楊劍，李斌，侯軍剛，白玉軍，李東旭

（中國石油長慶油田分公司第一采油廠，陜西延安716000）

安塞油田微生物驅油提高采收率機理研究

楊劍，李斌，侯軍剛，白玉軍，李東旭

（中國石油長慶油田分公司第一采油廠，陜西延安716000）

通過室內實驗對安塞油田在用的微生物驅油菌種銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌進行生長活動規(guī)律研究、運移能力評價、降解原油機理分析和油層解堵能力研究，分析了微生物驅油提高采收率機理。數(shù)據(jù)表明綠銅假細胞單菌、枯草芽孢桿菌在安塞油田長6油藏中具有較好的繁殖能力和運移能力，濃度3%微生物溶液可有效地改善原油物性，使原油中輕質烴組分增加，重質烴組分減少，使油藏從親油轉變?yōu)橛H水，提高洗油效率。并且微生物溶液的代謝產(chǎn)物還可有效地解堵油層無機和有機堵塞，提高油藏滲透性。

低滲透油藏；微生物；代謝產(chǎn)物；降解；潤濕反轉；解堵

微生物提高原油采收率技術是一項利用微生物及代謝產(chǎn)物來提高原油采收率的綜合技術，具有適用范圍廣、工藝簡單、成本低、環(huán)境友好等優(yōu)點，目前已經(jīng)成為最具發(fā)展前景的三次采油技術之一［1］。美國能源部共支持了47個微生物采油項目，預計將注水開發(fā)后期油藏的采收率提高16%。俄羅斯也開展了較大規(guī)模的微生物驅油，在羅馬什金、巴什克斯坦和韃靼等老油田取得60萬t的增油量，并有效延長了油藏的開發(fā)壽命。挪威的國控石油和氣體公司在Norne油田開展了世界上規(guī)模最大的微生物驅油技術試驗，取得巨大的成功，預計增產(chǎn)原油3 000萬桶，該公司已將微生物提高采收率技術作為其今后研究的主要方向。

微生物采油技術在我國起步較晚，20世紀80年代，大慶油田首先開展了微生物采油礦場試驗研究。此后關于微生物采油的機理研究［2，3］、實驗研究［4］、數(shù)值模擬研究［5，6］以及現(xiàn)場試驗［7，8］等才逐漸開展，并取得了良好的應用效果。2009年微生物在安塞油田開展礦場試驗，至目前已實施20余口，取得了一定的效果。但由于微生物及其代謝產(chǎn)物的復雜性，使得微生物提高采收率機理還未被完全認識和量化，仍需進行研究。

1　試驗材料及儀器

1.1試驗材料

綠銅假單胞菌溶液，枯草芽孢桿菌溶液（見表1），地面脫氣脫水原油（密度：0.833 g/m3，黏度：35.03 mPa·s），安塞油田地層注入水組成（見表2）。

1.2實驗儀器（見表3）

表1　微生物菌株基本特征Table.1 Basic characteristics of composition of microbial strains

表2　安塞油田注入水組成成分Table.2 Injection water composition of Ansai oil field

表3　實驗儀器Table.3 List of experimental instruments and apparatus

2　提高采收率機理研究方法

2.1微生物在巖心中的生長活動規(guī)律

在45℃條件下，將1.3 mL微生物溶液注入長6層巖心進行培養(yǎng)，每隔4 h時注入一定量0.3 mL營養(yǎng)液，每隔12 h取樣分析巖心流出液，計算菌體個數(shù)。

2.2微生物在巖心運移能力

將巖心樣品制成10 mm×5 mm平面，用生理鹽水仔細漂洗觀察面，懸滴3%微生物溶液，底部吸濾至無液體滲出。用2%戊二醛和1%鋨酸進行固定，然后丙酮脫水，之后利用醋酸異戊酯置換殘留丙酮，進而CO2臨界點干燥，利用離子濺射或真空方式在觀察面鍍金，進行掃描電子顯微鏡觀察。

2.3微生物代謝產(chǎn)物定性、定量分析

接種銅綠假單胞菌種至200 mL液體LB培養(yǎng)基中，37℃振蕩培養(yǎng)48 h，收集發(fā)酵液。經(jīng)5 mol/L的HCl沉淀過夜，下層沉淀烘干，用0.1%的甲醇水溶液溶解，進行液相色譜分析。

采用硫酸-蒽酮法測定鼠李糖脂的含量：分別吸取稀釋500倍稀釋的菌株發(fā)酵液1.0 mL于干凈試管中，冰水浴中加入4 mL 0.2%的硫酸-蒽酮溶液，混勻后置于沸水?。?00℃）中15 min，取出后自然冷卻。以蒸餾水做空白對照，用酶標儀測定620 nm的吸光值，根據(jù)鼠李糖脂標準曲線，計算得到鼠李糖脂含量。

取枯草芽孢桿菌菌株的發(fā)酵液，8 000 r/min離心20 min除菌體兩次，上清液用濃HCl調pH至2.0，出現(xiàn)絮狀沉淀，4℃靜置過夜。10 000 r/min離心30 min收集沉淀，用pH2.0的酸水洗滌一次。隨后將該沉淀溶于1 mol的NaOH溶液，始終pH值為7.0，冷凍干燥，得淺褐色疏松狀固體的脂肽粗品。

采用Megazyme乙酸檢測試劑盒對濃度3%的微生物溶液中乙酸含量進行定量測定。實驗方法：離心取微生物溶液上層清液，按照試劑盒說明書中要求依次加入4種反應液，反應結束后用分光光度計測定340 nm下吸光值，分別計算空白和樣品的吸光度差（A1-A0）和（A2-A0），計算得到乙酸濃度。

2.4微生物降解原油能力

將濃度3%的微生物溶液與安塞原油按照1：5比例裝入錐形瓶，同樣在錐形瓶中裝入地層水和原油混合液，比例1：5，恒溫振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7 d，溫度45℃，對原油粘度進行分析。

取安塞原油30 g，加入200 mL液體培養(yǎng)基中，置于500 mL三角瓶中120℃高壓滅菌30 min，濃度10%的微生物溶液接種于上述滅菌后的原油培養(yǎng)基中，置于45℃恒溫搖床中180 r/min振蕩培養(yǎng)40 d，對原油組分進行氣象色譜分析。

2.5微生物改變油藏潤濕反轉性

將微生物溶液（濃度3%）滴在正戊烷處理過的石英片上，10 min后用S-2接觸角測量儀測定接觸角，測定其潤濕反轉性能。

將2 g巖心磨成粉狀顆粒，鋪于培養(yǎng)皿底部，懸滴2 mL微生物溶液（濃度3%）于巖心粉末表面，利用倒置顯微鏡進行活細胞連續(xù)照相，觀察微生物剝離原油的過程。

2.6微生物解堵機理研究

無機堵塞實驗條件：取安塞油田無機物堵塞物W1（碳酸鈣、碳酸鎂類沉淀物），將其放入200 mL微生物溶液中，密封，在恒溫振蕩培養(yǎng)箱中100 r/min振蕩培養(yǎng)7 d，每天稱取固體質量W2，計算溶垢率（%）。溶垢率（%）=（W1-W2）/W1×100%。

在250 mL的錐形瓶中加入50 mL微生物溶液（濃度3%），再分別加入一定量（3 g左右）的黑蠟（固體石蠟），密封，在45℃的恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩培養(yǎng)7 d后，稱重剩余黑蠟質量（固體石蠟）。

3　實驗結果及討論

3.1生長規(guī)律

試驗用濃度3%的微生物溶液注入巖心，每12 h計算菌體數(shù)目。以培養(yǎng)時間為橫坐標，菌體數(shù)目的對數(shù)為縱座標，繪制半對數(shù)生長曲線（見圖1）。菌種的生長可分為四個階段：適應期、對數(shù)期、穩(wěn)定期、衰老期。適應期菌種幾乎不繁殖，對外界因素反應敏感，時間在6 h左右。之后進入對數(shù)期，此時菌種以較快的速度繁殖，數(shù)量呈幾何級數(shù)增加，需消耗大量的營養(yǎng)液，時間在20 h左右。之后進入穩(wěn)定期，此時營養(yǎng)液逐漸被消耗，代謝產(chǎn)物逐步積累，抑制了菌種的生長，新生的菌體數(shù)和死亡的菌體數(shù)幾乎相當，時間在25 h。最后進入衰老期，菌種死亡數(shù)量遠遠大于繁殖數(shù)量，營養(yǎng)物質基本被消耗完畢。

圖1　微生物菌種在巖心中的生長曲線Fig.1 Growth curve of microbe strain in the rock core

3.2運移規(guī)律

由掃描電子顯微鏡照片（見圖2、圖3）可以看出，菌種具有一定形態(tài)，銅綠假單胞菌菌種大小3 μm× Ф1 μm，枯草芽孢桿菌菌種大小5 μm×Ф1 μm。菌種對巖心的附著性很強，部分可以進入巖心孔喉（A為自然狀態(tài)菌種，B是菌種附著在巖心表面，C是菌種進入巖心孔隙）。

3.3代謝產(chǎn)物分析

采用液相色譜方法對微生物溶液中的代謝產(chǎn)物的種類進行鑒定，確定微生物主要次級代謝產(chǎn)物是鼠李糖脂、脂肽、乙酸，其中鼠李糖脂和脂肽屬于生物表面活性劑，可有效降低原油流動阻力、降低油水界面張力，使巖石由油濕轉變?yōu)樗疂瘢瑥亩鸬絼冸x固體表面的原油、解除油層有機堵塞的作用。乙酸屬于小分子有機酸，可以溶蝕巖心中的碳酸鈣、碳酸鎂沉淀，解除油層的無機堵塞。

圖2　銅綠假單胞菌在不同狀態(tài)下的掃描電子顯微鏡照片F(xiàn)ig.2 Scanning electron microscope photographs of pseudomonas aeruginosa in different conditions

圖3　枯草芽孢桿菌在不同狀態(tài)下的掃描電子顯微鏡照片F(xiàn)ig.3 Scanning electron microscope photographs of bacillus subtilis in different conditions

經(jīng)檢測，濃度3%微生物溶液鼠李糖脂含量為5.281 g/L，脂肽含量為2 g/L，乙酸濃度為880 mg/L。3.4降解原油能力

對比加入微生物溶液和未加微生物溶液的原油物性，可以看出在微生物作用下原油的粘度、蠟含量、膠質含量均有所下降，結果（見表4）。

圖4　微生物降解原油氣相色譜圖（微生物處理前）Fig.4 Gas chromatogram of microbial degradation crude oil（before microbial treatment）

微生物溶液混合原油，7 d內對原油組分進行氣象色譜分析（見圖4、圖5）。標準品圖譜中C14、C15、C16的出峰時間在4 min～8 min，對比微生物作用7 d后氣象色譜分析，4 min～8 min后的峰高要明顯低于前者，表明微生物對原油產(chǎn)生了降解作用，使C14、C15、C16組分降解為相對分子質量相對小的組分。隨著時間延長，出峰時間8 min左右，峰值逐漸上升，說明微生物開始逐步動用重質原油烴組分，使得C14、C15、C16烴組分含量上升。

表4　微生物溶液作用后原油物性變化Table.4 Crude oil physical property change after the role of microbial fermentation liquid

圖5　微生物降解原油氣相色譜圖（微生物處理7 d后）Fig.5 Gas chromatogram of microbial degradation crude oil（Microbial treatment after 7 days）

3.5油藏潤濕反轉性改變

微生物及其代謝產(chǎn)物對巖石表面油膜的剝離作用，巖石表面的油膜被微生物剝離之后，菌體吸附在巖石孔隙表面會引起其潤濕性的轉變。由表5可知，3%微生物溶液可以有效降低接觸角，從而改變巖石潤濕性，易于原油剝離。在初期微生物附著于巖心顆粒表面，后慢慢作用巖心中的原油成分，在巖心顆粒表面形成油膜，并逐漸向外擴散、包裹、形成小油滴，最終聚并成油滴。

表5　接觸角測定結果Table.5 Contact angle measurement results

3.6解堵能力

無機物堵塞，其主要成分是粘土和機械雜質及鈣（碳酸鈣）、鎂（碳酸鎂）、鐵（硫化鐵和堿式碳酸鐵等）的沉淀物。微生物代謝產(chǎn)物中的乙酸可有效溶解巖石孔隙中碳酸鈣、碳酸鎂沉淀，提高巖心滲透率。

圖6　微生物的溶垢作用Fig.6 The scale-dissloving role of microbial metabolic

微生物代謝產(chǎn)物中的生物表面活性劑可以和蠟晶發(fā)生作用，改變蠟晶狀態(tài)，阻止蠟晶生長，從而降低原油中石蠟、瀝青、膠質等重組分的沉積。將濃度3%的微生物溶液與黑蠟（固體石蠟）振蕩培養(yǎng)7 d，可以看到錐形瓶上附著的黑蠟（固體石蠟）呈網(wǎng)狀，說明微生物對油層中的有機堵塞具有較強的降解作用，具體數(shù)據(jù)（見表6）。

表6　微生物降解前后黑蠟（固體石蠟）質量變化Table.6 Black wax（Paraffin）quality change before and after microbial degradation

4　結論

（1）濃度3%微生物溶液在安塞油田巖心中大量生長繁殖，最高濃度維持在108個/毫升數(shù)量級，且對數(shù)期和穩(wěn)定器持續(xù)時間較長，掃描電子顯微鏡下微生物對巖心的附著性很強，說明該微生物在安塞油藏環(huán)境下大量生長、繁殖并存留在巖心中。

（2）微生物主要次級代謝產(chǎn)物是鼠李糖脂、脂肽、乙酸，可有效降低原油流動阻力、降低油水界面張力，使巖石由油濕轉變?yōu)樗疂?，從而起到剝離固體表面的原油、解除油層有機堵塞、無機堵塞。

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Microbial oil displacement mechanism research on enhancing oil recovery of Ansai oilfield

YANG Jian，LI Bin，HOU Jungang，BAI Yujun，LI Dongxu
（Oil Production Plant 1 of PetroChina Changqing Oilfield Company，Yan'an Shanxi 716000，China）

Through the indoor experiment in ansai oilfield in strains of microbial oil displacement green copper fake cell single bacteria，bacillus subtilis growth law of research capability evaluation，migration，degradation mechanism analysis of crude oil and reservoir plugging ability research，analyzes the mechanism of microbial flooding to improve oil recovery.Data show that the green copper false single cell bacteria，bacillus subtilis in the Chang 6 reservoir in Ansai oilfield has a good ability to reproduce and migration ability，concentration 3%microbe solution can effectively improve the physical properties of crude oil，increase the light hydrocarbon component in crude oil，heavy hydrocarbon component decreases，the reservoir from oil wet to water，improve the efficiency of washing oil.And metabolic product of the microbial solution can also be broken down effectively reservoir inorganic and organic jams，improve the reservoir permeability.

low permeability；microbe；metabolites；degradation；wettability reversal；removing blockage

10.3969/j.issn.1673-5285.2015.07.010

TE357.46

A

1673-5285（2015）07-0041-06

2015－04-13

楊劍，女（1983-），采油工程師，2013年碩士畢業(yè)于中國石油大學（北京）石油與天然氣專業(yè)，現(xiàn)從事油田提高采收率工作，郵箱：yjian2_cq@petrochina.com.cn。