陳海蘭，李曉華，初洪波，于洋，劉同彥，高越，劉同帥，邱智東，位鴻*

(1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長(zhǎng)春 130117；2.吉林敖東集團(tuán)力源制藥股份有限公司，吉林 133700)

·中藥工業(yè)·

穿山龍配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究△

陳海蘭1，李曉華1，初洪波1，于洋1，劉同彥2，高越1，劉同帥1，邱智東1，位鴻2*

(1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長(zhǎng)春 130117；2.吉林敖東集團(tuán)力源制藥股份有限公司，吉林 133700)

目的：建立穿山龍配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜法(TLC)對(duì)穿山龍配方顆粒進(jìn)行定性鑒別；用高效液相色譜法(HPLC)對(duì)其中的薯蕷皂苷進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果：薄層色譜鑒別特征斑點(diǎn)清晰，專屬性強(qiáng)；薯蕷皂苷進(jìn)樣量在0.604 8～7.560 0 μg與峰面積線性關(guān)系良好，r=0.999 9，平均回收率為97.46%，RSD為1.84%(n=6)。結(jié)論：本試驗(yàn)建立的定性及定量方法簡(jiǎn)單可行、重復(fù)性好，能有效地控制穿山龍配方顆粒的質(zhì)量。

穿山龍配方顆粒；薄層鑒別法；高效液相色譜法；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

穿山龍為薯蕷科植物穿龍薯蕷DioscoreanipponicaMakino的干燥根莖[1]，為《中華人民共和國(guó)藥典》2010版收錄藥材，氣微，味苦澀，性溫。具有祛風(fēng)止痛、舒筋活血、止咳化痰的功能。臨床上用于風(fēng)濕痛、風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、筋骨麻木、大骨節(jié)病、跌打損傷、咳嗽喘息、氣管炎等疾病的治療。中藥配方顆粒又稱免煎中藥，主要通過對(duì)單味中藥進(jìn)行加工提取，將其有效成分制成新劑型[2]。臨床應(yīng)用及相關(guān)藥理實(shí)驗(yàn)研究表明，單味中藥配方顆粒和傳統(tǒng)的水煎劑具有基本相同的療效和藥理作用，且中藥配方顆粒具有體積小、易于攜帶保存、質(zhì)量穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)[3]。穿山龍配方顆粒是穿山龍飲片經(jīng)水提、濃縮、干燥、制粒等工序制成的單味中藥配方顆粒劑。據(jù)報(bào)道[4-6]，薯蕷皂苷為穿山龍具有止咳、祛痰、脫敏、消炎用的甾體皂苷類活性成分。本試驗(yàn)采用HPLC[7-10]測(cè)定制劑中薯蕷皂苷含量，并參考《中華人民共和國(guó)藥典》一部穿山龍項(xiàng)下鑒別內(nèi)容，進(jìn)行穿山龍配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，為其質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀(日本島津，LC-2010A)；紫外檢測(cè)器，CLASS-VP色譜數(shù)據(jù)工作站，色譜柱：Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；KQZ3200E型超聲波清洗機(jī)(天鵬電子新技術(shù)有限公司)；DIF-6050型真空干燥箱(上海一恒實(shí)驗(yàn)儀器廠)；數(shù)碼照相機(jī)(索尼公司，型號(hào)：DSC-RX100)；硅膠G板(青島海洋化工有限公司)。

1.2 試藥

薯蕷皂苷元對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111539-200612，供含量測(cè)定用，規(guī)格：20 mg)；薯蕷皂苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，供含量測(cè)定用，規(guī)格：20 mg)；穿山龍對(duì)照藥材(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：121378-200401，供鑒別用，規(guī)格：5.0 g)；3批穿山龍配方顆粒中試樣品(批號(hào)分別為20130401，20130402，20130403)；乙腈、甲醇為色譜純(美國(guó)Fisher公司)；娃哈哈純凈水(杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司)；其他試劑均為分析純。

2 薄層色譜鑒別

2.1 對(duì)照品溶液制備

按照《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部穿山龍飲片【鑒別】項(xiàng)下規(guī)定，取薯蕷皂苷元對(duì)照品，加甲醇制成質(zhì)量濃度為1 mg·mL-1的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2 對(duì)照藥材溶液制備

取穿山龍對(duì)照藥材0.5 g，加甲醇25 mL，超聲處理(功率：250 W，頻率：40 kHz)30 min，濾過，濾液蒸干。殘?jiān)訚舛葹? mol·L-1的鹽酸溶液20 mL，使其溶解，置水浴中加熱水解30 min，放冷，再加入三氯甲烷30 mL，加熱回流15 min，濾過，取三氯甲烷液蒸干。殘?jiān)尤燃淄?甲醇(1∶1)的混合溶液2 mL，使其溶解，作為對(duì)照藥材溶液。

2.3 供試品溶液制備

另取3批中試樣品的配方顆粒各2 g，研細(xì)，同2.2項(xiàng)下方法制成供試品溶液。

2.4 薄層色譜鑒別

照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(20∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%磷鉬酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。配方顆粒與對(duì)照藥材顯示相同的斑點(diǎn)。結(jié)果見圖1。

注：1.薯蕷皂苷元對(duì)照品；2.穿山龍對(duì)照藥材；3.一批樣品；4.二批樣品；5.三批樣品。圖1 三批穿山龍配方顆粒中試樣品薄層鑒別圖

3 薯蕷皂苷含量測(cè)定

3.1 色譜條件

色譜柱：Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-水(43∶57)；柱溫為室溫；體積流量：1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：203 nm；進(jìn)樣體積：10 μL。陰性對(duì)照品、薯蕷皂苷對(duì)照品和供試品的HPLC 圖譜見圖2。

3.2 樣品溶液制備

3.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取薯蕷皂苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成質(zhì)量濃度為0.302 4 mg·mL-1含的溶液。

3.2.2 供試品溶液的制備 取穿山龍配方顆粒粉末(過四號(hào)篩)，約3.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入65%乙醇25 mL，稱定重量，超聲處理(功率：250 W，頻率：40 kHz)30 min，放冷，用65%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.2.3 陰性對(duì)照品溶液的制備 取色譜甲醇適量，0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

3.3 方法學(xué)考察

3.3.1 線性關(guān)系考察 分別精密吸取薯蕷皂苷對(duì)照品溶液2.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程：Y=315 320X+5372，r=0.999 9，表明薯蕷皂苷在0.604 8～7.560 0 μg與其峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系，見圖3。

注：A.薯蕷皂苷對(duì)照品；B.穿山龍配方顆粒；C.陰性對(duì)照品。圖2 薯蕷皂苷HPLC圖譜

圖3 薯蕷皂苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

3.3.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，RSD為1.24%，表明儀器精密度良好，結(jié)果見表1。

3.3.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取本品同一批次樣品6份，按3.2.2項(xiàng)下方法操作，按3.1色譜條件測(cè)定薯蕷皂苷平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.26 mg·g-1，RSD為1.33%，表明該方法重復(fù)性良好。見表2。

表1 精密度試驗(yàn)

表2 重復(fù)性試驗(yàn)

3.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取上述供試品溶液10 μL，分別在0、4、8、10、12、24 h進(jìn)樣，按3.1色譜條件測(cè)定，RSD為0.68%，色譜峰面積在24 h內(nèi)基本無變化，說明穩(wěn)定性較好，結(jié)果見表3。

表3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

3.3.5 回收率試驗(yàn) 取本品1.5 g(含薯蕷皂苷3.39 mg)，研細(xì)，精密稱定，精密加入薯蕷皂苷對(duì)照品4.04 mg，按3.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，平行6份，測(cè)定薯蕷皂苷含量，結(jié)果平均回收率為97.46%，RSD為1.84%，結(jié)果見表4。

表4 回收率試驗(yàn)結(jié)果

3.3.6 樣品測(cè)定 取3批樣品(不同批次的穿山龍飲片制備而成)，按3.2.2項(xiàng)下方法制備供試品，按3.1色譜條件測(cè)出峰面積，采用外標(biāo)法計(jì)算薯蕷皂苷的含量。結(jié)果見表5。

表5 3批樣品中薯蕷皂苷含量測(cè)定 /mg·g-1

4 討論

本試驗(yàn)以有效成分薯蕷皂苷為評(píng)價(jià)指標(biāo)，分別通過TLC、HPLC進(jìn)行定性和定量鑒別。

依照《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部穿山龍藥材鑒別方法對(duì)穿山龍配方顆粒進(jìn)行定性鑒別。供試品色譜中，配方顆粒與對(duì)照藥材顯示相同的斑點(diǎn)。

根據(jù)配方顆粒的工藝特點(diǎn)，依照《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部HPLC對(duì)樣品中的薯蕷皂苷含量進(jìn)行檢測(cè)，本品3批中試樣品含量測(cè)定數(shù)據(jù)平均為2.432 mg·g-1。含量限度按測(cè)定結(jié)果平均值的80%計(jì)算，為1.946 mg·g-1，因此暫定含量限度為每1 g穿山龍配方顆粒含薯蕷皂苷不得少于1.95 mg。

以上結(jié)果表明，本方法科學(xué)、準(zhǔn)確，可以作為穿山龍配方顆粒的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)于穿山龍配方顆粒的質(zhì)量控制，在完成有效成分或指標(biāo)成分的量化研究后，臨床療效指標(biāo)方面的研究有待進(jìn)一步深入。

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ResearchonQualityStandardofRhizomaDioscoreaeNipponicaeFormulaGranules

CHENHailan1，LIXiaohua1，CHUHongbo1，YUYang1，LIUTongyan，GAOYue1，LIUTongshuai1，QIUZhidong1，WEIHong2*

(1.ChangchunUniversityofTCMChangchun130117，China；2.JilinaodongGroupLiyuanPharmaceuticalCo.Ltd.Jilin133700，China)

Objective：To establish quality standard for Rhizoma Dioscoreae Nipponicae formula granules.Methods：TLC was used for qualitative identification of Rhizoma Dioscoreae Nipponicae formula granules，the content of the main active constituent dioscin was determined by HPLC.Results：The characteristic spots in TLC identification were clear and specific.There was a good linear relationship between the peak area and quantity of dioscin at the range of 0.604 8-7.560 0 μg，r=0.999 9，and the average recovery rate was 97.46%，RSD was1.84%(n=6).Conclusion：By the study，the established qualitative and quantitative methods are simple and feasible，reproducible，and suitable for the qualitycontrol of Rhizoma Dioscoreae Nipponicae formula granules effectively.

Rhizoma Dioscoreae Nipponicae formula granules；TLC；HPLC；quality standard

2015-01-13)

吉林省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(20130201009ZY)

*

位鴻，主任藥師，研究方向：中藥配方顆粒關(guān)鍵技術(shù)研究；E-mail：641538498@qq.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.7.016