李玉鳳，林春燕，任杰紅，張赟華*（云南省食品藥品檢驗(yàn)所，云南 昆明 650011）

磷酸伯氨喹原料及片劑中主要雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)鑒定

李玉鳳，林春燕，任杰紅，張赟華*
（云南省食品藥品檢驗(yàn)所，云南 昆明 650011）

采用LC-MS 聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行鑒定；利用半制備高效液相色譜從磷酸伯氨喹原料中分離制備該雜質(zhì)，進(jìn)一步采用核磁技術(shù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證。得到了磷酸伯氨喹原料的1個(gè)主要雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)確證結(jié)果，對(duì)磷酸伯氨喹原料的雜質(zhì)分析、質(zhì)量控制和生產(chǎn)工藝的改進(jìn)具有重要作用。

磷酸伯氨喹原料；磷酸伯氨喹片劑；雜質(zhì)結(jié)構(gòu)；液質(zhì)聯(lián)用；半制備高效液相色譜；核磁鑒定

0 引言

伯氨喹由Elderfield于1946年化學(xué)合成，并于1955年改良工藝，其成鹽形式有磷酸鹽與草酸鹽兩種，主要應(yīng)用形式為磷酸伯氨喹，其藥用價(jià)值很快被發(fā)現(xiàn)并應(yīng)用于臨床，作為抗瘧藥載入英美藥典。磷酸伯氨喹于《中國(guó)藥典》1963年版首次收載，此后每版《中國(guó)藥典》均收載了該品種。磷酸伯氨喹包括美國(guó)藥典規(guī)定的對(duì)照品中都含有明顯的特殊雜質(zhì)，但《中國(guó)藥典》2010年版二部酸伯氨喹原料項(xiàng)下僅用薄層色譜法來(lái)控制雜質(zhì)總量，未控制特殊雜質(zhì)的限量。國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)有過(guò)對(duì)此雜質(zhì)的一些結(jié)構(gòu)推測(cè)，國(guó)內(nèi)認(rèn)為是光學(xué)異構(gòu)體，國(guó)外文獻(xiàn)有的認(rèn)為是叔氨喹，有的認(rèn)為是異伯喹。但都未做結(jié)構(gòu)鑒定，只有推測(cè)。本文采用液相色譜-質(zhì)譜（HPLC-MS）聯(lián)用技術(shù)對(duì)該雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)進(jìn)行初步分析，并進(jìn)一步利用半制備高效液相色譜從磷酸伯氨喹原料中分離制備該雜質(zhì)，采用核磁技術(shù)進(jìn)行了結(jié)構(gòu)確證，從而為磷酸伯氨喹的質(zhì)量控制、生產(chǎn)工藝的改進(jìn)提供依據(jù)，圖1 為磷酸伯氨喹的化學(xué)結(jié)構(gòu)

圖1 磷酸伯氨喹的化學(xué)結(jié)構(gòu)

1　儀器與試藥

Waters e2695高效液相色譜儀，Agilent 1200高效液相色譜儀，waters質(zhì)譜儀，waters半制備液相色譜儀，avance核磁共振波譜儀，mettler電子天平。

甲醇（ 色譜純，Merck 公司） ，超純水，甲酸，磷酸伯氨喹對(duì)照品（usp），3批磷酸伯氨喹片樣品收集自1個(gè)廠家，4批磷酸伯氨喹原料收集自2個(gè)廠家。

2　磷酸伯氨喹的雜質(zhì)考察

2.1常規(guī)液相色譜法

2.1.1色譜條件

圖2 磷酸伯氨喹對(duì)照品色譜圖

圖3 磷酸伯氨喹樣品色譜圖（12批次樣品的色譜圖）

2.1.2溶液的制備

原料藥：精密稱(chēng)取磷酸伯氨喹原料20mg，置50mL量瓶中，加流動(dòng)相適量，超聲處理使其溶解，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。

磷酸伯氨喹片：取該品20片，精密稱(chēng)定，研細(xì)，精密稱(chēng)取適量（約相當(dāng)于磷酸伯氨喹10mg）置50mL量瓶中，加流動(dòng)相適量，超聲處理使其溶解，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。

另取磷酸伯氨喹對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成每1 mL 中約含0.2mg的溶液，搖勻即得。

2.1. 3 雜質(zhì)的考察與結(jié)果

以“2.1. 2”項(xiàng)下方法對(duì)3 批次磷酸伯氨喹片、4批次磷酸伯氨喹原料進(jìn)行雜質(zhì)考察，發(fā)現(xiàn)在7 批次樣品的色譜圖中，有一主成分峰，主峰前有一共同明顯的雜質(zhì)峰，稱(chēng)其為雜質(zhì)1。以購(gòu)買(mǎi)到的磷酸伯氨喹對(duì)照品進(jìn)樣，也有同樣的兩個(gè)峰，如圖2和圖3所示。

2.2液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用法

液相條件：Waters e2695高效液相色譜儀，采用3.5μm，4.6×150mm Waters SunFire的C18色譜柱；以戊烷磺酸鈉溶液—甲醇（50∶50）為流動(dòng)相；流速為0.5mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為264nm。

式(10)表示根據(jù)zn,p,h,kn,p,f,wn,p計(jì)算每一個(gè)分塊p與芯片f分區(qū)交集數(shù)值上限，式(11)規(guī)約分塊p在左右兩側(cè)與f分區(qū)部分相交時(shí)重疊區(qū)域的范圍.

質(zhì)譜條件：離子源為ESI，質(zhì)量分析器為四極桿飛行時(shí)間，正離子檢測(cè)模式，離子掃描范圍m/ z 50～ 1500，離子源前進(jìn)樣分流比為3∶ 1。離子源參數(shù)：毛細(xì)管電壓3. 5 kV，噴霧電壓0. 31 MPa，脫溶劑氣（ N2） 流量為10 L·min - 1，干燥氣溫度350 ℃，碎裂電壓120 V，碰撞能量15 eV。

溶液制備同2.1.2項(xiàng)下。

結(jié)果：雜質(zhì)1與主成分2個(gè)組分結(jié)構(gòu)不同，見(jiàn)圖4，圖5。

圖4 雜質(zhì)1的質(zhì)譜圖

圖5 磷酸伯氨喹（主峰）的質(zhì)譜圖

3　雜質(zhì)1的分離與結(jié)構(gòu)鑒定

3.1雜質(zhì)1的分離

利用制備液相色譜法進(jìn)行雜質(zhì)1分離。Agilent 1200液相色譜儀，采用Agilent ZORBAX StableBond C18 規(guī)格： 250mm*9.4mm*5um色譜柱，以40%甲醇-0.5%甲酸水為流動(dòng)相，流速1. 0 mL·min - 1，檢測(cè)波長(zhǎng)264nm，進(jìn)樣量50μl。

取磷酸伯氨喹原料制成100mg/mL的溶液按上述色譜條件進(jìn)行雜質(zhì)1的分離，并進(jìn)行純化，得到純度大于98%的單體化合物20mg。

3.2雜質(zhì)1的結(jié)構(gòu)鑒定

雜質(zhì)1通過(guò)MS、1H-NMR、13C-NMR及二維核磁進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析與確認(rèn)，得知雜質(zhì)1為異伯喹（8-［（4-aninopentyl）anio］-6-methoxyquinoline），結(jié)構(gòu)如圖6所示。

圖6雜質(zhì)1 異伯喹（8-［（4-Aminopentyl）amino］-6-methoxyquinoline）的化學(xué)結(jié)構(gòu)圖

雜質(zhì)1（異伯喹）1H-NMR（400MHz， C5D5N）：

8.67（1H， d， J=2.8Hz， H-2’）， 8.03（1H， dd，J=8.0，1.2Hz， H-4’）， 7.32（1H， dd， J=8.0， 2.8Hz，H-3’），6.74（1H， t，J=4.8Hz， 1-H）， 6.60（1H， d，J=2.4Hz，HHH H-7’）， 6.55（1H， d， J=2.4Hz， H-5’），3.81（3H， s， OCH3），3.25（2H， m， H-2），2.84（1H， m，H-5），1.73（2H， m， H- 3）， 1.39（2H，m，H-4）， 1.00（3H，d， J=5.6Hz， H-6）.

雜質(zhì)1（異伯喹）13C-NMR（100MHz， D2O）： δ

160.0（C-6’），149.9（C-8’）， 146.4（C-9’），144.4（C-2’）， 134.8（C-4’）， 130.2（C-10’），122.1（C-3’）， 96.7（C-7’）， 92.0（C-5’），55.0（OCH3）， 47.0（C-5）， 43.4（C-2）， 37.8（C-4），26.0（C-3）， 24.3（C-6）.

4　雜質(zhì)的來(lái)源分析

雜質(zhì)異伯喹可能是由肼解反應(yīng)的原料丁胺喹啉的結(jié)構(gòu)異構(gòu)體，在生成游離伯喹時(shí)同時(shí)產(chǎn)生反應(yīng)生成的，見(jiàn)圖7。

5　討論

1）本文的研究確定了伯氨喹原料及制劑中的雜質(zhì)1為8-［（4-Aminopentyl）amino］-6-methoxyquinoline（異伯喹），而不是磷酸伯氨喹的光學(xué)異構(gòu)體也不是叔氨喹。

圖7 雜質(zhì)來(lái)源分析圖

2）對(duì)雜質(zhì)1（異伯喹）的來(lái)源進(jìn)行了推測(cè)，異伯喹可能是由肼解反應(yīng)的原料丁胺喹啉的結(jié)構(gòu)異構(gòu)體，在生成游離伯喹的時(shí)候同時(shí)產(chǎn)生反應(yīng)生成的。要想控制雜質(zhì)1異伯喹的量，必須對(duì)肼解反應(yīng)的原料丁胺喹啉的質(zhì)量進(jìn)行控制。

3）在美國(guó)藥典對(duì)照品中也檢出了此雜質(zhì)，說(shuō)明在現(xiàn)有條件下無(wú)法回避異伯喹雜質(zhì)的產(chǎn)生。

R927

B

1004-1168（2015）03-0067-04

2015-04-03

李玉鳳（1980-），女，云南昆明人，主管藥師，主要從事化學(xué)藥品的質(zhì)量檢驗(yàn)、藥品標(biāo)準(zhǔn)起草和藥品的產(chǎn)品質(zhì)量評(píng)價(jià)研究工作。