吳偉兵

遺傳性耳聾產(chǎn)前診斷及篩選過程分析

吳偉兵

目的 研究基因芯片技術(shù)對于遺傳性耳聾基因的檢測，確定我國孕婦遺傳性耳聾基因突變的常見位點，評價其對于遺傳性耳聾產(chǎn)前診斷的實際效果。方法 選取余江縣人民醫(yī)院愿意接受耳聾基因檢測的孕婦1824例，采取孕婦的外周血液進行DNA提取，然后采用基因芯片技術(shù)檢測遺傳性耳聾相關(guān)基因的表達情況。結(jié)果 1824例孕婦中共有78例孕婦檢測出至少攜帶有1種可以引起疾患的致病突變，通過對比芯片結(jié)果以及驗證聚合酶鏈反應(yīng)測序結(jié)果，發(fā)現(xiàn)78例攜帶者孕婦2次檢測結(jié)果吻合，吻合率為100%，具有致病突變基因的孕婦的概率為4.28%。結(jié)論 基因芯片技術(shù)進行產(chǎn)前篩查工作，整個操作易于進行，可信度高，可以結(jié)合其他技術(shù)用于預(yù)防孕婦生產(chǎn)先天性耳聾患兒，提高生育質(zhì)量。

遺傳性耳聾；產(chǎn)前診斷；篩選；過程分析

先天性耳聾作為一種重要的先天性缺陷疾患，其嚴重違背了優(yōu)生優(yōu)育的國策，降低了人口的素質(zhì)，影響了患者以及整個家庭的幸福指數(shù)，而這其中有60%～70%的患者為遺傳性耳聾。廣泛開展新生兒聽力篩查可以有效提早發(fā)現(xiàn)聽力障礙兒童，達到早發(fā)現(xiàn)、早治療、降低致殘率的目的，可是這種方法無法保證預(yù)防效果，也無法從根本上杜絕該類患者的出現(xiàn)[1-2]。為了從根本上降低該類患兒的出現(xiàn)，這就需要研究如何可以有效診斷孕婦生出該類不健康患兒的概率，通過檢測遺傳性耳聾相關(guān)的基因，依據(jù)熱點篩查結(jié)果來制定應(yīng)對方法。本研究對本院遺傳性耳聾進行產(chǎn)前診斷以及篩選過程的分析，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 余江縣人民醫(yī)院2011年3月～2014年2月愿意接受耳聾基因檢測的孕婦1824例，孕婦年齡23～36周歲，平均年齡為（27.8±1.9）歲，所有孕婦均不包括耳聾孕婦以及耳聾家族史的孕婦。

1.2 方法 使用TAKARA公司生產(chǎn)的PCR試劑盒和Bio-Rad PCR儀器進行聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）測序。

1.2.1 提取DNA，進行PCR PCR反應(yīng)擴增結(jié)束以后將產(chǎn)物進行95℃變性，5min以后立即進行3min冰浴，然后將產(chǎn)物（一般加入2.5μL）加入到雜交緩沖液中，混合液一并加入到芯片微陣列中去，封好雜交盒進行1h的50℃水浴，然后進行雜交反應(yīng)，雜交反應(yīng)完成以后，進行拆開，進行芯片洗滌與干燥，洗好以后置入晶芯LuxScan，進行芯片的掃描工作，采集信號以后，陽性結(jié)果得以驗證以后需要向夫婦雙方進行詳細說明，向攜帶者夫婦講解存在的風險以及可以應(yīng)對的方法，必要時對女性配偶相關(guān)基因進行全外顯子PCR擴增，以便進一步獲得資料保證生育不出現(xiàn)意外。

1.2.2 產(chǎn)前診斷 孕婦懷孕17周時進行穿刺，抽取羊水，30mL分為2管，分別進行基因檢測以及細胞培養(yǎng)，培養(yǎng)好的細胞再次進行全外顯子序列測序，比較2次檢測結(jié)果，保證檢測有效性。

2 結(jié)果

共有78例孕婦檢測出至少攜帶有1種可以引起疾患的致病突變，通過對比芯片結(jié)果以及驗證PCR測序結(jié)果，發(fā)現(xiàn)78例攜帶者孕婦2次檢測結(jié)果吻合，吻合率為100%，具有致病突變基因的孕婦的概率為4.28%。在這78例攜帶者孕婦有17例出現(xiàn)919-2A＞G位點突變、8例出現(xiàn)2168A＞G位點突變、1例出現(xiàn)35delG位點突變、3例出現(xiàn)235delC位點突變、36例出現(xiàn)176dell6位點突變、6例出現(xiàn)299-300delAT位點突變、4例出現(xiàn)538C＞T位點突變、1例出現(xiàn)1494C＞T位點突變、2例出現(xiàn)1555A＞G位點突變。見表1。

表1 使用基因芯片技術(shù)檢測孕婦遺傳性耳聾基因攜帶情況

3 討論

耳聾嚴重影響了患者的生活，給患者帶來了很多的不便，易于受到一些人的歧視。先天性耳聾在我國的發(fā)生率位于1‰～3‰，廣泛開展新生兒聽力篩查可以有效提早發(fā)現(xiàn)聽力障礙兒童，達到早發(fā)現(xiàn)、早治療，減少致殘率的目的。

使用基于檢測技術(shù)，整個檢測過程都要嚴格按照操作進行，提取DNA時，使用抗凝劑收集孕婦外周血2mL，按照DNA操作進行DNA提取，注意規(guī)范操作防止出現(xiàn)DNA污染（操作是注意戴手套以及口罩，盡可能減少講話），提取以后使用分光光度計進行DNA純度以及含量檢測[3-4]。PCR依據(jù)TAKARA公司PCR試劑盒說明書進行體系配制，使用9組引物分別配制體系檢測常見的9個突變位點，然后依據(jù)PCR試劑盒建議程序進行PCR反應(yīng)。雜交反應(yīng)完成以后，進行拆開，進行芯片洗滌與干燥[5-6]。洗好以后置入晶芯LuxScan，進行芯片的掃描工作，采集信號以后，讀取數(shù)據(jù)進行結(jié)果分析。對于陽性樣本需要進行全外顯子PCR擴增檢測以驗證檢測結(jié)果。陽性結(jié)果得以驗證以后需要向夫婦雙方進行詳細說明，向攜帶者夫婦講解存在的風險以及可以應(yīng)對的方法，必要時對女性配偶相關(guān)基因進行全外顯子PCR擴增，以便進一步獲得資料保證生育不出現(xiàn)意外[7-8]。

本研究結(jié)果顯示，基因芯片技術(shù)進行產(chǎn)前篩查工作，整個操作易于進行，可信度高，可以結(jié)合其他技術(shù)用于預(yù)防孕婦生產(chǎn)先天性耳聾患兒，提高生育質(zhì)量。

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Objective To study the gene chip technology for the detection of hereditary deafness genes, identify common sites of genetic deafness mutations in pregnant women, and to evaluate the prenatal diagnosis of genetic deafness practical effect. Methods 1824 cases of pregnant women were selected which were willing to accept deafness genes detected maternal peripheral blood taken for DNA extraction and gene expression using microarray technology to detect hereditary deafness genes. Results A total of 1824 cases of pregnant women were detected 78 cases of pregnant women carried at least one kind of disease-causing mutations can cause disease, and to verify the results by comparing chip PCR sequencing and found 78 cases of pregnant women carriers of the second test results anastomosis rate was 100%, with a probability of disease-causing mutations in genes of pregnant women was 4.28%. Conclusion The gene chip technology for prenatal screening, it is easy to carry out the entire operation, high reliability, it can be combined with other techniques used to prevent pregnant women produce children with congenital deafness, improve reproductive quality.

Hereditary deafness; Prenatal diagnosis; Screening; Process analysis

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.4.108

江西 335200 余江縣人民醫(yī)院耳鼻喉科（吳偉兵）