劉妤玲等

摘 要 為尋找吡唑醚菌酯與氟菌唑混配對(duì)番茄灰霉病菌菌絲生長(zhǎng)的最佳抑制質(zhì)量配比，延緩番茄灰霉病菌針對(duì)吡唑醚菌酯、氟菌唑單劑抗藥性的發(fā)展，為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中番茄灰霉病的化學(xué)藥劑混配或田間混用提供理論依據(jù)，本研究采用菌絲生長(zhǎng)速率法，分別測(cè)定了吡唑醚菌酯與氟菌唑以及二者在5∶1、4∶1、3∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5配比情況下對(duì)于番茄灰霉病菌的聯(lián)合毒力。結(jié)果表明：吡唑醚菌酯、氟菌唑?qū)Ψ鸦颐共【z的抑制濃度分別為12.279 7 mg/L、0.908 6 mg/L；二者在質(zhì)量比2∶1、1∶1情況下復(fù)配，共毒系數(shù)分別達(dá)131.85、120.71，具有增效作用。吡唑醚菌酯與氟菌唑復(fù)配具有增效作用。

關(guān)鍵字 吡唑醚菌酯 ；氟菌唑 ；灰葡萄孢 ；復(fù)配增效 ；聯(lián)合毒力測(cè)定

分類號(hào) S481.1

番茄是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)作物之一。由灰葡萄孢（Botrytis cinerea Pers.）引起的番茄灰霉病是一種嚴(yán)重威脅中國(guó)番茄產(chǎn)量與品質(zhì)的重要病害[1]。吡唑醚菌酯（pyraclostrobin）是一種廣譜、高效、安全的甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，主要通過阻止細(xì)胞色素b和c1間電子傳遞而抑制線粒體呼吸作用，從而使病原菌細(xì)胞因能量匱乏而死亡[2-3]。氟菌唑（triflumizole）是一種兼具保護(hù)和治療作用的咪唑類內(nèi)吸性殺菌劑，其主要通過抑制病原菌麥角甾醇的生物合成，從而使病原菌細(xì)胞無(wú)法維持正常的膜系統(tǒng)而死亡[4-5]。吡唑醚菌酯及氟菌唑?qū)Χ喾N病原真菌引起的病害均具有優(yōu)良的防治效果，但由于單一重復(fù)使用一種成分，防治番茄灰霉病具有較高抗性風(fēng)險(xiǎn)，作為QoIs類殺菌劑吡唑醚菌酯則更加凸顯抗性問題[6-7]。由于吡唑醚菌酯與氟菌唑具有不同的結(jié)構(gòu)類型和作用機(jī)制，且根據(jù)國(guó)內(nèi)外相關(guān)報(bào)道，此二類殺菌劑間無(wú)交互抗性[6]，故本實(shí)驗(yàn)將吡唑醚菌酯與氟菌唑作為研究對(duì)象，研究二者復(fù)配用于防治番茄灰霉病的可行性，尋找最佳配比，旨在延緩藥物抗性的產(chǎn)生與發(fā)展。

目前該病害的防治手段中，化學(xué)防控是較為普遍且顯著的手段之一，但由于諸如腐霉利、嘧霉胺等常規(guī)藥劑的長(zhǎng)期單一性、連續(xù)性、反復(fù)性地使用已使番茄灰霉病菌對(duì)其產(chǎn)生不同程度的抗性[8-9]。國(guó)內(nèi)對(duì)吡唑醚菌酯和氟菌唑在番茄灰霉病防控及灰葡萄孢菌絲抑制研究方面的報(bào)道以單劑及與其他化合物復(fù)配居多。紀(jì)軍建等[10]通過菌絲生長(zhǎng)速率法研究8種殺菌劑對(duì)番茄灰霉病菌的毒力時(shí)發(fā)現(xiàn)，吡唑醚菌酯其菌絲生長(zhǎng)抑制中濃度為15.251 7 mg/L。王春偉等[11]通過研究22種殺菌劑對(duì)人參灰霉病病原灰葡萄孢的毒力時(shí)發(fā)現(xiàn)，氟菌唑?qū)ζ渚z生長(zhǎng)抑制中濃度為0.720 0 mg/L。有關(guān)吡唑醚菌酯相關(guān)混劑防治番茄灰霉病方面，2013年德國(guó)巴斯夫在我國(guó)登記注冊(cè)了42.4%氟唑菌酰胺·吡唑醚菌酯懸浮劑在番茄灰霉病上莖葉噴霧使用[12]，且陳春利等[13]研究發(fā)現(xiàn)，該混配制劑對(duì)于辣椒灰霉病防效較好，推薦劑量225～450 g a.i./hm2。而吡唑醚菌酯及氟菌唑與其他成分復(fù)配針對(duì)番茄灰霉病的防控研究方面國(guó)內(nèi)則鮮有報(bào)道。本研究以尋求吡唑醚菌酯與氟菌唑之間最佳質(zhì)量配比為切入點(diǎn)，通過菌絲生長(zhǎng)速率法結(jié)合孫云沛公式法判斷二者最佳配比，從而達(dá)到提高藥劑利用效率，延緩抗性產(chǎn)生。通過大量的配方篩選工作，測(cè)定吡唑醚菌酯與氟菌唑在不同配比情況下對(duì)番茄灰霉病菌的毒力水平，通過復(fù)配增效判定標(biāo)準(zhǔn)，以期找到具有增效作用的配方配比。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試藥劑

吡唑醚菌酯原藥：有效成分含量≥95%，由德國(guó)巴斯夫提供；氟菌唑：有效成分≥95%，江蘇禾本生化有限公司提供；丙酮，分析純，西安三浦化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。

1.1.2 供試培養(yǎng)基

馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基（PDA）參考方中達(dá)[14]的方法配制。

1.1.3 供試菌種

番茄灰霉病菌（B. cinerea），分離自南寧周邊地區(qū)，經(jīng)純化培養(yǎng)后經(jīng)柯赫氏法則驗(yàn)證其致病性后將菌種接種于PDA培養(yǎng)基中，在24℃，相對(duì)濕度90%條件下培養(yǎng)4 d，菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)皿后用0.4 cm打孔器打成菌餅備用。

1.2 方法

1.2.1 吡唑醚菌酯及氟菌唑及其混配劑對(duì)番茄灰霉病菌菌絲生長(zhǎng)影響

采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定吡唑醚菌酯、氟菌唑、吡唑醚菌酯與氟菌唑各配比組合物對(duì)番茄灰霉病菌菌絲生長(zhǎng)的影響，各藥劑處理濃度見表1。將供試菌餅接種至各處理各濃度梯度含藥PDA平板中央，菌面朝下，設(shè)置無(wú)藥劑溶劑PDA平板為對(duì)照，每濃度重復(fù)3次，將平板置于24℃，90%濕度條件下培養(yǎng)，待菌絲生長(zhǎng)直徑達(dá)到培養(yǎng)皿直徑約50%時(shí)（48 h左右）調(diào)查結(jié)果，測(cè)定菌落直徑，按照下述公式計(jì)算抑制率。采用鄧肯氏新復(fù)極差法對(duì)所得各處理菌落直徑數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性分析。

1.2.2 吡唑醚菌酯與氟菌唑室內(nèi)聯(lián)合毒力測(cè)定

根據(jù)1.2.1所述各藥劑不同濃度處理對(duì)番茄灰霉病菌菌絲生長(zhǎng)抑制率，以藥劑濃度對(duì)數(shù)為自變量x，以菌絲生長(zhǎng)抑制率的幾率值為因變量y，數(shù)據(jù)通過DPS數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)軟件擬合，計(jì)算各個(gè)藥劑處理的毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)r，并根據(jù)回歸方程求出各藥劑的EC50及95%置信區(qū)間。

通過下述孫云沛公式法計(jì)算復(fù)配共毒系數(shù)，評(píng)判各配比濃度增效水平[15]。

單劑毒力指數(shù)（TI）=×100

混合毒力指數(shù)（ATI）=×100

混劑理論毒力指數(shù)（TTI）=∑（各單劑毒力指數(shù)TI×各單劑所占比例P）

共毒指數(shù)（CTC）=×100

增效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：共毒系數(shù)（CTC）≤80為拮抗作用，80

2 結(jié)果與分析

2.1 吡唑醚菌酯及氟菌唑及其混配劑對(duì)番茄灰霉病菌菌絲生長(zhǎng)影響

吡唑醚菌酯和氟菌唑?qū)Ψ鸦颐共【z生長(zhǎng)的影響結(jié)果如表2所示。從表2可以看出，吡唑醚菌酯和氟菌唑?qū)Ψ鸦颐共【哂袕?qiáng)烈的抑菌作用，其中，以氟菌唑?qū)Ψ鸦颐共【囊志饔米顝?qiáng)，其EC50值僅為0.908 6 mg/L，是吡唑醚菌酯的13.5倍（吡唑醚菌酯的EC50值為12.279 7）。說明2種殺菌劑對(duì)番茄灰霉病菌的毒力存在明顯差異。

2.2 吡唑醚菌酯與氟菌唑室內(nèi)聯(lián)合毒力測(cè)定

吡唑醚菌酯和氟菌唑不同配比對(duì)番茄灰霉病菌的毒力測(cè)定結(jié)果（表2）表明，吡唑醚菌酯與氟菌唑在質(zhì)量比分別為5∶1、4∶1、1∶3、1∶4和1∶5時(shí)，增效作用不明顯，其CTC介于102～106；當(dāng)質(zhì)量比為3∶1時(shí)，增效作用明顯，此時(shí)的CTC為118.68；當(dāng)質(zhì)量比在2∶1～1∶1時(shí)，各處理CTC均大于120，尤其當(dāng)質(zhì)量比為2∶1時(shí)，CTC值達(dá)到131.85，遠(yuǎn)大于120，表明具有明顯的增效作用。

3 討論

據(jù)相關(guān)報(bào)道，番茄栽培種質(zhì)資源只有有限的基因型和表現(xiàn)型變異，且對(duì)番茄灰霉病菌不表現(xiàn)較高水平抗性[16]?？梢?，到目前為止，抗灰霉病番茄品種相對(duì)較為缺乏。因此，選擇適當(dāng)?shù)乃巹┏蔀榉乐畏鸦颐共〉闹匾胧?。本研究表明，吡唑醚菌酯及氟菌唑單劑?duì)番茄灰霉病菌菌絲生長(zhǎng)具有良好的抑制作用，與此同時(shí)，與其相關(guān)的大田研究也表現(xiàn)出對(duì)番茄灰霉病的良好防效。但長(zhǎng)期連續(xù)單一使用某一種藥劑極易誘使病原菌產(chǎn)生抗藥性。具殺菌抗性行動(dòng)委員會(huì)（Fungicide Resistance Action Committee，F(xiàn)RAC）表示，甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑由于其靶標(biāo)單一性，具有較高抗性風(fēng)險(xiǎn)；與此同時(shí)，灰葡萄孢（B. cinerea）對(duì)不同種類殺菌劑均有可能產(chǎn)生較高抗性；而此類殺菌劑長(zhǎng)期連續(xù)防治由灰葡萄孢引起的作物病害則進(jìn)一步提升灰葡萄孢對(duì)此類殺菌劑的抗性風(fēng)險(xiǎn)[7]。可見，作為甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑的吡唑醚菌酯如在實(shí)際生產(chǎn)過程中應(yīng)用不當(dāng)，則很容易因抗性問題而出現(xiàn)防治失敗的情況。對(duì)于氟菌唑，同樣存在上述可能。因此，為了延長(zhǎng)吡唑醚菌酯、氟菌唑使用壽命，采用科學(xué)配比復(fù)配使用，成為提升藥效、減緩病原菌抗性產(chǎn)生的重要措施。

本研究表明，吡唑醚菌酯與氟菌唑復(fù)配對(duì)于番茄灰霉病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制具有協(xié)同增效作用，二者尤其在質(zhì)量比2∶1情況下復(fù)配，共毒系數(shù)最高。由此得出，二者混配用于防治番茄灰霉病具有一定可行性，研究結(jié)果可作為生產(chǎn)中農(nóng)藥復(fù)配或田間混用的依據(jù)。由于藥劑在大田施用過程中，藥效還會(huì)受到其他因素影響，室內(nèi)生測(cè)與田間實(shí)際防效可能會(huì)有所偏差，該結(jié)論尚需大田試驗(yàn)的進(jìn)一步驗(yàn)證。

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