穆建，佟瑞敏，蘇來曼·哈力克(新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，烏魯木齊8300;新疆維吾爾自治區(qū)食品藥品檢驗所，烏魯木齊830004)

HPLC法測定維吾爾藥大花羅布麻葉中異槲皮苷的含量

穆建1，2，佟瑞敏2，蘇來曼·哈力克2
(1新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，烏魯木齊830011;2新疆維吾爾自治區(qū)食品藥品檢驗所，烏魯木齊830004)

目的建立高效液相色譜法測定大花羅布麻葉中異槲皮苷含量的方法。方法采用高效液相色譜法對樣品中異槲皮苷進行定量分析，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;甲醇-乙腈-0.3%磷酸(11∶10∶79)為流動相，柱溫為35℃，檢測波長為354 nm。結(jié)果異槲皮苷進樣量在濃度為0.020 2～0.202 0 mg/mL(r=0.999 9)范圍內(nèi)與其峰面積呈良好線性關(guān)系。平均回收率為104.45%(n=6)，RSD為0.45%。10批不同產(chǎn)地樣品中異槲皮苷的含量為0.320%～0.392%，平均含量為0.37%。結(jié)論HPLC色譜法對大花羅布麻葉中異槲皮苷進行測定，方法簡便，精確，重現(xiàn)性好，為有效制訂質(zhì)量標準提供科學(xué)依據(jù)。

維吾爾藥;大花羅布麻葉;異槲皮苷;高效液相色譜法

大花羅布麻葉為維吾爾醫(yī)習(xí)用藥材，維語名“Ak Qige Yopurmiki”，即“阿克其格尤普馬克”，也稱“Lopnur Kanderi Yopurmiki”，系夾竹桃科植物白麻屬大花羅布麻葉［Poacynum hendersonii(Hook. f)Woodson］的干燥葉片，主產(chǎn)于新疆庫爾勒、阿克蘇等地，收載于《新疆維吾爾自治區(qū)藥材標準2010年版(第一冊)》［1］。有關(guān)研究表明，黃酮類化合物具有清除自由基、抗氧化、抗突變、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等功能。通過藥理研究表明，大花羅布麻葉所含的豐富的黃酮類成分具有延緩衰老、降壓、降脂、抗感冒、鎮(zhèn)靜安神等功效［2-5］。

有關(guān)研究報道大花羅布麻葉化學(xué)成分中含有異槲皮苷、槲皮素、金絲桃苷、槲皮素3-O-槐糖苷、蘆丁、三葉豆苷、山奈素、紫云英苷、北美圣草素7-O-葡萄糖苷、異鼠李素3-O-葡萄糖苷等［6-9］。大花羅布麻葉中蘆丁、金絲桃苷、槲皮素以及羅布麻甲素的含量，目前，已有相關(guān)研究采用高效液相色譜法(HPLC法)測定［10-14］。本研究采用HPLC法對不同產(chǎn)地的10批次大花羅布麻葉中黃酮類成分異槲皮苷含量進行測定，方法簡便、精確，重現(xiàn)性好，為建立質(zhì)量標準提供實驗依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器高效液相色譜儀(日本島津，LC-20AT)，二極管陣列檢測器(日本島津，SPD-20A)，超純水儀(臺灣艾柯，KLZ-UP)，超聲儀(上海科導(dǎo)，SK7210LHC)，分析天平(德國賽多利斯，CPA225D)。

1.2 試劑異槲皮苷對照品(含量:≥98.0%;批號:MUST-10021901)購自成都曼斯特生物制品有限公司。甲醇、乙腈為色譜純，磷酸為優(yōu)級純，乙醇等試劑均為分析純。

1.3 樣品不同產(chǎn)地大花羅布麻葉樣品10批次，分別為20130706(新疆庫爾勒)、20140308(新疆尉犁)、20130616(新疆庫爾勒)、20131216(新疆尉犁)、20131020(新疆尉犁)、20140320(新疆庫爾勒)、20130704(新疆阿勒泰)、20140416(新疆尉犁)、20140512(新疆庫爾勒)、20130820(新疆庫爾勒)，經(jīng)新疆維吾爾自治區(qū)食品藥品檢驗所蘇來曼·哈力克主任藥師鑒定均為夾竹桃科植物大花羅布麻［Poacynum hendersonii(Hook.f)Woodson］的干燥葉。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備精密稱取異槲皮苷對照品適量，加70%乙醇制成每1 mL含0.121 2 mg的溶液，即得。

2.2 供試品溶液的制備取本品粉末(過3號篩)約1 g，精密稱定，置150 mL具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇25 mL，密塞，搖勻，稱定重量，加熱回流1 h后，放冷再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-乙腈-0.3%磷酸(10∶11∶79)為流動相，柱溫為35℃，檢測波長為354 nm;理論塔板數(shù)以異槲皮苷計應(yīng)不低于5 000，樣品色譜圖中異槲皮苷的分離度＞1.5，見圖1。

圖1 大花羅布麻葉HPLC色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察精密稱定異槲皮苷對照品適量，加70%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成異槲皮苷的對照品貯備溶液。精密吸取不同體積的對照品貯備溶液，稀釋成不同濃度的系列溶液:0.020 2、0.040 4、0.080 8、0.121 2、0.161 6、0.202 0 mg/mL的對照品溶液，各進樣10μL，按上述色譜條件測定峰面積。以對照品的濃度(Y)對峰面積(X)進行線性回歸，得回歸方程:Y=39 580X－31 915，r=0.999 9，結(jié)果表明異槲皮苷在0.020 2～0.202 0 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗精密稱定異槲皮苷對照品適量，加70%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成含異槲皮苷0.121 2 mg/mL的對照品溶液，在24 h內(nèi)重復(fù)進樣6次，測定異槲皮苷峰面積。結(jié)果峰面積的RSD為0.19%，表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗取同一樣品(批號:20140512)，按照“2.2”項下方法制備供試品溶液。分別在0、5、10、15、20、25 h進樣10μL，測定異槲皮苷的峰面積，結(jié)果峰面積的RSD為0.59%，表明供試品溶液在25 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重現(xiàn)性試驗取同一樣品(批號:20140512)，按照“2.2”項下方法平行制備供試品溶液6份，測定異槲皮苷峰面積，結(jié)果峰面積的RSD為0.98%，并計算異槲皮苷的含量，其含量為0.356%、0.356%、0.364%、0.359%、0.359%、0.358%，平均值為0.36%，RSD=0.82%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性良好。

2.8 加樣回收率試驗取異槲皮苷對照品適量，精密稱定，加70%乙醇溶解，制成1.812 mg/mL的溶液。精密稱定同一樣品(批號:20140512)粉末(過3號篩)0.5 g，稱取6份，置具塞錐形瓶中，分別精密加入1 mL對照品溶液，再精密加入70%乙醇24 m L，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。照“2.3”項下色譜法測定，計算加樣回收率，結(jié)果異槲皮苷平均回收率為104.35%，RSD為0.49%(n=6)，具良好的回收率，見表1。

表1 異槲皮苷加樣回收率結(jié)果(n=6)

2.9 樣品含量測定取不同產(chǎn)地的10批樣品，按“2.2”項下方法制備供試品溶液。按“2.3”項下色譜條件測定樣品異槲皮苷的峰面積，計算樣品中異槲皮苷的含量。結(jié)果表明10批大花羅布麻葉異槲皮苷含量較為接近，10批樣品異槲皮苷含量為0.320%～0.392%，平均含量為0.37%，見表2。

表2 10批大花羅布麻葉藥材異槲皮苷含量測定結(jié)果

3 結(jié)論

本實驗嘗試利用多種流動相系統(tǒng)［甲醇-0.2%磷酸(14∶86)、乙腈-0.2%磷酸(15∶85)、甲醇-乙腈-0.3%磷酸(11∶12∶77)］、恒比例和梯度洗脫及不同色譜柱等條件對樣品中異槲皮苷進行分離檢測，綜合考慮分離度、最大吸收波長、理論塔板數(shù)、拖尾因子以及單針進樣的時間等因素，最終選擇了以甲醇-乙腈-0.3%磷酸(11∶10∶79)恒比例為流動相、柱溫為35℃。檢測波長為354 nm作為色譜條件，并將大花羅布麻葉中含量較高、對照品容易分離純化的異槲皮苷作為含量控制指標，對大花羅布麻葉藥材的質(zhì)量進行量化。

供試品溶液制備使用了不同提取溶劑、不同提取條件(超聲提取、加熱回流提取)、確定采用乙醇及加熱回流提取方法后，分別采用不同提取時間(10、30、60 min)、不同提取料液比(10、25、50 mL)以及不同濃度的乙醇(50%、70%、90%)進行了樣品提取方法考察，結(jié)果以加入25mL70%乙醇為溶劑，加熱回流提取60 min效果最佳。

［1］新疆維吾爾自治區(qū)食品藥品監(jiān)督管理局.新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾藥材標準2010年版(第一冊)［M］.烏魯木齊:新疆人民衛(wèi)生出版社，2010:8.

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Determ ination of isoquercitrin in leaves of Pocvnum hendersonii(Hook.f.) W oodson of Uyghur crude drug by HPLC

MU Jian1，2，TONG Ruim in2，Suleyman Halik2
(1College of Pharmacy，Xinjiang Medical University，Urumqi830011，China;2Xinjiang Uyghur Autonomus Region Institution for Food and Drug Control，Urumqi 830004，China)

Ob jective To establish a method for the determination of isoquercitrin in leaves of Pocvnum hendersonii(Hook.f.)Woodson by HPLC.Methods HPLCmethod was adopted for a quantitative analysis of isoquercitrin.Itwas carried out on C18column，with themobile phase ofmethnal-acetonitrile-0.3%phosphoric acid water(11∶10∶79)，the flow rate of 1.00m l/min，the column temperature of 35℃and thewavelength for detection of354 nm.Results Therewere good linear relationships between the peak area and concentration at the range of 0.020 2～0.202 mg/mL for isoquercitrin(r=0.999 9).The average recovery rate of isoquercitrin was 104.45% (n=6)，with RSD of 0.45%.The average content of ten different samples was 0.37%.Conclusion HPLC method to determine the isoquercitrin in leaves of Pocvnum hendersonii(Hook.f.)Woodson was proved to be simple，accurate and reproducible，which can provide scientific basis for quality control of leaves of Pocvnum hendersonii(Hook.f.)Woodson.

Uyghur crude drug;leaves of［Pocvnum hendersonii(Hook.f.)Woodson］;isoquercitrin;HPLC

R914

A

1009-5551(2015)06-0718-03

10.3969/j.issn.1009-5551.2015.06.014

2014-11-02］

(本文編輯施洋)

國家藥典委員會《中國藥典2015年版》科研基金(2013-M43)

穆建(1982-)，男，在讀博士，實驗師，研究方向:新疆特色藥物的研究與開發(fā)。

蘇來曼·哈力克，男(維吾爾族)，本科，主任藥師，碩士生導(dǎo)師，研究方向:維吾爾藥質(zhì)量標準研究與評價，E-mail:suleyman@sina.cn。