熊濤，劉妍妍，黃濤，黃巧芬

（南昌大學生命科學與食品工程學院，食品科學與技術國家重點實驗室，江西南昌330047）

副干酪乳桿菌NCU622耐酸耐膽鹽及其黏附性能

熊濤，劉妍妍，黃濤，黃巧芬

（南昌大學生命科學與食品工程學院，食品科學與技術國家重點實驗室，江西南昌330047）

通過體外實驗研究副干酪乳桿菌NCU622的耐酸、耐膽鹽性能；采用體外細胞模型（人體結腸腺癌細胞系Caco-2細胞）測定副干酪乳桿菌NCU622的黏附性能，考察了菌體濃度、作用時間及生長階段對其黏附性能的影響，并對該菌株進行細胞毒性檢測。結果表明：副干酪乳桿菌NCU622在pH2.5的MRS液體培養(yǎng)基中作用3h，存活率為98.21%；在膽鹽質量濃度為0.3、0.5g/100mL的MRS液體培養(yǎng)基中作用4h，存活率分別為95.14%和85.07%。副干酪乳桿菌NCU622對Caco-2細胞的黏附能力較強，為（21.19±0.94）CFU/Caco-2細胞，且菌體濃度、作用時間及生長階段對其黏附性能均有影響。副干酪乳桿菌NCU622與Caco-2單層細胞共培養(yǎng)24h后，對其無裂解作用。這表明副干酪乳桿菌NCU622具有良好的耐酸耐膽鹽能力及較強的黏附性能，且對Caco-2細胞無裂解作用，符合微生態(tài)制劑和乳酸菌發(fā)酵功能食品的菌種要求。

副干酪乳桿菌NCU622；耐酸；耐膽鹽；黏附性能；細胞毒性

益生菌是指具有生物活性，攝入適當量時可以對宿主產(chǎn)生有益作用的微生物［1］。副干酪乳桿菌（Lactobacillus paracasei）廣泛存在于傳統(tǒng)發(fā)酵乳制品和人體胃腸道中，是近年來國內(nèi)外研究較多的一種益生乳酸菌［2］。口服益生菌若要到達腸道并發(fā)揮益生作用，需要一定數(shù)量的菌體能夠耐受有機體的防御機制，如口腔酶、胃液中的低pH值環(huán)境和小腸中的膽汁酸等。在這些因素中，胃酸的殺傷力最強，其次是膽汁酸，因此在體外能夠耐受一定濃度的酸和膽鹽是益生菌篩選的主要技術指標［3］。

益生菌對腸上皮細胞的黏附作用是其定殖的第一步［4］，能夠增強菌體與腸道細胞之間的信號交流、抑制病原菌在腸道的定殖和提高機體的免疫力［5］。因而，目前普遍把乳酸菌黏附性能作為評價其能否成為益生菌的重要標準。由于通過體內(nèi)實驗來評價益生菌的黏附性能非常困難，現(xiàn)普遍通過體外模擬實驗來近似反映體內(nèi)的情況［6］。Caco-2細胞為人結腸腺癌細胞，其形態(tài)和功能與正常的小腸上皮細胞非常接近［5］，能表達正常人腸細胞的形態(tài)和某些生理特性，因此被廣泛用作體外模型來評價乳酸菌的黏附性能［7］。

作為人體正常菌群的重要組成部分［8］，乳酸桿菌一直被認為是安全的［9］。通常情況下，這些人體正常定居者的致病性能是相當?shù)偷模?］，只有極少數(shù)感染病例的報道［10-11］。對于一些易感人群如免疫功能嚴重低下者、新生兒或住院患者，使用適當?shù)捏w外實驗來評估益生菌的安全性是必要的。乳酸脫氫酶是真核細胞中一種穩(wěn)定的胞質酶，該酶的釋放被看作細胞膜完整性的重要指標，并被廣泛用于細胞毒性檢測［12］。本實驗研究了副干酪乳桿菌NCU622的耐酸耐膽鹽能力及其黏附性能，考察了菌體濃度、作用時間及生長階段對黏附性能的影響，并對該菌株進行細胞毒性檢測，為該菌株能否在胃腸道環(huán)境中發(fā)揮有益作用提供參考。

1　材料與方法

1.1菌種與試劑

副干酪乳桿菌NCU622、人結腸腺癌細胞系Caco-2細胞均由南昌大學食品科學與技術國家重點實驗室保藏。

牛膽鹽上海藍季科技發(fā)展有限公司；DMEM培養(yǎng)液、胰蛋白酶-EDTA消化液、10×磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）北京索萊寶科技有限公司；乳酸脫氫酶細胞毒性檢測試劑盒碧云天生物技術研究所。

1.2儀器與設備

YXQ-LS-50SⅡ/75SⅡ立式壓力蒸汽滅菌器上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠；DNP-9272型生化培養(yǎng)箱上海精宏實驗設備有限公司；Airtech生物安全柜蘇凈集團安泰公司；PHS-25型pH計上海精密科學儀器有限公司；CO2培養(yǎng)箱長沙長錦科技有限公司；37XC倒置生物顯微鏡上海光學儀器進出口有限公司；Varioskan flash酶標儀賽默飛世爾科技有限公司。

1.3培養(yǎng)基

MRS（man rogosa sharpe）培養(yǎng)基，參見GB4789.35—2010《食品微生物學檢驗乳酸菌檢驗》［13］中的配制方法。

DMEM完全培養(yǎng)液（補充有100U/mL青霉素、100?g/mL鏈霉素、4mmol/L谷氨酰胺、體積分數(shù)1%非必需氨基酸和體積分數(shù)10%胎牛血清）用于Caco-2細胞的常規(guī)培養(yǎng)。

DMEM不完全培養(yǎng)液（補充有4mmol/L谷氨酰胺）用于黏附實驗及細胞毒性實驗。

1.4方法

1.4.1耐酸性實驗

用鹽酸調(diào)整MRS液體培養(yǎng)基的pH值至2.5、3.5和4.5，121℃高壓蒸汽滅菌20min，冷卻待用。將活化后的副干酪乳桿菌NCU622以體積分數(shù)1%［14］的接種量接種到上述處理后的培養(yǎng)基中，37℃恒溫培養(yǎng)，分別于0、1、2、3h取樣，用平板計數(shù)法測定活菌數(shù)。按式（1）計算存活率［15］。

1.4.2耐膽鹽實驗

用NaOH調(diào)整MRS液體培養(yǎng)基的pH值至8.0，在上述培養(yǎng)基中加入牛膽鹽，使其質量濃度分別為0.03、0.3、0.5g/100mL，以不添加牛膽鹽的MRS液體培養(yǎng)基作為對照，121℃高壓蒸汽滅菌20min，冷卻待用。將活化后的副干酪乳桿菌NCU622以體積分數(shù)1%［16］的接種量接種到上述處理后的培養(yǎng)基中，37℃恒溫培養(yǎng)，分別于0、1、2、3、4h取樣，用平板計數(shù)法測定活菌數(shù)。按式（2）計算存活率［15］。

1.4.3黏附性能實驗

1.4.3.1菌懸液的制備

將副干酪乳桿菌NCU622接種于MRS液體培養(yǎng)基中，37℃活化，離心（4500r/min，10min）收集菌體。用無菌PBS洗滌3次，將菌體重懸于PBS中，用乳酸菌活菌計數(shù)法［17］快速測定菌懸液中菌體濃度。

1.4.3.2Caco-2細胞培養(yǎng)

Caco-2加細胞凍存液保存在液氮中（-196℃），經(jīng)復蘇后置于50mL25cm2培養(yǎng)瓶中，加入DMEM完全培養(yǎng)液，于CO2培養(yǎng)箱（5%CO295%空氣）中37℃培養(yǎng)，每2d換液一次，待細胞生長良好時（70%～80%融合），用0.25%胰酶-EDTA消化液消化傳代［18］。

1.4.3.3黏附實驗

將培養(yǎng)好的Caco-2細胞進行消化后，用DMEM完全營養(yǎng)液調(diào)整細胞濃度為1×105個/mL，裝于6孔組織培養(yǎng)板中，每孔2mL，于CO2培養(yǎng)箱（5%CO295%空氣）中37℃培養(yǎng)至細胞長至單層。棄去組織培養(yǎng)板各孔中培養(yǎng)液，用無菌PBS緩沖液洗板2次。其中一孔用0.5mL胰酶-EDTA消化液進行消化，之后加入0.5mL無菌PBS緩沖液，用移液槍吹打，使細胞完全消化并混勻，用血球計數(shù)板計算細胞濃度。其他5孔各加入1mL DMEM不完全培養(yǎng)液和1mL菌懸液，用移液槍吹打混合，37℃培養(yǎng)。之后棄去組織培養(yǎng)板各孔中混合液，用無菌PBS緩沖液洗滌5次，以除去未黏附的菌體［19-20］。每孔用0.5mL胰酶-EDTA消化液進行消化后加入0.5mL無菌PBS緩沖液，進行梯度稀釋，平板計數(shù)法計算黏附的細菌數(shù)。

1.4.3.4菌體濃度對黏附性能的影響

取培養(yǎng)至14h的副干酪乳桿菌NCU622發(fā)酵液，離心（4500r/min，10min）收集菌體，用無菌PBS緩沖液調(diào)整其濃度為1×105、1×106、1×107、1×108、1×109CFU/mL，與Caco-2細胞共培養(yǎng)2h，計數(shù)黏附的細菌數(shù)。

1.4.3.5作用時間對黏附性能的影響

取培養(yǎng)至14h的副干酪乳桿菌NCU622發(fā)酵液，離心（4500r/min，10min）收集菌體，用無菌PBS緩沖液調(diào)整其濃度為1×108CFU/mL，與Caco-2細胞共培養(yǎng)0.5、1、1.5、2、2.5、3h，計數(shù)黏附的細菌數(shù)。

1.4.3.6生長階段對黏附性能的影響

分別取培養(yǎng)至延滯末期（2h）、對數(shù)期（8h）、穩(wěn)定初期（14h）、穩(wěn)定末期（32h）、衰亡期（40h）的副干酪乳桿菌NCU622發(fā)酵液，離心（4500r/min，10min）收集菌體，用無菌PBS緩沖液調(diào)整其濃度為1×108CFU/mL，與Caco-2細胞共培養(yǎng)2h，計數(shù)黏附的細菌數(shù)。

1.4.3.7副干酪乳桿菌NCU622對Caco-2細胞的黏附性能

取培養(yǎng)至14h的副干酪乳桿菌NCU622發(fā)酵液，離心（4500r/min，10min）收集菌體，用無菌PBS緩沖液調(diào)整其濃度為1×108CFU/mL，與Caco-2細胞共培養(yǎng)2h，進行黏附計數(shù)和黏附觀察。共培養(yǎng)2h后，棄去組織培養(yǎng)板各孔中混合液，用無菌PBS緩沖液洗滌5次，以除去未黏附的菌體。之后自然晾干，革蘭氏染色，顯微鏡下觀察黏附情況，并拍照。

1.4.4細胞毒性實驗

1.4.4.1菌懸液的制備

將副干酪乳桿菌NCU622接種于MRS液體培養(yǎng)基中，37℃活化14h后，4500r/min離心10min，收集菌體。用無菌PBS緩沖液洗滌3次，將菌體重懸于DMEM不完全培養(yǎng)液中，用乳酸菌活菌計數(shù)法［17］快速測定菌懸液中菌體濃度，調(diào)整菌體濃度至1×108CFU/mL。

1.4.4.2細胞毒性實驗

參照Messaoudi等［21］的方法并略做改動。將培養(yǎng)好的Caco-2細胞進行消化后，用DMEM完全培養(yǎng)液調(diào)整細胞濃度為1×105個/mL，加入96孔組織培養(yǎng)板中，每孔200μL，于CO2培養(yǎng)箱（5%CO295%空氣）中37℃培養(yǎng)至細胞長至單層。棄去組織培養(yǎng)板各孔中培養(yǎng)液，用無菌PBS緩沖液沖洗板2遍。將各培養(yǎng)孔分成如下幾組：包括無細胞的培養(yǎng)液孔（背景空白對照孔）、經(jīng)樣品處理的細胞孔（樣品孔）、未經(jīng)樣品處理的對照細胞孔（樣品對照孔）、未經(jīng)樣品處理的用于后續(xù)裂解的細胞孔（樣品最大酶活性對照孔）、無細胞的培養(yǎng)液和釋放劑孔（樣品最大酶活性背景空白對照孔），并做標記。在背景空白對照孔、樣品對照孔、樣品最大酶活性對照孔、樣品最大酶活性背景空白對照孔中各加入200μL DMEM不完全培養(yǎng)液，在樣品孔加入200μL菌懸液（1×108CFU/mL），將組織培養(yǎng)板置于CO2培養(yǎng)箱（5%CO295%空氣）中37℃培養(yǎng)24h。到預定檢測時間點前1h，從CO2培養(yǎng)箱中取出組織培養(yǎng)板，在樣品最大酶活性對照孔、樣品最大酶活性背景空白對照孔中加入試劑盒提供的乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）釋放試劑，加入量為原有培養(yǎng)液體積的10%。加入LDH釋放試劑后，反復吹打數(shù)次混勻，然后繼續(xù)在細胞培養(yǎng)箱中孵育。到達預定時間后，采用乳酸脫氫酶細胞毒性檢測試劑盒處理待測樣品，在490nm波長處測定各培養(yǎng)孔的吸光度，并按式（4）計算LDH釋放率。

式中：A0為樣品孔或樣品對照孔吸光度；A1為背景空白對照孔吸光度；A2為樣品最大酶活性對照孔吸光度；A3為樣品最大酶活性背景空白對照孔吸光度。

1.5數(shù)據(jù)分析

所有實驗重復3次，數(shù)據(jù)分析采用SPSS16.0中的One-Way ANOVA進行統(tǒng)計和顯著性分析，結果用±s表示。

2　結果與分析

2.1耐酸性

圖1　副干酪乳桿菌NCU622在不同pH值條件下的生長情況Fig.1Growth of L. paracasei NCU622at different pH values

細菌在經(jīng)由胃部到達腸道的過程中，影響其活性的主要因素是胃液的pH值［7］。人體胃液的pH值通常在2.5～3.5的范圍內(nèi)波動［22］，食物（尤其是流體）通過胃部的時間一般為1～2h［23］。副干酪乳桿菌NCU622的耐酸性實驗結果如圖1所示。在pH值為2.5的MRS液體培養(yǎng)基中作用3h后，副干酪乳桿菌NCU622的活菌數(shù)較0h處稍有下降，下降效果不顯著（P＞0.05）；在pH值為3.5的MRS液體培養(yǎng)基中作用3h后，其活菌數(shù)較0h處增加不顯著（P＞0.05）；在pH值為4.5的MRS液體培養(yǎng)基中能夠生長。這說明，當活化后的副干酪乳桿菌NCU622轉接至pH值分別為2.5、3.5和4.5的MRS液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)時，菌體產(chǎn)生應激反應消除了酸脅迫帶來的不利影響［24］，一定程度上保持了菌體細胞的穩(wěn)定性。

副干酪乳桿菌NCU622在pH2.5的MRS液體培養(yǎng)基中作用3h后，存活率可高達98.21%，活菌數(shù)在107CFU/mL以上，說明該菌株對酸具有較好的耐受性，可在胃酸環(huán)境中及酸性食品，如發(fā)酵酸奶中，保持較高的活性［7］。

2.2耐膽鹽性能

人體小腸中膽鹽的質量濃度在0.03～0.3g/100mL范圍內(nèi)波動［25］，食物在小腸中的停留時間一般為1～4h［23］，因此本實驗研究了副干酪乳桿菌NCU622在膽鹽質量濃度分別為0.03、0.3、0.5g/100mL的MRS液體培養(yǎng)基中作用0～4h后，其活菌數(shù)的變化情況，結果如圖2所示。

圖2副干酪乳桿菌NCU622在不同膽鹽質量濃度條件下的生長情況Fig.2Growth of L. paracasei NCU622at different concentrations of bile salts

由圖2可知，膽鹽對副干酪乳桿菌NCU622的生長有一定的抑制作用，且隨其質量濃度的升高，抑制作用增強。在膽鹽質量濃度為0.03g/100mL的MRS液體培養(yǎng)基中，隨作用時間的延長，副干酪乳桿菌NCU622的活菌數(shù)呈增長趨勢，培養(yǎng)4h后，其活菌數(shù)較0h處顯著增加（P＜0.05）。在膽鹽質量濃度分別為0.3、0.5g/100mL的MRS液體培養(yǎng)基中作用1h后，活菌數(shù)均出現(xiàn)顯著下降（P＜0.05）?；罹鷶?shù)在短時間內(nèi)顯著下降可能是由于此質量濃度的膽鹽使細胞膜質迅速溶解、膜內(nèi)蛋白質解離，這種近乎瞬間的溶解導致細胞內(nèi)物質流出，部分細胞迅速死亡［26］。而當作用時間超過1h時，活菌數(shù)隨作用時間的延長而略有增加，說明在此膽鹽質量濃度條件下存活下來的菌體細胞能保持較好的穩(wěn)定性且出現(xiàn)生長趨勢。副干酪乳桿菌NCU622在膽鹽質量濃度分別為0.3、0.5g/100mL的MRS液體培養(yǎng)基中作用4h后，存活率分別為95.14%和85.07%，活菌數(shù)均在106CFU/mL以上，滿足乳酸菌發(fā)揮益生作用的菌體濃度（一般為106～109CFU/mL）［27］要求。以上結果表明，該菌株在一定程度上可有效消除膽鹽脅迫所帶來的不利影響，在人體膽鹽生理濃度范圍內(nèi)可保持較高的活性，具有較好的膽鹽耐受性。

2.3黏附性能

2.3.1不同因素對副干酪乳桿菌NCU622黏附Caco-2細胞性能的影響

圖3不同菌體濃度對副干酪乳桿菌NCU622黏附Caco-2細胞的影響Fig.3Effect of different bacterial concentrations on the adherence of L. paracasei NCU622to Caco-2cells

2.3.1.1菌體濃度對黏附性能的影響由圖3可知，當菌體濃度小于108CFU/mL時，黏附的細菌數(shù)隨菌體濃度的提高而顯著增加（P＜0.05）；當菌體濃度達到108CFU/mL后，黏附菌數(shù)略有增加，增加效果不顯著（P＞0.05），黏附趨于飽和。推測該菌株的黏附性能在一定范圍內(nèi)具有濃度依賴性，而當菌體達到一定濃度后，其表面的黏附素已經(jīng)和細胞中的大部分特異性受體結合，黏附在動態(tài)平衡中保持一定的數(shù)目。

2.3.1.2作用時間對黏附性能的影響

圖4不同作用時間對副干酪乳桿菌NCU622黏附Caco-2細胞的影響Fig.4Effect of different incubation time on the adherence of L. paracasei NCU622to Caco-2cells

由圖4可知，當副干酪乳桿菌NCU622與Caco-2細胞的作用時間小于2h時，黏附菌數(shù)隨作用時間的延長而顯著增加（P＜0.05）。當作用時間大于2h時，黏附菌數(shù)隨作用時間的延長而略有增加，增加效果不顯著（P＞0.05）。說明副干酪乳桿菌NCU622對Caco-2細胞的黏附作用在2h內(nèi)存在時間依賴關系，在2h后達到平衡狀態(tài)。

Chauvière等［19］研究發(fā)現(xiàn)，在嗜酸乳桿菌LB對Caco-2細胞的黏附過程中，前1.5h內(nèi)黏附的菌體數(shù)量隨作用時間的延長而迅速增加，1.5h后趨于平穩(wěn)。Elo等［28］發(fā)現(xiàn)，鼠李糖乳桿菌GG與Caco-2細胞相互作用2h后黏附達到飽和，但在1h時的黏附菌數(shù)只有最大黏附菌數(shù)的1/3左右。乳酸菌的黏附性是吸附和脫附的綜合效應，故黏附過程存在時間效應，需要作用一定的時間才能達到動態(tài)平衡［29］。

2.3.1.3生長階段對黏附性能的影響

圖5不同生長階段的副干酪乳桿菌NCU622對Caco-2細胞黏附性能Fig.5Effect of different growth stages on the adherence of L. paracasei NCU622to Caco-2cells

由圖5可知，當培養(yǎng)時間小于14h時，黏附的細菌數(shù)隨著菌齡的增加而顯著增加（P＜0.05）。穩(wěn)定末期，黏附的細菌數(shù)略有下降，差異不顯著（P＞0.05）。而到了衰亡期時，黏附的細菌數(shù)與穩(wěn)定期相比顯著減少（P＜0.05）。說明穩(wěn)定期時副干酪乳桿菌NCU622對

Caco-2細胞的黏附性能最好，這與陳臣［6］的研究結論一致。推測可能是由于穩(wěn)定期時，菌體細胞不斷積累黏附素及相關物質，且菌體表面結構較穩(wěn)定，更利于黏附作用的發(fā)生。

2.3.2副干酪乳桿菌NCU622對Caco-2細胞的黏附性能

圖6副干酪乳桿菌NCU622對Caco-2細胞的黏附（×1000）000Fig.6Adherence of L. paracasei NCU622to Caco-2cells（×10001000）

副干酪乳桿菌NCU622對Caco-2細胞的黏附情況見圖6，經(jīng)平板計數(shù)黏附的細菌數(shù)為（21.19±0.94）CFU/Caco-2細胞。陳臣［6］研究了4株乳桿菌與Caco-2細胞共培養(yǎng)2h后的黏附性能，植物乳桿菌ST-Ⅲ、鼠李糖乳桿菌LGG、干酪乳桿菌BD-Ⅱ和干酪乳桿菌LC2W的黏附菌數(shù)分別為（28.43±1.65）、（16.11±1.57）、（3.82±0.90）、（3.24±0.56）CFU/Caco-2細胞。本研究中副干酪乳桿菌NCU622對Caco-2細胞的黏附菌數(shù)為（21.19±0.94）CFU/Caco-2細胞，較植物乳桿菌ST-Ⅲ的低，較鼠李糖乳桿菌LGG、干酪乳桿菌BD-Ⅱ和干酪乳桿菌LC2W的高。任大勇［5］體外研究了9株乳桿菌對Caco-2細胞的黏附性能，結果顯示植物乳桿菌1.557、唾液乳桿菌23174及干酪乳桿菌20296的黏附效果較好，其黏附菌數(shù)分別為（9.12±0.65）、（6.65±0.57）、（4.92±0.61）CFU/Caco-2細胞，較副干酪乳桿菌NCU622的低。

2.4細胞毒性

由圖7可知，副干酪乳桿菌NCU622與Caco-2單層細胞共培養(yǎng)24h后，培養(yǎng)液中LDH的釋放率與單獨培養(yǎng)Caco-2單層細胞時無顯著性差異（P＞0.05），說明副干酪乳桿菌NCU622在與Caco-2單層細胞共培養(yǎng)的過程中對其無明顯裂解作用。

3　結論

副干酪乳桿菌NCU622具有良好的耐酸及耐膽鹽性能。在pH2.5的MRS液體培養(yǎng)基中作用3h后，存活率為

98.21%，活菌數(shù)在107CFU/mL以上；在膽鹽質量濃度分別為0.3、0.5g/100mL的MRS液體培養(yǎng)基中作用4h后，存活率分別為95.14%和85.07%，活菌數(shù)均在106CFU/mL

以上。副干酪乳桿菌NCU622對Caco-2細胞的黏附性能較強，當菌體濃度為1×108CFU/mL、共培養(yǎng)2h后，平均每個Caco-2細胞上黏附的細菌數(shù)為（21.19±0.94）CFU。菌體濃度、作用時間及生長階段對其黏附性能均有影響。黏附菌數(shù)隨著菌體濃度的增大而不斷增加，當副干酪乳桿菌NCU622的菌體濃度達到108CFU/mL后，黏附菌數(shù)增加不顯著（P＞0.05）。副干酪乳桿菌NCU622對Caco-2細胞的黏附在一定時間范圍（0～2h）內(nèi)存在量效關系，培養(yǎng)2h后，黏附趨于飽和。穩(wěn)定期的副干酪乳桿菌NCU622

對Caco-2細胞的黏附效果最好。副干酪乳桿菌NCU622與

Caco-2單層細胞共培養(yǎng)24h后，不會引起細胞的裂解。綜上可知，副干酪乳桿菌NCU622具有較好的耐酸耐膽鹽性能，對Caco-2細胞的黏附性能較強，且對其無明顯裂解作用，符合益生菌的基本特征，值得進一步研究。

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Acid，Bile Tolerance and Adhesion Properties of Lactobacillus paracasei NCU622

XIONG Tao，LIU Yanyan，HUANG Tao，HUANG Qiaofen
（State Key Laboratory of Food Science and Technology，College of Life Science and Food Engineering，Nanchang University，Nanchang330047，China）

Lactobacillus paracasei NCU622was examined for resistance to acid and bile，adhesion to Caco-2cells，and cytotoxicity against Caco-2cells.Furthermore，the impacts of bacterial concentration，incubation time and growth stage on the adhesion were also studied.It was found that L. paracasei NCU622showed a survival rate of98.21%after3h incubation in MRS broth adjusted to pH2.5.The survival rates of L. paracasei NCU622were95.14%and85.07%after4h incubation in MRS broth supplemented with0.3and0.5g/100mL oxgall，respectively.The adhesion（21.19±0.94）CFU/Caco-2cell）of L. paracasei NCU622was very excellent which was affected by the bacterial concentration，incubation time and growth stage.Moreover，L. paracasei NCU622did not cause Caco-2cells lysis after24h co-culture.In summary，L. paracasei NCU622tolerated well acid and bile，expressed high adhesion to Caco-2cells，and did not cause Caco-2cells lysis.These results demonstrate that L. paracasei NCU622presents favorable strain-specific properties for its utilization as probiotics in microecologics and fermented functional foods，and may have broad prospects for applications in fermented and functional foods.

L. paracasei NCU622；acid tolerance；bile tolerance；adhesion；cytotoxicity

TS201.3

A

1002-6630（2015）05-0093-06

10.7506/spkx1002-6630-201505018

2014-03-24

國家高技術研究發(fā)展計劃（863計劃）項目（2011AA100904）；“贛鄱英才555工程”領軍人才培養(yǎng)計劃項目（18000063）；江西省教育廳高?？萍悸涞赜媱濏椖浚ㄚM財教［2011］243號）；國家重點實驗室自由探索課題（SKLF-ZZB-201309）

熊濤（1970—），男，教授，博士，研究方向為益生菌及大宗果蔬高值化利用。E-mail：xiongtao0907@163.com