李金庫，王 闖(牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院 神經(jīng)外科，黑龍江 牡丹江 570)

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紅花黃色素對腦出血大鼠相關(guān)因子的影響及其保護機制研究

李金庫1，王 闖2
(牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院 神經(jīng)外科，黑龍江 牡丹江 157011)

目的：觀察紅花黃色素對腦出血大鼠腦相關(guān)因子含量的影響，研究其保護作用機制。方法：將75只Wistar大鼠隨機分為假手術(shù)組、對照組、治療組，每組25只。在4h、16h、1d、3d、5d時分別檢測腦組織周圍腫瘤壞死因子(TNF-α)含量及血清C反應(yīng)蛋白(CRP)含量變化。結(jié)果：治療組在紅花黃色素的作用下通過5個時間點檢測顯示，大鼠腦組織周圍TNF-α含量表達和血清CRP含量以及腦水腫的程度較對照組低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論：紅花黃色素能夠降低腦出血大鼠腦組織中TNF-α含量和血清CRP含量，并有減輕腦水腫的作用。

紅花黃色素；腦出血；TNF-α；CRP；腦水腫

腦出血(intracerebral hemorrhage，ICH)是神經(jīng)外科常見病和多發(fā)病，其死亡率和致殘率高、預(yù)后較差的特征通常困擾著臨床醫(yī)生。其本質(zhì)為腦實質(zhì)內(nèi)部的出血，多為中、老年人高發(fā)[1],但是導(dǎo)致腦水腫的發(fā)病機制仍未知，有學(xué)者認(rèn)為與炎性因子的產(chǎn)生有關(guān)，如腫瘤壞死因子TNF-α。盡管腦外科通常以手術(shù)為主取出血腫或者止血等，但造成損傷較大，不適合高齡病患，因此，保守治療迄今為止仍是熱點研究課題。

紅花黃色素為菊科植物紅花的主要功能成分，歸屬于查爾酮類，是羥基紅花黃色素A經(jīng)過分離提純手段得到的藥物。其具有擴張冠狀動脈、改善心肌缺血、抗腦缺血、保護神經(jīng)細(xì)胞等作用，另外也有抑制血小板聚集、抗氧自由基、抗腫瘤、提高機體免疫功能等多種藥理作用[2]。C反應(yīng)蛋白(CRP)在腦出血患者的血液和腦脊液中均有不同程度升高，與病程的緩急和輕重正相關(guān)，是臨床評估腦出血程度的指標(biāo)之一[3]。

1 材料與方法

1.1 主要器材與試劑

鼠腦立體定位儀(江灣C型)；7200型紫外分光光度計(上海儀器有限公司)；放射免疫分析儀(西安楚天儀器廠)；5YU-5656酶標(biāo)儀(西安楚天儀器廠)；冷凍離心機(Sigma，3K30)；玻璃勻漿器；50μL微量注射器(哈爾濱海霞儀器集團)；放免TNF-α試劑盒(TNF-α，批號123-TY2)、C反應(yīng)蛋白測定試劑盒(西安天盟試劑有限公司，批號XXC-7788)。

1.2 動物

Wistar大鼠75只,體重(215±3.5)g,雌雄不限,由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)提供,隨機分為假手術(shù)組、對照組、治療組，每組25只。參照牛國忠和王景周[4]的造模方法: ①10%水合氯醛(400mg/kg)腹腔麻醉；②俯臥位固定于立體定位儀上,在頭至后頸部正中線切開皮膚長度1.5cm,用鈍性分離方法暴露前囟,選擇在尾狀核注入；③距鼠尾末端約2cm處剪斷,取尾血50μL,先注入10μL,停針2min后緩慢注入剩余40μL,2min后退針1.5cm停留7min后緩慢將針完全退出。假手術(shù)組按照上述方法手術(shù)但不造模；治療組在對照組處理的基礎(chǔ)上每日腹腔注射紅花黃色素1次,劑量為25mg/10g。

1.3 檢測方法

在4h、16h、1d、3d、5d的時間點，分別對假手術(shù)組、對照組、治療組小鼠各5只尾靜脈取血后，應(yīng)用ELISA法檢測血清中CRP含量；之后乙醚麻醉大鼠,斷頭處死,迅速取腦部出血部位組織進行研磨、離心等處理后，應(yīng)用放射免疫法 (RIA)按試劑盒內(nèi)的說明操作測定TNF-α含量；同時測腦含水量(%)=(濕重—干重)/濕重×100%。

1.4 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果

從表1中可知，對照組TNF-α表達較假手術(shù)組顯著增高，而治療組低于對照組(P<0.01)，有顯著差異性。說明紅花黃色素可以抑制TNF-α表達從而對腦出血損傷產(chǎn)生保護性作用。從表2可以看出，對照組CRP含量較假手術(shù)組顯著增高，在治療組中含量低于對照組(P<0.01)，有顯著差異性，說明紅花黃色素通過某種途徑可以保護出血的腦組織。表3中數(shù)據(jù)顯示對照組鼠腦含水量較假手術(shù)組顯著性增加(P<0.01)，而經(jīng)過給予紅花黃色素治療后腦含水量明顯降低(P<0.01)，進一步說明該藥物有減輕腦水腫，保護腦組織的作用。

表1 各組大鼠腦出血部位腦組織TNF-α含量變化

注：與對照組相比較，*P<0.01；與假手術(shù)組相比較，**P<0.01。

表2 各組大鼠血清中CRP含量變化

注：與對照組相比較，*P<0.01；與假手術(shù)組相比較，**P<0.01。

表3 各組大鼠腦含水量比較

注：與對照組相比較，*P<0.01；與假手術(shù)組相比較，**P<0.01。

3 討論

當(dāng)腦出血發(fā)生后，局部血腫壓迫可導(dǎo)致腦組織周圍炎癥反應(yīng)發(fā)生，病灶中出現(xiàn)較多中性粒細(xì)胞浸潤，同時可以釋放多種細(xì)胞因子，造成組織損傷例如TNF-α等[5]。本研究結(jié)果顯示，紅花黃色素可抑制TNF-α表達，有減輕腦水腫、保護腦組織的作用。由此可見，我們有望通過大量實驗研發(fā)出一種新型治療腦出血的良藥，為廣大患者排除疾病。

[1] MD P V P,MD L E,J.Claude Hemphill III MD M.Intracerebral Hemorrhage[J].Neurocritical Care,2004,1(1):5-18.

[2] TAKAHASHI Y,MIYASSAKA N,TASAKA SH,et al.Constitution of two coloting matters in the flower petals of carthamus tinctorius L[J].Tetrahedron Lett,2012,23(49):5163.

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[4] 王景周,周中和,李瑋,等.大鼠腦出血血腫周邊組織細(xì)胞凋亡的動態(tài)變化規(guī)律研究[J].中國臨床神經(jīng)科學(xué),2003,11(2):124-127.

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(責(zé)任編輯：魏 曉)

2015-03-15

李金庫(1983-)，男，牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院住院醫(yī)生，碩士，研究方向顱腦相關(guān)疾病實驗研究。

R285.5

A

1673-2197(2015)15-0031-02

10.11954/ytctyy.201515012