曲林　劉文亮（1.哈爾濱商業(yè)大學(xué)，黑龍江哈爾濱 150076；.哈藥集團(tuán)中藥二廠，黑龍江哈爾濱 150078）

高效液相色譜法測(cè)定香芍甘草顆粒中α-香附酮的含量

曲林1，2劉文亮2
（1.哈爾濱商業(yè)大學(xué)，黑龍江哈爾濱 150076；2.哈藥集團(tuán)中藥二廠，黑龍江哈爾濱 150078）

目的：利用HPLC法檢測(cè)α-香附酮在香芍甘草顆粒中的含量。方法：HPLC法。色譜柱為Agilent C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相為乙腈-水（77：23）；流速1.0ml/min；柱溫：20℃；檢測(cè)波長(zhǎng)250nm。結(jié)果：HPLC含量測(cè)定方法平均回收率為100.34%，RSD為1.38%（n=9）。結(jié)論：本文所用方法簡(jiǎn)潔快捷，可以用于檢測(cè)α-香附酮在香芍甘草顆粒中的含量。

香芍甘草顆粒 HPLC α-香附酮

香芍甘草顆粒是由炙甘草、白芍、生香附三味中草藥得到的中藥復(fù)方制劑，具有養(yǎng)血滋陰、和胃理氣、舒肝止痛的功能。臨床首要應(yīng)用于消化科各類(lèi)潰瘍疾病的有效治療。為了有效控制香芍甘草顆粒的質(zhì)量，經(jīng)過(guò)文獻(xiàn)檢索［1］及反復(fù)試驗(yàn)驗(yàn)證，本試驗(yàn)采用的HPLC方法檢測(cè)α-香附酮在香芍甘草顆粒中的含量。

1　儀器與試藥

1.1儀器

METTLER XS205電子天平；Agilent-HPLC1200系列，并帶有其對(duì)應(yīng)的工作站。

1.2試藥

α-香附酮標(biāo)準(zhǔn)品（南京澤朗生物科技有限公司，純度：HPLC &ge；98%），色譜乙腈（Concord），分析甲醇（Concord）；香芍甘草顆粒（哈藥集團(tuán)中藥公司科研自制）。

2　實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

色譜柱Agilent C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相為乙腈-水（73：27）；流速1.0ml/min；柱溫20℃；檢測(cè)波長(zhǎng)250nm；進(jìn)樣量10μl。

2.2溶液制備

2.2.1配制標(biāo)準(zhǔn)品溶液

精密量取α-香附酮標(biāo)準(zhǔn)品，置于50ml的量瓶中，加入適量甲醇至標(biāo)線，即得1μl/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.2.2配制樣品溶液

將香芍甘草顆粒粉碎成細(xì)粉，取約10g，精密稱(chēng)定，將其加入到100ml的磨口錐形瓶中，精密量取50ml甲醇，稱(chēng)定，超聲處理35分鐘，放涼，再次稱(chēng)定，吸取甲醇溶液適量補(bǔ)充缺失的重量，振蕩均勻，再用孔徑為0.45μm的有機(jī)微孔濾膜過(guò)濾，即得樣品溶液。

2.2.3測(cè)定法

設(shè)定自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣量為10μl，樣品名稱(chēng)分別為α-香附酮標(biāo)品、香芍甘草顆粒樣品，在2.1項(xiàng)條件下進(jìn)行檢測(cè)，得到含量值。

2.3專(zhuān)屬性試驗(yàn)

配制只含有甘草和白芍的溶液，按樣品溶液的方法配制為陰性樣品溶液，設(shè)定進(jìn)樣量為10μl，在2.1條件下進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定結(jié)果表明，缺樣空白溶液無(wú)干擾，即此檢測(cè)方法的專(zhuān)屬性良好。

2.4線性關(guān)系考察

精密量取0.5mlα-香附酮標(biāo)準(zhǔn)品，放于50ml量瓶中，加入適量分析甲醇到容量瓶標(biāo)線，制成的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，濃度為10μl/ml。分別精密量取上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液1、3、5、7、9、11ml置于50ml量瓶中，加入分析甲醇再次到標(biāo)線，振蕩均勻，制成濃度為0.2、0.6、1.0、1.4、1.8、2.2μl/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，設(shè)定進(jìn)樣量為10μl，按2.1條件檢測(cè)，記錄峰面積分別為1578.71、4761.13、7866.44、11003.23、13978.34、17276.37。縱坐標(biāo)是峰面積，橫坐標(biāo)為α-香附酮濃度，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為：A=7805.2C+44.243，r2=0.9998。結(jié)果表明：在0.2μl/ml ～2.2μl/ml的濃度區(qū)間內(nèi)，α-香附酮濃度與其峰面積之間有著良好的線性關(guān)系。

2.5精密度試驗(yàn)

選用濃度為1.0μl/mlα-香附酮標(biāo)準(zhǔn)品溶液，設(shè)定進(jìn)樣量10μ l，6次進(jìn)樣，記錄峰面積分別為7884.92、7864.24、7861.35、7866.41、7853.02、7860.51。測(cè)定計(jì)算，RSD值為0.13%（n=6），試驗(yàn)結(jié)果表明系統(tǒng)有良好的精密度。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)

取2.2.2項(xiàng)下樣品溶液，分別在1、3、5、7、10、12h時(shí)間點(diǎn)按照2.1項(xiàng)下條件檢測(cè)，計(jì)算含量，RSD為0.57%，由此可以判斷在12h內(nèi)α-香附酮在香芍甘草顆粒中的含量穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性試驗(yàn)

稱(chēng)取相同批次香芍甘草顆粒6份，精密稱(chēng)定，在2.1項(xiàng)條件下檢測(cè)，檢測(cè)α-香附酮的含量，其含量結(jié)果的平均數(shù)計(jì)算為5.03μl/g，RSD為0.54%，結(jié)果表明此方法有良好的重復(fù)性。

2.8加樣回收試驗(yàn)取含量為5.03μl/g 的9份香芍甘草顆粒試樣，每份取約5g，精密稱(chēng)定，加入10μl/mlα-香附酮對(duì)照品溶液2ml、2.5ml、3ml（含α-香附酮分別為20μl/ml、25μl/ml、30μl/ml），按2.2.3項(xiàng)下操作方法，在2.1條件下進(jìn)行檢測(cè)。測(cè)定記錄結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　α-香附酮加樣回收率記錄表（n=9）

3　討論

通過(guò)實(shí)驗(yàn)，本文所建立α-香附酮含量檢測(cè)方法在檢測(cè)濃度區(qū)間內(nèi)有良好的線性關(guān)系，其重復(fù)性、精密度、穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果均符合要求，操作快速簡(jiǎn)易，可用于本品中α-香附酮的測(cè)定，可以用來(lái)控制香芍甘草顆粒質(zhì)量。

本文用UV法在200nm-400nm對(duì)α-香附酮進(jìn)行了檢測(cè)，其結(jié)果是在250nm處α-香附酮的吸收值最大，所以設(shè)定250nm為選擇的檢測(cè)波長(zhǎng)。

［1］許世輝.高效液相色譜法測(cè)定婦科調(diào)經(jīng)片中α-香附酮的含量［J］.海峽藥學(xué)，2010，（9）：62-63.