蔣太白，危 莉，王道平，蔣小虎，危 英＊

（1.貴陽中醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)系，貴州 貴陽550002；2.貴州省中國科學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗室，貴州 貴陽550002）

禿葉黃檗（Phellodendron chinese Schneid.var.glabriusculum Schneid.）為蕓香科黃檗屬（Phellodendron）植 物，是 川 黃 檗 （P.chinese Schneid）的變種，兩者的樹皮常作為黃柏藥材使用。該植物多生于海拔800～1 500m山地疏林或密林中，在四川、貴州、湖南等南方地區(qū)均有分布［1］。其味苦、性寒，具有清熱燥濕，瀉火除蒸，解毒療瘡的功效，主要用于治療濕熱瀉痢，熱淋澀痛，骨蒸勞熱，盜汗，遺精，瘡瘍腫毒等病癥［2］。據(jù)《中華本草》記載，黃檗果實(shí)揮發(fā)油及其單體香葉烯具有一定的鎮(zhèn)咳作用［3］。蘇榮輝［4］等發(fā)現(xiàn)，黃皮樹干果的提取物有滅殺家蠅和白蟻拒食的活性。晏晨［5－6］等研究發(fā)現(xiàn)，禿葉黃檗果95%乙醇提取物的酸水解產(chǎn)物中含有大量三萜類和生物堿類化合物。目前，禿葉黃檗除了樹皮作為藥用來源外，其果實(shí)的利用未見報道。為綜合開發(fā)利用禿葉黃檗資源，筆者采用頂空固相微萃?。瓪赓|(zhì)聯(lián)用法，首次對禿葉黃檗新鮮果實(shí)揮發(fā)性化學(xué)成分進(jìn)行定性、定量分析。

1 材料與方法

1.1 藥材與儀器

藥材：禿葉黃檗果實(shí)于2012年9月采集于貴州省貴陽市藥用植物園，經(jīng)貴陽中醫(yī)學(xué)院陳德媛教授鑒定，試驗樣本（No.05／2012／PCS）保存于貴陽中醫(yī)學(xué)院植化教研室。

儀器：HP6890／5975CGC／MS聯(lián)用儀（美國安捷倫公司），手動固相微萃取（SPME）裝置（美國Supelco公司），StableFlex復(fù)合萃取纖維頭：2cm－50／30μm DVB／CAR／PDMS（美國Supelco公司）。

1.2 揮發(fā)性物質(zhì)的提取

取樣品約5.0g，置于15mL固相微萃取儀采樣 瓶 中，插 入 裝 有 2cm－50／30μm DVB／CAR／PDMS StableFlex纖維頭的手動進(jìn)樣器，在85℃左右頂空萃取30min取出，快速移出萃取頭并立即插入氣相色譜儀進(jìn)樣口（溫度250℃）中，熱解析3min進(jìn)樣。

1.3 氣相色譜－質(zhì)譜條件

HP－5MS彈性石英毛細(xì)管柱（30m×0.25mm×0.25μm）；載氣為高純 He（99.999%）；載氣流量1.0mL／min；汽化室溫度250℃；色譜柱初始溫度45℃（保留2min），以4℃／min升溫至220℃，保持2min；柱前壓7.62psi，不分流進(jìn)樣；溶劑延遲時間：1.5min。質(zhì)譜條件：電離方式為EI源，離子源溫度230℃，電子能量70eV，四極桿溫度150℃，接口溫度280℃，發(fā)射電流34.6μA；倍增器電壓1 125V，質(zhì)量掃描范圍20～450amu。

1.4 統(tǒng)計分析

所得總離子流圖中的各峰經(jīng)計算機(jī)用HP chemstation檢索及核對Nist 05標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫和Wiley275標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖，確認(rèn)揮發(fā)性化學(xué)成分，用峰面積歸一化法測定各化學(xué)成分的相對質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

2 結(jié)果與分析

通過檢測獲得禿葉黃檗新鮮果實(shí)揮發(fā)性成分的總離子流圖（圖示），結(jié)合定性分析軟件和定量分析軟件對圖進(jìn)行分析，確認(rèn)其中大部分化學(xué)成分和相對百分含量（表）。由表可知，從新鮮禿葉黃檗果實(shí)揮發(fā)性成分中分離并鑒定出45種化合物，占總揮發(fā)性成分的99.95%，主要揮發(fā)性成分為烯烴類，含量為97.5%，其中相對百分含量大于1.5%的成分有β－月桂烯、β－欖香烯、大根香葉烯D、β－欖香烯和β－水芹烯，其含量分別為66.9%、14.5%、6.8%、1.7%和1.6%。

圖示 禿葉黃檗果實(shí)揮發(fā)性成分的總離子流圖Fig. Total ion chromatogram of volatile oil from P.Chinese fruit

表 禿葉黃檗新鮮果實(shí)的揮發(fā)性成分Table Volatile constituents from fresh fruit of P.chinese

3 結(jié)論與討論

試驗采用頂空固相微萃?。℉S－SPME）技術(shù)首次對禿葉黃檗新鮮果實(shí)揮發(fā)性成分進(jìn)行萃取、富集，用氣相色譜－質(zhì)譜（GC－MS）法分析和鑒定其化學(xué)成分，從中分離鑒定出45個化學(xué)成分，其相對含量占揮發(fā)油總量的99.95%，烯烴類的揮發(fā)性成分含量高達(dá)97.5%，其中單萜類成分β－月桂烯和β－欖香烯含量較高，分別為66.7%和14.5%。說明，在禿葉黃檗新鮮果實(shí)中的主要揮發(fā)性成分以烯烴類的β－月桂烯和β－欖香烯為主，其他成分如醇類、醛酮類、酯類、有機(jī)酸含量較少。

侯冬巖［7］等曾采用GC－MS法分析同屬植物黃柏果實(shí)的揮發(fā)油，發(fā)現(xiàn)有23種成分，其主要成分為月 桂 烯 （36.3%）、β－香 茅 醇 （25.3%）、α－蒎 烯（14.1%）。通過對比禿葉黃檗果實(shí)與黃柏果實(shí)揮發(fā)油測定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩者所含主要揮發(fā)性成分有一定差異，但含量最多的成分均為月桂烯，且新鮮禿葉黃檗果實(shí)中β－月桂烯含量為黃柏果實(shí)的2倍。β－月桂烯常作為精油合成的中間體，廣泛應(yīng)用于化妝品、肥皂、洗滌劑生產(chǎn)中。此外，β－月桂烯有多種藥理活性，我國學(xué)者李云龍早期研究發(fā)現(xiàn)，β－月桂烯具有鎮(zhèn)咳祛痰作用［8］。同時，其具有抗腫瘤譜廣、毒副作用低的優(yōu)點(diǎn)，目前已開發(fā)為二類非細(xì)胞毒性的廣譜抗腫瘤新藥，在臨床上廣泛用于肺癌、消化道腫瘤及其他淺表性腫瘤的治療，具有良好的發(fā)展前景［9－10］。β－月桂烯藥理研究發(fā)現(xiàn)，該化合物具有抗氧化和抗?jié)兓钚?，能顯著減少胃和十二指腸病變以及增加胃黏液產(chǎn)生進(jìn)而保護(hù)胃粘膜［11］。但是，β－月桂烯除了有鎮(zhèn)咳、抗氧化、抗腫瘤、抗?jié)兓钚酝猓€具有致癌作用。國外研究者發(fā)現(xiàn)，口服大劑量β－月桂烯將誘發(fā)鼠的腎、鼻和肝臟非腫瘤性病變［12－13］。β－欖香烯在抗腫瘤活性方面有良好的表現(xiàn)，對肺癌A459細(xì)胞、乳腺癌MCF－7細(xì)胞和膀胱癌BIU－87細(xì)胞有顯著的抑制作用并且能誘導(dǎo)其凋亡［14－16］。因此，β－月桂烯和β－欖香烯無論是在醫(yī)藥和日化產(chǎn)品領(lǐng)域的開發(fā)都有一定的潛力。

試驗對禿葉黃檗新鮮果實(shí)中的揮發(fā)性成分進(jìn)行詳細(xì)分析發(fā)現(xiàn)，果實(shí)中富含β－月桂烯和β－欖香烯2種揮發(fā)性成分，兩者都具有抗腫瘤活性，并且已經(jīng)用于臨床的抗腫瘤治療。β－月桂烯還廣泛作為生產(chǎn)日化產(chǎn)品的工業(yè)原料。此外，禿葉黃檗果實(shí)的水解產(chǎn)物中富含三萜類化合物，其衍生物具有抗HIV－1蛋白酶作用。由此可知，對禿葉黃檗新鮮果實(shí)揮發(fā)性成分的研究，為其綜合利用以及拓寬黃檗的藥用提供了科學(xué)依據(jù)。

［1］ 中國植物志編委會.中國植物志：第42卷［M］.北京：科學(xué)出版社，2004.

［2］ 中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國藥典［S］.北京：人民衛(wèi)生出版社：2010.

［3］ 國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草：第10卷［M］.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999.

［4］ 蘇榮輝，金武祚，中島修平，等.黃皮樹果實(shí)中的酰胺類化合物［J］.植物學(xué)報，1991，36（10）：817－20.

［5］ 晏 晨，汪 冶，郝小江.禿葉黃皮樹果實(shí)中的水溶性化學(xué)成分研究［J］.中國中藥雜志，2009，34（11）：2895－7.

［6］ 晏 晨，汪 冶，郝小江.禿葉黃皮樹果實(shí)中的三萜化學(xué)成分［J］.中國天然藥物，2009，7（1）：31－3.

［7］ 侯冬巖，回瑞華，李鐵純.黃柏果中揮發(fā)性成分的研究［J］.質(zhì)譜學(xué)報，2001，22（3）：61－5.

［8］ 李龍云，葉金梅.黃柏果揮發(fā)油及其有效單體香葉烯祛痰作用的研究［J］.藥學(xué)通報，1982，17（5）：48－9.

［9］ 李廣朝.β－欖香烯的基礎(chǔ)研究與臨床應(yīng)用［J］.長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2009，25（2）：185－6.

［10］ 吳稚冰，馬勝林.β－欖香烯抗腫瘤作用的研究進(jìn)展［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2011，29（10）：2255－7.

［11］ Cesta M F，Hard G C，Boyce J T，et al.Complex Histopathologic Response in Rat Kidney to Oralβ－myrcene：An Unusual Dose－related Nephrosis and Low－dose Alpha2u－Globulin Nephropathy［J］.Toxicol Pathol，2013，41（8）：1068－77.

［12］ Bonamin F，Moraes T M，Dos Santos R C，et al.The effect of a minor constituent of essential oil from Citrus aurantium：the role ofβ－myrcene in preventing peptic ulcer disease［J］.Chem Biol Interact，2014，5（212）：11－9.

［13］ National Toxicology Program.NTP technical report on the toxicology and carcinogenesis studies of betamyrcene（CAS No.123－35－3）in F344／N rats and B6C3F1mice （Gavage studies）［J］.Lung Cancer.2010，557：1－163.

［14］ Li J，JunYu，Liu A，et al.β－Elemene against human lung cancer via up－regulation of P53protein expression to promote the release of exosome［J］.Lung Cancer，2014，86（2）：144－50.

［15］ 劉 悅，曹 陽，隋 欣，等.欖香烯聯(lián)合熱療誘導(dǎo)膀胱癌BIU－87細(xì)胞凋亡及對p－Akt表達(dá)的影響［J］.臨床軍醫(yī)雜志，2014，42（1）：31－5.

［16］ 鄭 瑾，劉 毅，任秦有，等.欖香烯聯(lián)合順鉑對乳腺癌MCF－7細(xì)胞增殖和凋亡的影響［J］.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2014，22（5）：1005－10.