王躍華，徐恩琴，郭翠平，梅 英，劉 濤，王曉蓉

(1.成都大學(xué) 生物工程學(xué)院，四川 成都 610016;2.成都恩威集團(tuán)(投資)有限公司，四川 成都 610041)

0 引 言

我國(guó)已有悠久煎煮中草藥的歷史，湯藥制劑有利于人體對(duì)有效成分的吸收，其在臨床和制品開發(fā)上發(fā)揮著重要作用.目前，湯藥制劑的發(fā)展方向之一是以單味中藥干浸膏顆粒取代藥材飲片配方，而水煎煮法正是提取藥材浸膏和實(shí)現(xiàn)藥材浸膏工業(yè)化生產(chǎn)的主要方法.本研究的實(shí)驗(yàn)材料是利用生物技術(shù)快速生產(chǎn)的具有清熱潤(rùn)肺、化痰止咳和散結(jié)消癰功效的卷葉貝母組培物［1］.而在卷葉貝母組培物的提取過(guò)程中未見有用水煎煮法來(lái)提取其有效成分的的報(bào)道，對(duì)此，本實(shí)驗(yàn)考查了提取材料大小、浸泡時(shí)間和煎煮時(shí)間等因素對(duì)提取卷葉貝母組培物總生物堿含量的影響.

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 樣 品.

實(shí)驗(yàn)所用樣品包括:卷葉貝母組培物由成都大學(xué)生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室利用組織培養(yǎng)技術(shù)快速生產(chǎn);貝母素乙購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所(批號(hào)，110751－200608).

1.1.2 藥品與試劑.

實(shí)驗(yàn)所用的三氯甲烷、鄰苯二甲酸氫甲、溴甲酚綠、氫氧化鈉和磷酸二氫鉀等藥品均為分析純，購(gòu)自成都市科龍化工試劑廠.

1.1.3 儀 器.

實(shí)驗(yàn)所用儀器包括:UV-210A 型紫外分光光度計(jì)(日本島津公司)，DHG-9141 型電熱恒溫干燥箱(上海滬粵明科學(xué)儀器有限公司)，BS-6KH 型電子天平(上海友聲衡器有限公司)，電子萬(wàn)用爐、粉碎機(jī)和藥典篩等.

1.2 方 法

1.2.1 提取實(shí)驗(yàn)方法.

將已干燥的卷葉貝母組培物粉碎成不同大小后，分別各稱取5 g 于燒杯中加水煎煮，開始用大火(武火)煎煮，沸騰后改用小火(文火)煎煮［2－3］.本實(shí)驗(yàn)煎煮次數(shù)由“頭煎”和“二煎”兩次組成，每次煎煮完畢都需趁熱分離出濾液，兩次濾液混合后獲得提取液;提取液經(jīng)萃取后采用紫外分光光度法測(cè)定其總生物堿含量.

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線確定.

精密稱取貝母素乙2.6 mg 于100 mL 容量瓶中，氯仿溶解并加至刻度，制得濃度為26 μg·mL－1的溶液.精密吸取該溶液1、2、4、6、8 mL，分別置于60 mL 分液漏斗中，加氯仿8 mL，pH 值為5 的緩沖溶液(0.2 mol·L－1鄰苯二甲酸氫甲溶液25 mL.0.2 mol·L－1氫氧化鈉溶液11.8 mL 混勻制得)5 mL.溴麝香草酚蘭溶液(溴麝香草酚蘭0.3 g 溶于1 mol·L－1NaOH 5 mL 中，加水稀釋至1 000 mL 制得)2 mL，劇烈振搖，靜置5 min;氯仿層經(jīng)干燥濾紙過(guò)濾，以氯仿為空白，在412 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，并以吸光度為橫坐標(biāo)，濃度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)線［4］，其方程為，A=0.0443C+0.0084，n=5，r=0.9994.

2 結(jié)果與討論

2.1 材料大小對(duì)總生物堿含量的影響

分別稱取粉碎為不同大小的卷葉貝母組培物A1、A2、A3、A4 和A5 各5 g 于燒杯中，“頭煎”加水300 mL 水浸泡50 min 后，放在電爐上先用武火煮沸3 min 后，再用文火慢熬40 min，煎煮完畢后，放置于轉(zhuǎn)速為8 000 r/min 的離心機(jī)中趁熱離心10 min，通過(guò)離心增加其有效成分的含量并分離出濾液［5］.“二煎”不經(jīng)浸泡，直接加水300 mL 進(jìn)行煎煮.將兩次煎煮濾液混合后獲得提取，然后將所得提取液濃縮為25 mL 后，用三氯甲烷萃取后再用紫外分光光度計(jì)在412 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度，并計(jì)算出總生物堿含量，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次，結(jié)果如表1 所示.

表1 煎煮材料大小對(duì)總生物堿含量的影響

由表1 可見，采用不同大小的卷葉貝母組培物材料進(jìn)行煎煮提取，最后測(cè)得的總生物堿含量都有所不同.選擇A3 即煎煮材料為245 μm 大小時(shí)提取的組培物中總生物堿含量為最高0.1433%，而以A5 即煎煮材料為833 μm 大小時(shí)提取的組培物中總生物堿含量為最低僅為0.1101%，這是由于提取材料的體積越大，其比表面積就越小，即與溶媒的接觸面積也就相對(duì)變小，從而使得細(xì)胞中的生物堿析出量也就減少.但是，提取材料也并非是的體積越小越好，如A1 即煎煮材料為165 μm 大小時(shí)提取的組培物材料中的總生物堿含量也較低為0.1267%，這主要是由于卷葉貝母組培物細(xì)胞中含有較多的淀粉粒，當(dāng)采用體積過(guò)小的組培材料進(jìn)行煎煮時(shí)，大量糊化的淀粉粒會(huì)嚴(yán)重影響到后續(xù)生物堿的分離純化［6］，最終導(dǎo)致提取的總生物堿含量下降.

2.2 浸泡時(shí)間對(duì)總生物堿含量的影響

中藥材通常都是經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單干燥加工的，多數(shù)藥材在使用時(shí)，若不事先采用水浸泡而直接采用高溫煎煮，常會(huì)造成藥材表面蛋白質(zhì)的固化和細(xì)胞中淀粉的糊化，從而阻塞藥材的毛細(xì)管孔隙，進(jìn)而影響藥物中有效成分的煎出［7］.本實(shí)驗(yàn)分別采取將卷葉貝母組培物的提取材料用水浸泡30、40、50、60 和70 min，其編號(hào)設(shè)定為B1、B2、B3、B4 和B5，結(jié)果如表2所示.

表2 浸泡時(shí)間對(duì)總生物堿含量的影響

由表2 可知，采用不同的浸泡時(shí)間，其最終測(cè)得的總生物堿含量也是不一樣的.實(shí)驗(yàn)中，浸泡了50 min 的B3 卷葉貝母組培物材料，其煎煮出的的總生物堿含量最高為0.1469%，而B1 和B2 分別為浸泡了30 min 和40 min，其煎煮出來(lái)的總生物堿都比B3低.這是由于采用較短時(shí)間浸泡的煎煮材料，因藥材細(xì)胞并未完全吸水膨脹，從而使得細(xì)胞中的有效成分不能充分溶解并滲出細(xì)胞外，結(jié)果煎煮后的得率及其有效成分提取量均較低［8］.但是，浸泡時(shí)間過(guò)久，會(huì)使得藥材細(xì)胞中大量的非提取成分也浸提出來(lái)，影響煎煮材料中生物堿分離純化，最終導(dǎo)致提取的總生物堿含量下降，例如B4、B5.

2.3 煎煮時(shí)間對(duì)總生物堿含量的影響

本實(shí)驗(yàn)用武火煮沸3 min 后，再分別采用文火煎煮20、30、40、50 和60 min，其編號(hào)設(shè)定為C1、C2、C3、C4 和C5，結(jié)果如表3 所示.

表3 不同煎煮時(shí)間對(duì)總生物堿含量的影響

由表3 可知，隨著煎煮時(shí)間由20 min 到60 min的逐漸增加，其提取的生物堿含量也呈現(xiàn)出先增加后降低的趨勢(shì).在煎煮時(shí)間從20 min 增加到40 min的時(shí)間段內(nèi)，其生物堿含量呈現(xiàn)出逐漸增高的趨勢(shì)，即以煎煮40 min 的C3 溶出的生物堿量最多，為0.1469%;但當(dāng)煎煮時(shí)間進(jìn)一步增長(zhǎng)到C4 的50 min和C5 的60 min 時(shí)，其測(cè)得溶出的生物堿含量并沒(méi)有進(jìn)一步的增高，而卻呈現(xiàn)出了下降的趨勢(shì).這主要是因?yàn)樵谥兴幍募逯筮^(guò)程中，如煎煮時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，則會(huì)破壞或散失掉藥物中的某些成分［9］.另外，卷葉貝母組培物材料中含有較多的淀粉粒，煎煮時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)使得淀粉粒嚴(yán)重糊化，從而影響其生物堿的分離提取，但是如果藥材煎煮時(shí)間過(guò)短，藥材中的多數(shù)成分又不易完全溶出［10］.因此，選擇適宜的煎煮時(shí)間對(duì)提取藥材中的有效成分有重要意義.

3 討 論

中醫(yī)的湯劑已有數(shù)千年的歷史.由于湯劑能很好地滿足中醫(yī)辨證施治、隨證加減的需要，又具有吸收快、療效高的優(yōu)越性，故備受歷代醫(yī)家的推崇［11］.但患者普遍缺乏湯劑煎煮的基礎(chǔ)知識(shí)，常因湯劑煎煮不當(dāng)而影響了藥物的療效［12］.本實(shí)驗(yàn)著重研究了煎煮藥物材料的大小、浸泡時(shí)間和煎煮時(shí)間長(zhǎng)短對(duì)藥物有效成分的溶出率的影響，以探尋一條合理規(guī)范的中藥煎煮方法.此不僅對(duì)節(jié)約原料、提高臨床療效有非常重要的意義，而且還對(duì)實(shí)現(xiàn)中醫(yī)現(xiàn)代化、標(biāo)準(zhǔn)化也有巨大的推動(dòng)作用.

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