邢晶晶

哈藥集團(tuán)生物工程有限公司

苦參素注射液有關(guān)物質(zhì)檢查方法建立

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目的：通過(guò)對(duì)有關(guān)物質(zhì)檢查方法比較，建立本品有關(guān)物質(zhì)檢查方法。方法：采用高效液相色譜，色譜柱選用氨基色譜柱,以0.1mol/L磷酸二氫鈉-甲醇-乙腈-高氯酸鈉(900∶30∶40∶30)為流動(dòng)相,流速1.0ml/min,220nm為本品的檢測(cè)波長(zhǎng)，氧化槐果堿與苦參素分離度符合規(guī)定，氧化槐果堿線(xiàn)性為3.0～18.0ug/ml,專(zhuān)屬性試驗(yàn)表明供試品與降解產(chǎn)物可有效分離，峰純度符合規(guī)定，物料平衡，苦參素檢測(cè)限為3.1ng，氧化槐果堿檢測(cè)限為1.9ng，溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明供試品溶液在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)論：所建立含量測(cè)定方法可行，可用于測(cè)定本品有關(guān)物質(zhì)。

苦參素；有關(guān)物質(zhì)；氧化苦參堿

苦參素膠囊主要成分為氧化苦參堿，是從中藥苦豆子中提取的一種生物堿，具有直接抗乙型肝炎病毒作用，對(duì)肝細(xì)胞異常凋亡有抑制作用，治療慢性肝炎取得了良好療效。其原料藥苦參素為氧化苦參堿和極少量氧化槐果堿的混合物。目前檢查苦參素有關(guān)物質(zhì)方法較多，本文通過(guò)對(duì)相關(guān)檢查方法進(jìn)行比較[1-2]，篩選出適合本品有關(guān)物質(zhì)檢查方法。

1.試驗(yàn)材料

苦參素原料、氧化槐果堿對(duì)照品（批號(hào)：111652-200301，來(lái)源：中國(guó)藥品生物制品檢定研究院）、苦參素注射液為自制樣品，色譜柱為，迪馬Diamonsil柱(4.6*250mm，5um)；檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm；，Agilent 1260型高效液相色譜儀（DAD檢測(cè)器）。

2.方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

參照上述相關(guān)文獻(xiàn)，檢查苦參素有關(guān)物質(zhì)的檢查的色譜條件主要有相為磷酸鹽緩沖液-甲醇(85：15)，乙腈：無(wú)水乙醇：磷酸水溶液（pH值2.0）（80：8：12），甲醇：0.2%庚烷磺酸鈉及0.1%冰醋酸水溶液：四氫呋喃（30：70：0.6），0.1mol/L磷酸二氫鈉-乙腈-甲醇-高氯酸鈉(910∶50∶10∶30)為流動(dòng)相，通過(guò)對(duì)上述流動(dòng)上篩選，確定本品的色譜條件為色譜柱選用氨基色譜柱,以0.1mol/L磷酸二氫鈉-甲醇-乙腈-高氯酸鈉(900∶30∶40∶30)為流動(dòng)相,流速1.0ml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm。

2.2 雜質(zhì)分離情況考察

取苦參素粗品，加流動(dòng)性制成含苦參素粗品1.0mg/ml的溶液，按照上述色譜條件進(jìn)樣，結(jié)果各雜質(zhì)峰與主峰有效分離，主峰峰純度符合規(guī)定，苦參素粗品單一雜質(zhì)小于0.5%，另取苦參素注射液處方中輔料、氧化槐果堿雜質(zhì)對(duì)照，按照所確定色譜條件進(jìn)樣，結(jié)果輔料不干擾有關(guān)物質(zhì)測(cè)定，氧化槐果堿與主峰有效分離，對(duì)主峰峰純度進(jìn)行監(jiān)測(cè)，結(jié)果峰純度符合規(guī)定。

2.3 樣品溶液制備

精密量取取苦參素供試品，用流動(dòng)相制成濃度為1.0mg/ml的溶液，作為供試品溶液。精密量取供試品溶液1.0ml于100ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液。

2.4 相對(duì)相應(yīng)因子測(cè)定

苦參素中主要雜質(zhì)為氧化槐果堿，該雜質(zhì)為生產(chǎn)過(guò)程中帶入雜質(zhì)，也為制劑主要降解產(chǎn)物。為有效并方便控制該雜質(zhì)量，對(duì)該雜質(zhì)與苦參素相對(duì)響應(yīng)因子進(jìn)行研究。取苦參素對(duì)照品及氧化槐果堿各適量，制成系列濃度溶液，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)斜率之比，計(jì)算二者相對(duì)響應(yīng)因子，氧化槐果堿與苦參素的相對(duì)相應(yīng)因子0.92，可按照相對(duì)對(duì)照品色譜峰計(jì)算該雜質(zhì)含量。

2.5 方法驗(yàn)證

通過(guò)二極管陣列檢測(cè)器監(jiān)測(cè)有關(guān)物質(zhì)檢出情況，結(jié)果220nm為最佳檢測(cè)波長(zhǎng)。

檢測(cè)限：取苦參素對(duì)照品，制成系列濃度溶液，進(jìn)樣，當(dāng)信噪比為4.5：1時(shí)，苦參素檢測(cè)限為3.1ng，說(shuō)明供試品溶液濃度可行，可有效檢出相關(guān)雜質(zhì)。另取氧化槐果堿對(duì)照品，測(cè)定氧化槐果堿的檢測(cè)限為1.9ng。另取苦參素及氧化槐果堿對(duì)照品，制成線(xiàn)性溶液濃度，進(jìn)樣，結(jié)果苦參素溶液在5ug～1.5mg/ml濃度范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，氧化槐果堿溶液在3.0～18.0ug/ml的濃度范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)：取供苦參素試品溶液及對(duì)照溶液，分別于0、1、2、4、6、8小時(shí)進(jìn)樣，評(píng)價(jià)供試品溶液及對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性，供試品溶液在8小時(shí)無(wú)新雜質(zhì)峰產(chǎn)生，各雜質(zhì)峰無(wú)明顯變化，對(duì)照品溶液峰面積無(wú)變化，說(shuō)明溶液在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

耐用性試驗(yàn)：改變本品檢測(cè)波長(zhǎng)（±5nm）、更換相同品牌不同批號(hào)的色譜柱、改變流速（0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min）及流動(dòng)相比例（±5%），考察雜質(zhì)檢出情況，結(jié)果在各色譜條件下有微小變化時(shí)，雜質(zhì)檢出基本一致，說(shuō)明方法的耐用性好。

專(zhuān)屬性：取苦參素注射液樣品，對(duì)樣品進(jìn)行酸、堿、氧化、高溫及強(qiáng)光破壞試驗(yàn)，使用DAD檢測(cè)器，全波長(zhǎng)監(jiān)測(cè)，考察各種破壞條件下雜質(zhì)檢出情況。結(jié)果220nm為本品最佳檢測(cè)波長(zhǎng)，確定供試品檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，供試品在各條件下降解產(chǎn)物約為10%，雜質(zhì)與主峰可有效分離，峰純度符合規(guī)定，各破壞條件下物料平衡（95%～105%）。在主峰3倍保留時(shí)間之后未見(jiàn)雜質(zhì)峰，確定本品相對(duì)保留時(shí)間為主峰的3倍。

2.6.樣品檢查

取苦參素注射液供試品，按照確定方法進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查，供試品雜質(zhì)檢出基本一致，單一雜質(zhì)約為0.3%，總雜質(zhì)約為0.9%，雜質(zhì)與主峰分離度良好。

3.結(jié)論

通過(guò)方法篩選，方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果表明所建立的苦參素注射液有關(guān)物質(zhì)檢查方法可行，可用于本品有關(guān)物質(zhì)檢查。

[1]張霞張文華倪海芳.苦參素膠囊中有關(guān)物質(zhì)氧化槐果堿檢查方法比較.寧夏醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2004年6月第3卷第26期：185-186.

[2]楊風(fēng)珍,呂毅,姜秋彥.高效液相色譜法測(cè)定苦參素注射液含量[J].西北藥學(xué)雜志,1997,(06)：245.

邢晶晶（1982-），女，黑龍江哈爾濱市，本科，哈藥集團(tuán)生物工程有限公司，化驗(yàn)員，工程師。