平，孫長霞.植物多酚的研究現(xiàn)狀及發(fā)展前景[J].林業(yè)科學(xué)，2005（11）：157-162.

[12] 賢景春，謝婷婷.連錢草總多酚提取及其抗氧化性分析[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，53（17）：4139-4141.

[13] 牛春艷，姜曉坤.葡萄皮渣中多酚物質(zhì)提取工藝的研究[J].遼寧化工，2011，40（9）：917-919.