錢軍等

摘要：測定了海南鹿角藤（Chonemorpha splendens Chun et Tsiang）的甲醇粗提物及其石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇4種溶劑萃取物對萵苣指管蚜（Uroleucon formosanum Takahashi）和斜紋夜蛾（Prodenia litura Fabricius）的殺蟲活性。結(jié)果表明，鹿角藤的氯仿萃取物對2種害蟲具有較好的殺蟲活性。萵苣指管蚜隨著提取物濃度的增大和處理時間的延長，其死亡率增高。質(zhì)量濃度為10 mg/mL時，對萵苣指管蚜處理72 h的死亡率達(dá)到86.92%，LC50為0.722 3 mg/mL；斜紋夜蛾四齡幼蟲處理24 h的非選擇性拒食率為69.84%。

關(guān)鍵詞：海南鹿角藤（Chonemorpha splendens Chun et Tsiang）；萵苣指管蚜（Uroleucon formosanum Takahashi）；斜紋夜蛾（Prodenia litura Fabricius）；殺蟲活性

中圖分類號：S435 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2015）16-3936-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.16.026

Preliminary Study on Insecticidal Activity of Extract from

Chonemorpha splendens Chun et Tsiang

QIAN Jun1，LIAO Feng-xian2，CHEN Guo-de1，LUO Yan-ping2

（1.Hainan Provincial Forestry Science Institute， Haikou 571100，China；

2. College of Environment and Plant Protection， Hainan University，Haikou 570228，China）

Abstrsct： The insecticidal activity of methanol crude extract and extracts of petroleum ether， chlorofom， ethyl acetate， n-butanol from Chonemorpha splendens Chun et Tsiang against Uroleucon formosanum Takahashi and Prodenia litura Fabricius were tested by contact-toxicity and antifeedant activity. The results showed that chloroform extracts displayed excellent activity against U. formosanum Takahashi and P. litura Fabricius， the corrected mortality of U. formosanum Takahashi increased with the increase of concentration and extending of time. The mortality reached 86.92% against U. formosanum Takahashi at concentration of 10 mg/mL for 72 h， and LC50 was 0.722 3 mg/mL， and the antifeedant rate reached 69.84% against 4th instar larvae of Prodenia litura Fabricius at concentration of 10 mg/mL for 24 h.

Key words： Chonemorpha splendens Chun et Tsiang； Uroleucon formosanum Takahashi； Prodenia litura Fabricius； insecticidal activity

隨著人類生活水平的提高，人們對高效、低毒、環(huán)境友好的化學(xué)農(nóng)藥或生物農(nóng)藥的需求增加[1，2]。害蟲抗藥性問題導(dǎo)致農(nóng)藥的使用周期和使用年限不斷縮短，因而，尋求更加高效的農(nóng)藥品種成為科研人員面臨的一大難題。植物源農(nóng)藥來源于自然界，同時也是綠色農(nóng)藥先導(dǎo)化合物的理想挖掘材料，受到各國科研工作者的極大關(guān)注[3]。海南省具有豐富的熱帶植物資源，是南藥植物的天然寶庫，開展其研究具有深遠(yuǎn)的意義。

海南鹿角藤（Chonemorpha splendens Chun et Tsiang）為夾竹桃科（Apocynaceae）鹿角藤屬（Chonemorpha G. Don）多年生藤本植物[4]。該屬植物具有重要的藥理活性，如《本草綱目拾遺》中用鹿角藤的老莖來治療婦女黃疸?。谎菇翘俚那o可治療風(fēng)濕骨痛、骨折筋傷、外傷出血等癥[5]。Chatterjee等[6]發(fā)現(xiàn)鹿角藤堿對感染寄生蟲的黃金鼠防效達(dá)100%，對腸道感染寄生蟲的幼鼠防效為90%；2005年Roy等[7]報道了大葉鹿角藤作為骨骼肌松弛劑的研究機(jī)理；2009年Shende等[8]發(fā)現(xiàn)大葉鹿角藤根乙醇提取物對高血糖大白鼠具有降血糖的作用。農(nóng)用活性表明，鹿角藤粗提物具有較好的殺蟲活性。2005年劉紅芳等[9]發(fā)現(xiàn)密脈崖鹿角藤葉的乙醇提取物對斜紋夜蛾四齡幼蟲有較高的拒食活性。以上對鹿角藤屬部分種進(jìn)行了活性報道，但是關(guān)于海南鹿角藤鮮有研究，且作為南藥和黎藥的獨(dú)特省份，海南島孕育了大量的藥用植物。為了進(jìn)一步了解海南鹿角藤的農(nóng)用活性，本研究對海南鹿角藤進(jìn)行了研究，期望為該屬植物的開發(fā)與應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試藥劑 0.36%苦參堿水劑（陜西匯能達(dá)生物科技有限公司），0.7%印楝素懸浮劑（鶴壁陶英陶生物科技有限公司）。

1.1.2 供試?yán)ハx 萵苣指管蚜（Uroleucon formosanum Takahashi）采自海南大學(xué)環(huán)境與植物保護(hù)學(xué)院基地的萵苣葉片上；斜紋夜蛾（Prodenia litura Fabricius）試蟲為海南大學(xué)農(nóng)藥學(xué)實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)，其卵塊采自海南大學(xué)農(nóng)業(yè)科研基地蓖麻上，在保濕培養(yǎng)皿內(nèi)孵化成幼蟲后，轉(zhuǎn)入養(yǎng)蟲盒中，用新鮮干凈的蓖麻葉飼養(yǎng)幼蟲。試驗(yàn)時選取健康活躍、蟲體大小等生理?xiàng)l件一致的四齡幼蟲為供試?yán)ハx。

1.2 方法

1.2.1 供試藥劑的制備 海南鹿角藤采自海南大學(xué)儋州校區(qū)周邊。采用滲漉法[10]將采集的鹿角藤洗凈，陰干，粉碎，過40目篩，稱重后加入干粉5倍體積的甲醇，避光浸提3 d，反復(fù)浸提3次。合并浸提液，45 ℃減壓濃縮成膏狀物為甲醇粗提物。隨后依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇溶劑對甲醇粗提物進(jìn)行萃取，45 ℃減壓濃縮各萃取液獲得鹿角藤4種萃取物，置于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 對萵苣指管蚜的觸殺活性測定 采用浸漬法測定海南鹿角藤甲醇提取物和4種萃取物對萵苣指管蚜的觸殺活性[11]，用含適量丙酮和0.5%吐溫-80的去離子水將提取物和萃取物配制成質(zhì)量濃度為10 mg/mL的藥液，將含有25頭萵苣指管蚜的萵苣葉片浸沒到配制好的藥液中，5 s后取出，用吸水紙吸去多余藥液，移入干凈培養(yǎng)皿中室溫保濕飼養(yǎng)。以含等量的丙酮和0.5%吐溫-80的去離子水作溶劑對照，以0.36%苦參堿水劑1 000倍稀釋液作藥液對照，每處理重復(fù)3次。分別處理12、24、48、72 h后，觀察試蟲死亡情況，計算死亡率。

1.2.3 對斜紋夜蛾的拒食活性測定 采用葉碟法測定海南鹿角藤提取物對斜紋夜蛾四齡幼蟲的拒食活性[11]：用含適量丙酮和0.5%吐溫-80的去離子水將提取物配制成質(zhì)量濃度為10 mg/mL的溶液，用打孔器將新鮮潔凈的蓖麻葉片打成直徑為2 cm的葉碟，將葉碟置于藥液中浸漬5 s，取出晾干，備用。以含等量的丙酮和0.5%吐溫-80的去離子水作溶劑對照，以0.7%印楝素懸浮劑1 000倍稀釋液為藥劑對照。

選擇性拒食測定：選取2片處理葉碟和2片對照葉碟交錯地放置于直徑為9 cm培養(yǎng)皿內(nèi)。

非選擇性拒食測定：選取4片相同處理葉蝶十字交叉置于培養(yǎng)皿內(nèi)，將對照葉碟置于另一培養(yǎng)皿內(nèi)。

將1頭經(jīng)饑餓處理4 h的斜紋夜蛾四齡幼蟲移入上述培養(yǎng)皿內(nèi)，皿內(nèi)放置小團(tuán)吸水的脫脂棉保濕，每處理20頭蟲，重復(fù)3次。于24 h后統(tǒng)計試蟲取食面積，計算拒食率。

1.2.4 氯仿萃取物對萵苣指管蚜的毒力測定 用丙酮將氯仿萃取物配制成質(zhì)量濃度分別為10、5、2.5、1.25、0.625 mg/mL的藥液，參照“1.2.2”的方法，測定不同濃度下提取物對萵苣指管蚜的死亡率，繪制毒力回歸曲線，求得毒力回歸方程。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理

死亡率=（死亡蟲數(shù)/試蟲數(shù)）×100%；

校正死亡率=[（藥劑處理死亡率-對照組死亡率）/（100-對照組死亡率）]×100%

選擇性拒食率=[（對照組取食葉面積-處理組取食葉面積）/對照組取食葉面積]×100%

非選擇性拒食率=[（對照組取食葉面積-處理組取食葉面積）/（對照組取食葉面積+處理組取食葉面積）]×100%

用SAS軟件對不同處理間的結(jié)果進(jìn)行差異顯著性分析，用Excel軟件對毒力測定結(jié)果進(jìn)行分析，求得毒力回歸方程和相關(guān)系數(shù)，根據(jù)回歸方程求得LC50。

2 結(jié)果與分析

2.1 粗提物對萵苣指管蚜觸殺活性的測定結(jié)果

在10 mg/mL濃度下，采用浸漬法測定了海南鹿角藤粗提物對萵苣指管蚜的觸殺活性，結(jié)果見表1。由表1可知，海南鹿角藤甲醇提取物和4種萃取物對萵苣指管蚜均有一定的觸殺活性，且隨著處理時間的延長，萵苣指管蚜的死亡率呈上升趨勢。試蟲受藥12 h后，氯仿萃取物的校正死亡率最好，為69.33%；受藥24 h后，氯仿萃取物和石油醚萃取物的觸殺活性較好，校正死亡率超過70%；受藥48 h后，氯仿萃取物和石油醚萃取物的觸殺活性較好，校正死亡率超過80%；統(tǒng)計分析結(jié)果表明，氯仿萃取物的校正死亡率與0.36%苦參堿水劑的活性差異不顯著。比較處理時間發(fā)現(xiàn)，藥劑作用后，害蟲死亡率逐漸增加。表明該植物提取物具有較好的持效期，隨著時間的延長，活性逐漸體現(xiàn)出來。不同溶劑萃取物活性不一樣，總的情況是，氯仿萃取物對萵苣指管蚜的活性最好，其次是石油醚萃取物。

2.2 粗提物對斜紋夜蛾拒食活性的測定結(jié)果

采用葉碟法測定了鹿角藤粗提物對四齡斜紋夜蛾幼蟲的選擇性拒食活性和非選擇性拒食活性，結(jié)果見表2。由表2可知，海南鹿角藤5種提取物對四齡斜紋夜蛾幼蟲取食行為表現(xiàn)出不同的拒食作用。在非選擇性拒食試驗(yàn)中，24 h后氯仿萃取物的拒食效果最好，拒食率達(dá)69.84%，甲醇提取物次之，拒食率為64.72%，說明四齡斜紋夜蛾幼蟲對這2種提取物表現(xiàn)出較敏感的取食反應(yīng)。在選擇性拒食試驗(yàn)中，24 h后氯仿萃取物和甲醇提取物的拒食作用比較強(qiáng)，其拒食率分別為78.13%、75.88%；各提取物的選擇性拒食率比非選擇性拒食的拒食率高，表明海南鹿角藤提取物對四齡斜紋夜蛾幼蟲的選擇性拒食活性比非選擇性拒食活性好。與0.7%印楝素懸浮劑比較，發(fā)現(xiàn)各提取物的拒食活性不如對照藥劑。

2.3 氯仿萃取物對萵苣指管蚜的毒力測定結(jié)果

由表1和表2可知，海南鹿角藤提取物對供試?yán)ハx的活性測定中，氯仿萃取物的活性最強(qiáng)。對氯仿萃取物作進(jìn)一步研究，測定該萃取物在不同濃度下對萵苣指管蚜的毒力，結(jié)果見表3。由表3可以看出，所獲得毒力方程相關(guān)系數(shù)均大于0.9，說明方程數(shù)據(jù)的相關(guān)性好。LC50比較發(fā)現(xiàn)，不同觀察時間供試藥劑對萵苣指管蚜的致死中濃度不同，隨著測試時間的延長，LC50呈下降趨勢，其中72 h后，對萵苣指管蚜的LC50為0.722 3 mg/mL，進(jìn)一步證實(shí)了海南鹿角藤提取物的持效性。

3 小結(jié)與討論

萵苣指管蚜和斜紋夜蛾分別屬半翅目蚜科和鱗翅目夜蛾科昆蟲，食性雜，寄主種類多，分布廣，特別是斜紋夜蛾的幼蟲危害猖獗，可為害99科200多種植物[12]。本研究結(jié)果表明，海南鹿角藤提取物對萵苣指管蚜和四齡斜紋夜蛾幼蟲均具有較好的殺蟲活性；各提取物對萵苣指管蚜的觸殺活性存在一定的濃度效應(yīng)和時間效應(yīng)，隨濃度的增加和時間的延長，試蟲的死亡率呈較明顯的增大趨勢；氯仿萃取物殺蟲活性最明顯，萵苣指管蚜受藥72 h后，校正死亡率達(dá)86.92%，LC50為0.722 3 mg/mL，四齡斜紋夜蛾受藥24 h后，非選擇性拒食率為69.84%，選擇性拒食率為78.13%，表明海南鹿角藤有望成為開發(fā)植物源農(nóng)藥的新資源。

研究發(fā)現(xiàn)，不同溶劑萃取物的殺蟲活性不同，其中氯仿萃取物的活性稍好，可能是活性物質(zhì)主要集中在氯仿中。在對萵苣指管蚜的觸殺活性測試中，力度大小也影響試驗(yàn)結(jié)果，為此，本試驗(yàn)盡量不損壞測試對象，用毛筆輕輕觸摸。葉碟法測試拒食活性時，為了減少葉片的干枯萎縮，試驗(yàn)中用濾紙和脫脂棉保濕。本試驗(yàn)暫時不能確定其殺蟲活性的主要物質(zhì)，在今后的研究中將對海南鹿角藤殺蟲活性成分作進(jìn)一步分離，明確具體活性物質(zhì)的種類，并對其殺蟲作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。

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