胡偉 張體干 褚衍寧

虎杖藥材中蒽醌衍生物及其苷類成分的測定探討

胡偉 張體干 褚衍寧

目的 探討虎杖藥材中蒽醌衍生物及其苷類成分測定。方法 應(yīng)用高效液相色譜法, 流動相為甲醇-1%高氯酸水溶液(85∶15), 檢測波長：200 ng。結(jié)果 蘆薈大黃素經(jīng)檢測含量居較低水平,大黃素甲醚、大黃酸、大黃素含量較高, 含蒽酯類成分狀況在4批供試品中基本一致, 總量約1.1%～2.8%?；⒄人幉闹? 蘆薈大黃素、大黃素、大黃酸、大黃素甲醚在水解后的樣本含量均高于水解前。結(jié)論 對虎杖藥材中蒽醌衍生物及其苷類成分測定, 結(jié)果準(zhǔn)確, 操作簡便, 可為質(zhì)量控制提供保障。

虎杖；蒽醌衍生物；苷類成分；測定

虎杖具通經(jīng)、解毒清熱、通淋利尿、祛風(fēng)利濕等功效。為蓼科植物虎杖的干燥根和根莖。以江蘇、湖南、浙江等地區(qū)為主產(chǎn)地。研究顯示, 虎杖中蒽醌類以大黃酚、蘆薈大黃素、大黃素甲醚、大黃酸等蒽醌類衍生物為主要成分［1］。本次研究詳細(xì)測定蒽醌類衍生物含量, 了解其苷類成分情況, 以為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 分別在香港、廣西、廣州等藥材商店采購虎杖藥材, 經(jīng)2000年版中國藥典標(biāo)準(zhǔn)檢驗與規(guī)定符合。大黃素甲醚、蘆薈大黃素、大黃酚、大黃酸、大黃素對照片于中國藥品生物制品檢定所采購。

1.2 儀器 日立U-3010紫外分光光度計；N-2000雙通道色譜工作站；LC-10A高效液相色譜儀。

1.3 方法 選擇波長：取大黃素甲醚、蘆薈大黃素、大黃酚對照品, 用甲醇制成溶液, 每毫升含20 μg, 在400～200 nm波長處掃描測定, 大黃最大吸收289.6 nm, 蘆薈大黃素225.6 nm,大黃酸257.8 nm, 大黃酚348.8 nm, 大黃素甲醚262.2 nm, 波長220 nm。色譜條件：柱溫38℃, 流動相設(shè)置為甲醇-1%高氯酸水溶液, 檢測波長200 nm。重現(xiàn)性試驗：對同一供試樣品選取, 分為6份, 行供試品溶液制定, 測定結(jié)果［2］。測定樣品：取2 g虎杖藥材末, 完成精密測定, 取甲醇80 ml加入, 置水浴上加熱回流30 min, 放冷過濾, 采用甲醇洗滌器完成稀釋處理, 至100 ml搖勻, 設(shè)為溶液A。取10 ml, 將大部分甲醇揮發(fā), 取5%硫酸溶液20 ml加入殘留液, 置沸水加熱, 回流1 h, 放冷, 向分液漏斗中移入水溶液, 用氯仿行4次萃取.25 ml/次, 與氯仿萃取液合并, 水洗2次.15 ml/次,分取氯仿萃取液, 實施揮干操作。用甲醇溶解殘渣, 在10 ml量瓶中定容, 為溶液B。另取大黃素甲醚、大黃素等對照品,配置每毫升含15 μg溶液, 依法測定。

2 結(jié)果

蘆薈大黃素經(jīng)檢測含量居較低水平, 大黃素甲醚、大黃酸、大黃素含量較高, 含蒽酯類成分狀況在4批供試品中基本一致, 總量約1.1%～2.8%。 虎杖藥材中, 蘆薈大黃素、大黃素、大黃酸、大黃素甲醚在水解后的樣本含量均高于水解前。見表1。

表 虎杖藥材中大黃酸、蘆薈大黃素等含量測定(mg/g)

3 討論

在水解前后, 總蒽醌衍生物在供品中的但有變化, 水解后呈明顯增加表現(xiàn), 其中大黃素甲醚、大黃素變化較大, 表明此成分存在多以結(jié)合型形式, 蘆薈大黃素、大黃酸變化不大［3］。分析4批供試樣品中含有的總蒽醌含量實施測定的結(jié)果, 蒽醌類衍生物在供試樣品間有較大差別, 未呈規(guī)律性,與取樣部位, 根、根頸、皮部比例及采集季節(jié)、藥材生長時間相關(guān)。蘆薈大黃素經(jīng)檢測含量居較低水平, 大黃素甲醚、大黃酸、大黃素含量較高, 含蒽醌類成分狀況在4批供試品中基本一致, 總量約1.1%～2.8%。 虎杖藥材中, 蘆薈大黃素、大黃素、大黃酸、大黃素甲醚在水解后的樣本含量均高于水解前。提示參考檢測結(jié)果, 可制定質(zhì)量保障方案, 以使藥物藥效最大程度發(fā)揮, 提高在臨床應(yīng)用的價值, 對保障患者生存質(zhì)量意義重大, 臨床需重視相關(guān)研究的進(jìn)一步深入［4,5］。

分析流動相的選擇, 有研究應(yīng)用0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)梯度進(jìn)行洗脫, 虎杖藥材中相關(guān)化學(xué)成分出現(xiàn)了快速分離, 在55 min內(nèi), 所建立的方法可同時對虎杖藥材中分布的4種化學(xué)成分的量測定。通過虎杖藥材自建的化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫, 通過對在TOF/MS上獲取的化合物精確質(zhì)量數(shù)利用, 與數(shù)據(jù)庫中化合物已知理論相對分子質(zhì)量展開對比, 可快速分析虎杖藥材中化學(xué)成分, 應(yīng)用Calculator計算工具, 兩次驗證化學(xué)成分后, 可明晰化鑒別化學(xué)成分, 共鑒別虎杖藥材中的成分有24種。此實驗在對質(zhì)譜條件、色譜和樣品前處理方法系統(tǒng)考察基礎(chǔ)上, 依據(jù)虎杖藥材中化學(xué)成分具體的性質(zhì)特點, 分別應(yīng)用HPLC-MSIFC法和HPLC-DAD法, 對虎杖中2種蒽醌類成分和2種二苯乙烯類成分的量同時測定, 應(yīng)用HPLC-TOF/MS, 明晰化分析虎杖藥材中其他化學(xué)成分, 共鑒別出24種虎杖藥材中的化學(xué)成分, 定性測定和綜合定量兩方面, 綜合評價虎杖藥材的質(zhì)量, 對全面可控制虎杖藥材質(zhì)量的模式和方法建立, 以指導(dǎo)臨床應(yīng)用。

綜上所述, 對虎杖藥材中蒽醌衍生物及其苷類成分測定,結(jié)果準(zhǔn)確, 操作簡便, 可為質(zhì)量控制提供保障。

［1］ 馬培. 虎杖生藥學(xué)研究.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院.2013.

［2］ 李萍. 虎杖及其化學(xué)成分的質(zhì)量控制. 齊魯藥事.2011(4):232-233.238.

［3］ 曹亮. 虎杖中白藜蘆醇和蒽醌類提取分離工藝研究.陜西理工學(xué)院.2010.

［4］ 李育川, 郭巧生, 房海靈, 等.小桐子果殼抑菌活性部位的分離及其HPLC-MS分析.中草藥.2010.41(9):1445-1448.

［5］ 彭娟, 馬辰.對中國藥典2005版虎杖中大黃素測定方法的商榷與改進(jìn).北京中醫(yī).2007.26(4):234-237.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.35.215

2015-07-02］

277400 山東省棗莊市臺兒莊區(qū)中醫(yī)院藥劑科