伊麗娜 哈斯祈魯

(1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010050 2.甘肅省肅北縣蒙醫(yī)院，甘肅 肅北 736000)

5 味鐵屑湯又稱為扎格切-5 味湯［1］。此方鐵屑為主的五味藥組成，所以稱之為5 味鐵屑湯。該方劑記載于《后序醫(yī)典》［2］，后傳用蒙古地區(qū)，在《觀者之喜》中清楚記載了成分劑量。苦、澀、辛味為主的制鐵屑150g、黃柏100g、訶子150g、川楝子50g、梔子150g 配合組成，具有清熱、明目等功效。主治目紅腫、多眵、結(jié)膜炎、翳障、肝熱引起的眼病等血希拉性眼疾、頭痛等病，本方性涼，為血希拉性眼病之主方。方中鐵屑性涼以清肝熱、明目，為主;黃柏味苦性涼以清熱，為輔;配以梔子以清血熱，川楝子以止痛，訶子以調(diào)理體素、解毒。各藥合用，對(duì)肝熱引起的眼疼、血希拉性眼病均有良效［3］。

5 味鐵屑湯治療眼睛疾病的精選配方［4］。鐵屑為蒙醫(yī)常用藥物之一，須將其銼削成屑末或取煅打鐵時(shí)錘落的屑片，生鐵屑不溶于水，經(jīng)訶子湯制后則生成易溶于水的Fe2+鹽，便于人體吸收［5］。黃柏為蕓香科植物黃皮樹Phellodendron chinense Schneid.或黃檗P.amurense Rupr.的干燥樹皮。訶子為使君子科植物訶子Terminalia chebula Retz.或毛訶子Terminalia chebula Retz.Var.tomentella Kurt.的干燥成熟果實(shí)［5］。川楝子為楝科落葉禾木植物川楝Melia toosendan Sieb.et Zucc.的成熟果實(shí)［7］。梔子為茜草科植物梔子Gardenia jasminoiaes Ellis.的干燥成熟果實(shí)［6］。

1 材料

1.1 藥材：鐵屑、黃柏、訶子、川楝子、梔子等由內(nèi)蒙古醫(yī)藥公司提供，經(jīng)內(nèi)蒙古藥品檢驗(yàn)所蒙藥科鑒定，結(jié)果均為合格。

1.2 藥物及試劑：硫酸亞鐵胺(A.R)，0.1%的鄰二氮匪水溶液(臨用新制)，1%的鹽酸羥胺水溶液(臨用新制)，pH=4 的醋酸—醋酸鈉緩沖液，異丙醇(分析純)，鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào)：110713 -200208)，羧甲基纖維素鈉(分析純)，阿斯匹林，無(wú)水乙醇，冰醋酸，95%乙醇，鹽酸，硫酸，伊文思藍(lán)。

1.3 動(dòng)物：昆明種小白鼠，體重18 ～22g，由內(nèi)蒙古大學(xué)動(dòng)物室提供。Wistar 種大鼠，體重180 ～200g，由內(nèi)蒙古動(dòng)物室提供。

1.4 儀器：760CRT 雙波長(zhǎng)紫外可見分光光度計(jì)，ZDHW 型電熱套，DZTW 型電熱套，RE-52A 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，電子天平，恒溫水浴鍋，烘干箱，離心機(jī)，動(dòng)物體溫計(jì)，DZTW 型調(diào)溫電爐等。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

5 味鐵屑膠囊有效成分提取工藝路線設(shè)計(jì)。

2.1 炮制鐵屑：訶子湯煎煮法：①制訶子湯：是子科植物訶子成熟果實(shí)粉碎后加適量水煎煮，棄去藥渣的淡黃色透明液體叫訶子湯。訶子主要含鞣質(zhì)(果實(shí)中含21% ～37%)，鞣質(zhì)是一種復(fù)雜的多元酚類化合物，廣泛地存在于植物中，在醫(yī)療上常作為收斂劑。用于止血，止瀉，燒傷等，也用作生物堿及重金屬中毒的解毒劑。②傳統(tǒng)炮制方法的基礎(chǔ)上，每100g 鐵屑用訶子50g 煎取湯液300mL 煮制120min，制備后的成品呈稠糊狀，無(wú)須濾干，直接取出涼干即可，以免Fe2 +隨濾液遺失，影響成品質(zhì)量［7］。根據(jù)上述四味藥的有效成分及物理化學(xué)性質(zhì)，設(shè)計(jì)3 種提取工藝路線。

工藝1：根據(jù)藥材有效成分的醇溶性，黃柏、訶子、川楝子、梔子分別醇提物回收乙醇，濃縮后放置烘干箱中烘干。

工藝2：傳統(tǒng)5 味鐵屑湯的劑型是湯劑。湯劑只利用了藥材的水溶性部分，假如新劑型中增加藥材的醇溶性成分，藥物的利用率增加，所以，設(shè)計(jì)出了4 味藥，即黃柏、訶子、川楝子、梔子用乙醇提取后再用水提取更多的有效成分。把2 次的濃縮液合并后加制鐵屑，制鐵屑用于收膏，在烘干箱中烘干。

工藝3。工藝1 的基礎(chǔ)上，粉碎部分黃柏(占全配方的3/4)直接加入膠囊內(nèi)，這是為了充分保留黃柏的有效成分。

2.1.1 工藝1。傳統(tǒng)炮制方法的基礎(chǔ)上，每100g 鐵屑用訶子50g，煎取湯液300mL，煮制120min，涼干后粉碎成細(xì)粉備用。把4 味藥，即黃柏、訶子、川楝子、梔子按照配方稱量，根據(jù)醇溶性，加10 倍量85%的乙醇回流法提取2 次，每次2h，回收乙醇，在濃縮液中加80 目篩的制鐵屑細(xì)粉收膏，60℃干燥粉碎裝膠囊。實(shí)驗(yàn)步驟如圖1：

圖1

2.1.2 工藝2。鐵屑炮制過程同工藝一，把4 味藥先醇提后水提。即黃柏、訶子、川楝子、梔子按照配方稱量，根據(jù)醇溶性，加10 倍量85%的乙醇回流法提取2 次，每次2h，藥渣再用蒸餾水10 倍量提取2 次，每次1.5h。醇提溶液回收乙醇，水溶液濃縮到相對(duì)密度1.0 ～1.1 之間，加乙醇使含醇量達(dá)到45%醇沉放置24h，濾液濃縮，將醇提濃縮物與水提醇沉濃縮物合并，加80 目篩的制鐵屑細(xì)粉收膏，60℃干燥粉碎裝膠囊。實(shí)驗(yàn)步驟如圖2：

圖2

2.1.3 工藝3：鐵屑炮制過程同工藝1，其余4 味藥在工藝1 的基礎(chǔ)上，即訶子、川楝子、梔子按照配方稱量，黃柏按照配方量的3/4 稱量，10 倍量回流法85%乙醇提取2 次，每次2h。醇提溶液回收乙醇，濃縮成相對(duì)密度1.0 ～1.1 之間，加80 目篩配方量1/4 黃柏及制鐵屑細(xì)粉收膏，60℃干燥粉碎裝膠囊。實(shí)驗(yàn)步驟如圖3：

圖3

2.2 5 味鐵屑膠囊工藝的藥效學(xué)比較

2.2.1 5 味鐵屑膠囊工藝對(duì)干酵母所致大鼠發(fā)熱的解熱作用。酵母混懸液制備：稱取干酵母10g 置于乳缽中，逐漸加入蒸餾水磨為均勻的懸液，最后定溶為50mL(20%)，此液須于臨用前配制。

大鼠于實(shí)驗(yàn)室環(huán)境適應(yīng)3 ～4d，每日用體溫計(jì)從肛內(nèi)測(cè)體溫1 ～2 次，實(shí)驗(yàn)當(dāng)日每小時(shí)測(cè)體溫1 次，連續(xù)2 ～3次，選取體溫變化不超過0.3℃的動(dòng)物供實(shí)驗(yàn)用。

將合格大鼠隨機(jī)均分6 組，分別灌服5 味鐵屑膠囊3種工藝，連續(xù)給藥5d，最后1 次給藥后各鼠立即于背部皮下注入20%酵母懸液10mL/kg，然后于0.5，1，2，4，6，8，10及12h 各測(cè)大鼠體溫1 次，進(jìn)行組間t 檢驗(yàn)，結(jié)果如表1。

表1 5 味鐵屑膠囊3 種工藝對(duì)干酵母所致大鼠發(fā)熱的解熱作用

圖4 五味鐵屑對(duì)于酵母所致大鼠體溫變化的影響

5 味鐵屑膠囊工藝1、2、3 對(duì)干酵母所致大鼠的解熱作用實(shí)驗(yàn)表明，工藝1、2、3 組和阿斯匹林組及原湯劑組均有對(duì)大鼠解熱作用。與空白對(duì)照組比較，阿斯匹林組有明顯性差異(p＜0.001)。工藝1、2、3 組和原湯劑組有顯著性差異(P＜0.05)，其中工藝三組對(duì)大鼠解熱時(shí)間相對(duì)長(zhǎng)一些。

2.2.2 5 味鐵屑膠囊3 種工藝對(duì)醋酸(HAc)所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性亢進(jìn)的影響

0.6%醋酸生理鹽水溶液的配制：準(zhǔn)確吸取純冰醋酸0.3mL，溶于生理鹽水50mL 中。2.1%伊文思藍(lán)生理鹽水溶液的配制：精確稱取伊文思藍(lán)1g，溶解于生理鹽水中成100mL。

3 實(shí)驗(yàn)

小鼠60 只均分6 組，分別灌服3 種工藝，給藥7d，最后1 次給藥1h 后各鼠均靜脈注射1%伊文思藍(lán)生理鹽水溶液0.1mL/10kg 體重，隨即腹腔注射0.6% 醋酸0.2mL/只，30min 后脫頸椎處死，剪開腹部皮膚肌肉，用6mL 生理鹽水?dāng)?shù)次洗滌腹腔，吸管吸出洗滌液5mL，3000r/min 離心15min，取上清夜于590nm 波長(zhǎng)處比色測(cè)定吸光度，進(jìn)行組間t 檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2、圖5。

表2 5 味鐵屑膠囊3 種工藝對(duì)醋酸(HAc)所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性亢進(jìn)的影響

圖5 五味鐵屑膠囊對(duì)醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性亢進(jìn)的影響

工藝1、2、3 組和阿斯匹林組及原湯劑組均有對(duì)醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性明顯抑制作用。與空白對(duì)照組比較，阿斯匹林組、工藝3 組和工藝2 組有明顯性差異(p＜0.001)。工藝1 組和原湯劑組有顯著性差異(p＜0.05)。根據(jù)平均吸光度所知，工藝3 對(duì)醋酸(HAc)所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性抑制作用比工藝2 明顯。

4 5 味鐵屑膠囊工藝3 提取條件的優(yōu)選

4.1 5 味鐵屑膠囊工藝3 的正交設(shè)計(jì)L9(34)及測(cè)定結(jié)果。鐵屑炮制：每100g 鐵屑用金色訶子50g，煎取湯300mL，煮制120min。處方量14 黃柏皮粉碎成細(xì)粉過80 目篩，備用。

4.2 5 味鐵屑膠囊醇提部分由黃柏(3/4)、訶子、川楝子、梔子組成，其醇提溶液的出膏量受乙醇加入量、乙醇濃度、提取時(shí)間、提取次數(shù)的影響，所以正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，從3 個(gè)水平，4 個(gè)因素進(jìn)行分析，共得出9 個(gè)樣品。以鹽酸小檗堿為測(cè)定指標(biāo)進(jìn)行分析，得出樣品中得小檗堿含量。

表3 正交試驗(yàn)因素水平

4.3 提取方法。訶子6g、川楝子2g、梔子6g、黃柏3g，共計(jì)17g，按正交設(shè)計(jì)表的方案提取，將提取溶液過濾后把濾液倒入蒸發(fā)皿，在恒溫水浴鍋上蒸干。完全干燥后稱重量，然后加入制鐵屑6g 黃柏1g 均勻攪拌。

4.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精密稱取60℃干燥至恒重的鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加適量的無(wú)水乙醇在60℃水浴鍋上加熱溶解，并稀釋成100ug/mL 的溶液，精密量取上述溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0mL 分別置25mL 容量瓶中，加0.05mol/L 硫酸溶液稀釋至刻度，搖均。以0.05mol/L 硫酸溶液作參比液在375nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，將測(cè)得數(shù)據(jù)進(jìn)行直線回歸，得回歸方程：結(jié)果表明溶液濃度在4 ～28ug/mL范圍內(nèi)，吸收度與濃度呈良好得線性關(guān)系。

圖6 鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)曲線

4.5 樣品含量測(cè)定。精密稱取各樣品0.5g，置100mL 容量瓶中，加適量無(wú)水乙醇，60℃恒溫水浴鍋上加熱溶解10min，無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖均。再精密吸取0.5mL 置于25mL量瓶中，加0.05mol/L 硫酸溶液稀釋至刻度，搖均。以0.05mol/L 硫酸溶液作參比液在375nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，參照鹽酸堿標(biāo)準(zhǔn)曲線算出小檗堿含量值。每個(gè)樣品測(cè)3 次取均值，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，總工藝路線為：①每100g 鐵屑用金色訶子50g，煎取湯300mL，煮制120min;②處方量34 黃柏皮和處方量訶子、川楝子、梔子加12 倍量75%的乙醇提取2 次，每次2h;③處方量1/4 黃柏皮粉碎成細(xì)粉直接加入膠囊。

5 中試

按上述條件生產(chǎn)5 味鐵屑膠囊3 批號(hào)(20070309、20070311、20070313)，休止角平均為35.5℃，崩解時(shí)限為11.9min，裝量差異為0.5 ±10%g。各項(xiàng)指標(biāo)達(dá)到了《中華人民共和國(guó)典》(2005年版)膠囊劑通則項(xiàng)下的各有關(guān)要求。

6 討論

5 味鐵屑湯歷史悠久，且蒙醫(yī)治療“血、希拉”熱引起眼病的首選方之一，臨床上多用于治療眼腫痛、血熱赤眼、昏朦、眼翳等。在劑型的選擇中，因從方中5 味的性味以及理化性質(zhì)考慮，選擇了硬膠囊劑。在選擇制備工藝路線上，主要以抗炎和清熱解毒兩項(xiàng)指標(biāo)，做簡(jiǎn)單藥效學(xué)比較，得出5味鐵屑膠囊工藝一、二都沒有顯著性差異，但是工藝一有許多不足之處，首先侵膏量多、一次服用量過多，有效成分較完全提取了，但是也隨之增加了蛋白質(zhì)、淀粉、黏液質(zhì)、糖類等無(wú)效成分;其二粘性過大，不易干燥;其三、易吸潮，影響工藝的穩(wěn)定性等原因排除了工藝一，因選擇了工藝三。工藝條件分別用分光光度法測(cè)定醇提取部分以小檗堿為含量指標(biāo)，做正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)表L9(34)，結(jié)果分析，總工藝路線為：①每100g 鐵屑用金色訶子50g 煎取湯300mL，煮制120min;②處方量34 黃柏皮和處方量訶子、川楝子、梔子加12 倍量75%的乙醇提取2 次，每次2h;③處方量14 黃柏皮粉碎成細(xì)粉直接加入膠囊。

5 味鐵屑湯歷史悠久，且蒙醫(yī)治療“血、希拉”熱引起眼病的首選方之一，但傳統(tǒng)劑型是湯劑，有較多不足之處，因此改變劑型制成膠囊劑，制定出初步的工藝指標(biāo)，這不僅對(duì)其它配伍及加味方的劑型改革奠定了基礎(chǔ)，也為廣泛應(yīng)用于臨床開創(chuàng)了道路。

［1］羅布桑，吉格木德，等.蒙醫(yī)方劑學(xué)［M］.呼和浩特：內(nèi)蒙古人民出版社，1986，274.

［2］宇妥·元丹貢布.四部醫(yī)典［M］.呼和浩特：內(nèi)蒙古人民出版社，1978，1003.

［3］吉格木德丹金扎木蘇.通瓦吸吉德［M］.呼和浩特：內(nèi)蒙古人民出版社，1999.

［4］蒙古學(xué)百科全書.醫(yī)學(xué)卷［M］.內(nèi)蒙古人民出版社，2002：702，637.

［5］羅布桑.蒙藥炮制學(xué)［M］.內(nèi)蒙古人民出版社，1989：17，157，32.

［6］羅布桑.蒙藥學(xué)［M］.民族出版社.

［7］白明綱，等.正交試驗(yàn)法研究蒙藥鐵屑炮制工藝［J］.中藥材，1991，14(2).