康 凌李夢(mèng)夢(mèng)

（1 河南省南陽(yáng)市第二人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南 南陽(yáng) 473012；2 南陽(yáng)醫(yī)專附屬醫(yī)院，河南 南陽(yáng) 473000）

胎盤胎膜中細(xì)胞凋亡與分娩發(fā)動(dòng)、產(chǎn)程進(jìn)展的研究

康 凌1李夢(mèng)夢(mèng)2

（1 河南省南陽(yáng)市第二人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南 南陽(yáng) 473012；2 南陽(yáng)醫(yī)專附屬醫(yī)院，河南 南陽(yáng) 473000）

目的 研究胎盤胎膜中羊膜上皮細(xì)胞、絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞、胎盤絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞及蛻膜細(xì)胞凋亡情況與分娩發(fā)動(dòng)的關(guān)系。方法 回顧性分析我院49例未臨產(chǎn)和順產(chǎn)患者，用Hochest 33258染色法檢測(cè)細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化和用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果 羊膜上皮細(xì)胞、絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞、胎盤絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞及蛻膜細(xì)胞的凋亡指數(shù)在未臨產(chǎn)組與順產(chǎn)組有顯著性差異（P＜0.05）。結(jié)論 胎盤胎膜中細(xì)胞凋亡的變化可能與分娩發(fā)動(dòng)、產(chǎn)程進(jìn)展有關(guān)。

胎盤胎膜；細(xì)胞凋亡；分娩發(fā)動(dòng)

細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的生理性死亡。在胚胎形成與生長(zhǎng)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定、神經(jīng)系統(tǒng)以及調(diào)節(jié)免疫功能等方面有重要作用。近年來(lái)，胎盤胎膜中細(xì)胞凋亡與分娩發(fā)動(dòng)的相關(guān)性研究已成為熱點(diǎn)。胎盤胎膜細(xì)胞的凋亡對(duì)妊娠以及結(jié)局至關(guān)重要，其增殖分化與凋亡的發(fā)生可能導(dǎo)致一系列的病理性妊娠，有文獻(xiàn)報(bào)道，細(xì)胞凋亡的變化及異常表達(dá)與妊娠的發(fā)生、發(fā)展有著密切的關(guān)系［1］。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)未臨產(chǎn)剖宮產(chǎn)和順產(chǎn)病例的研究，探討細(xì)胞凋亡與分娩動(dòng)因的關(guān)系，分析細(xì)胞凋亡與分娩發(fā)動(dòng)的相關(guān)性，為病理性妊娠提供理論依據(jù)。

1　資料與方法

1.1一般資料：所有入選病例均為我院2008年5月至2010年10月的妊娠患者，均為足月妊娠初產(chǎn)婦。入選條件：全部病例均無(wú)妊娠高血壓、前置胎盤、胎盤早剝、羊水過(guò)多或過(guò)少、胎兒宮內(nèi)發(fā)育受限以及胎膜

早破以及無(wú)糖尿病、肝炎、甲狀腺功能亢進(jìn)癥、心臟病和肺結(jié)核等妊娠合并癥，且產(chǎn)程中均無(wú)特殊用藥。月經(jīng)周期規(guī)律（28～30 d），準(zhǔn)確記錄末次月經(jīng)時(shí)間，妊娠期間未使用激素或放置宮內(nèi)節(jié)育器，身體素質(zhì)良好。所有病例分為未臨產(chǎn)和順產(chǎn)兩組，其中未臨產(chǎn)組18例，患者因臀位、頭盆不稱或相對(duì)頭盆不稱等選擇性剖宮產(chǎn)終止妊娠，B超檢測(cè)及臨床證實(shí)胎兒已成熟而無(wú)產(chǎn)兆者，年齡22～34歲，平均26.9歲，孕齡37～41周，平均39周；順產(chǎn)組31例，B超檢測(cè)及臨床證實(shí)胎兒已成熟，年齡23～35歲，平均25.9歲，孕齡38～41周，平均39周。兩組之間在年齡和孕齡上無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。

1.2方法

1.2.1取材：取胎盤母面中央部約1.2 cm×1.2cm×1.2 cm大小組織塊，避開(kāi)出血、壞死及鈣化部位。用Hank's液洗3次，手術(shù)剪將胎盤胎膜剪成小塊（1 mm2），再用Hank's液3次，轉(zhuǎn)移至小青霉素瓶中，加入5～6倍的0.5%胰酶液，37 ℃消化20～30 min，每隔5 min振蕩1次，使細(xì)胞分離。加入5 mL DMEM培養(yǎng)液終止胰酶消化，靜置10 min，取懸液加入到離心管中，1000 rpm，離心10 min，棄上清液，再加入Hank's液5 mL，離心，棄上清液，將細(xì)胞調(diào)整到5×105/mL，轉(zhuǎn)移至25 mL細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，37 ℃下培養(yǎng)，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

1.2.2試劑：Hank's液（購(gòu)于上海生科生物科技有限公司）；0.5%胰酶（購(gòu)于上海博升生物科技有限公司）；PBS緩沖液（購(gòu)于上海生科生物科技有限公司）；DMEM培養(yǎng)液（購(gòu)于Gibco公司）；Hoechst33258-PI試劑盒（購(gòu)于南京碧波生物科技有限公司）；Annexin/PITC試劑盒（購(gòu)于上海優(yōu)寧維生物科技有限公司），具體操作按試劑盒步驟進(jìn)行，并設(shè)對(duì)照組。

1.2.3儀器：細(xì)胞培養(yǎng)箱（上海隆拓設(shè)備儀器有限公司）；流式細(xì)胞儀（北京東訊天地醫(yī)療儀器有限公司）；熒光顯微鏡（上海蔡康光學(xué)儀器廠）。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 17.0，所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩組率的比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié) 果

2.1Hoechst 33258/PI染色觀察凋亡細(xì)胞形態(tài)改變：未臨產(chǎn)組與順產(chǎn)組細(xì)胞Hoechst 33258/PI染色觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)變化比較，可見(jiàn)順產(chǎn)組凋亡細(xì)胞增多，表現(xiàn)為染色質(zhì)凝集，細(xì)胞核碎裂成碎片狀等細(xì)胞凋亡特征性變化（圖1、2）。

圖1　未臨產(chǎn)組Hoechst 33258/PI染色凋亡細(xì)胞形態(tài)變化

圖2　順產(chǎn)組Hoechst 33258/PI染色凋亡細(xì)胞形態(tài)變化

2.2胎盤胎膜中細(xì)胞凋亡情況：順產(chǎn)組羊膜上皮細(xì)胞、絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞、胎盤絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞及蛻膜細(xì)胞凋亡指數(shù)均比未臨產(chǎn)組升高，兩組之間差異有顯著性（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

2.3流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡情況：流式細(xì)胞儀分析羊膜上皮細(xì)胞、絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞、胎盤絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞、蛻膜細(xì)胞可見(jiàn)，順產(chǎn)組與未臨產(chǎn)組比較，凋亡率顯著升高（P＜0.05）。見(jiàn)圖3、4。

表1　未臨產(chǎn)組與順產(chǎn)組凋亡指數(shù)比較

圖3　未臨產(chǎn)組流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡細(xì)胞（A：羊膜上皮細(xì)胞；B：絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞；C：胎盤絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞；D：蛻膜細(xì)胞）

圖4　順產(chǎn)組流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡細(xì)胞（A：羊膜上皮細(xì)胞；B：絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞；C：胎盤絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞；D：蛻膜細(xì)胞）

3　討 論

1972年Kerr首次提出細(xì)胞凋亡的概念，宣告細(xì)胞凋亡探索的開(kāi)始，之后進(jìn)行了較多的研究［2］。細(xì)胞凋亡在胚胎發(fā)育、細(xì)胞更替、激素退化、萎縮和、老化以及自身免疫性疾病和腫瘤中，起著舉足輕重的作用［3］。細(xì)胞凋亡是受環(huán)境的刺激引起的一種受基因調(diào)控的主動(dòng)的生理性死亡，以形態(tài)學(xué)和生化改變?yōu)樘匦裕?-5］。本實(shí)驗(yàn)用熒光顯微鏡技術(shù)發(fā)現(xiàn)，順產(chǎn)組凋亡細(xì)胞增多，表現(xiàn)為染色質(zhì)凝集，細(xì)胞核碎裂成碎片狀等細(xì)胞凋亡特征性變化，未臨產(chǎn)組細(xì)胞凋亡相對(duì)較少。流式細(xì)胞儀分析羊膜上皮細(xì)胞、絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞、胎盤絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞、蛻膜細(xì)胞可見(jiàn)，順產(chǎn)組與未臨產(chǎn)組比較，凋亡率顯著升高（P＜0.05）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示隨分娩發(fā)動(dòng)胎盤、胎膜組織中發(fā)生凋亡的細(xì)胞逐漸增多，產(chǎn)程進(jìn)展越到后期發(fā)生凋亡的細(xì)胞數(shù)目也越多，表明胎盤、胎膜細(xì)胞凋亡的變化與分娩發(fā)動(dòng)和產(chǎn)程進(jìn)展有關(guān)。

目前，關(guān)于分娩發(fā)動(dòng)與產(chǎn)程進(jìn)展學(xué)說(shuō)主要理論有雌孕激素理論、前列腺素理論，受體理論，免疫因素理論以及宮頸成熟理論等?，F(xiàn)已證明蛻胎盤胎膜可合成和代謝雌、孕激素，使局部子宮內(nèi)雌激素水平升高，超過(guò)孕激素的抑制作用，就可使分娩發(fā)動(dòng)［1］。本實(shí)驗(yàn)認(rèn)為胎盤細(xì)胞凋亡與分娩發(fā)動(dòng)關(guān)系密切，機(jī)制可能為胎盤中的細(xì)胞凋亡發(fā)生率升高，影響胎盤的作用，使對(duì)雌激素、孕激素、前列腺素等的合成和代謝發(fā)生變化，從而導(dǎo)致分娩發(fā)動(dòng)與產(chǎn)程進(jìn)展。細(xì)胞凋亡與分娩發(fā)動(dòng)、產(chǎn)程進(jìn)展的關(guān)系以及與上述理論因素的相關(guān)性仍需進(jìn)一步研究。

［1］Kokawa K，Shikone T，Nakano R.Apoptosis in human chorionic villi and decidua during normal embryonic development and spontaneous abortion in the first trimester［J］.Placenta，1998，19（1）： 21-26.

［2］Kerr JF，Wyllie AH，Currie AR.Apoptosis ： abasic biological phenomenon with wide-ranging implications intissue kinetics［J］. Br J Cancer，1992，26（4） ：239-257.

［3］李玉林.病理學(xué)［M］.7版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008： 17-18.

［4］李巨.產(chǎn)科理論與手術(shù)［M］.沈陽(yáng)：遼寧科學(xué)技術(shù)出版社，1998：147-152.

［5］Aqarwal S，Roy S，Ray A，et al.Arsenic trioxide and lead acetate induce apoptosis in adult rat hepatic stem cells［J］.Cell Biol Toxicol，2009，25（4）： 403-413.

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1671-8194（2015）29-0175-02