熊 瑞，胡昌江，張 美，陳志敏，崔園園

(成都中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，四川 成都 611137)

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生、炙淫羊藿對(duì)腎陽(yáng)虛小鼠耐寒能力和交配能力研究

熊 瑞，胡昌江*，張 美，陳志敏，崔園園

(成都中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，四川 成都 611137)

目的：比較淫羊藿油炙前后及分別組成二仙湯后對(duì)氫化可的松所致腎陽(yáng)虛模型小鼠耐寒能力和交配能力的影響。方法：采用氫化可的松造成小鼠腎陽(yáng)虛模型，淫羊藿油炙前后及分別組成二仙湯后的水提濃縮物灌胃，交配實(shí)驗(yàn)考察指標(biāo)為紅外攝像記錄 30min 內(nèi)小鼠的跨騎潛伏期和跨騎次數(shù)，耐寒實(shí)驗(yàn)考察指標(biāo)為40min后缺氧、-18℃寒冷條件下的存活時(shí)間。結(jié)果：與正常組比較，淫羊藿炙品高劑量組能明顯提高交配能力(P<0.05)，二仙湯炙品組皆能明顯提高交配能力(P<0.05或P<0.01), 淫羊藿生品中劑量組能明顯縮短潛伏期(P<0.05)；淫羊藿炙品中、高劑量組能明顯提高耐寒能力(P<0.05或P<0.01)，二仙湯炙品組中、高劑量皆能明顯提高耐寒能力(P<0.01)。結(jié)論：淫羊藿油炙后能改善腎陽(yáng)虛小鼠的交配能力和耐寒能力。

淫羊藿；炙品；腎陽(yáng)虛；交配能力；耐寒能力

淫羊藿，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》[1]，具有補(bǔ)腎陽(yáng)、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕的作用，列為中品。生熟異用是中藥炮制的特色，淫羊藿在中醫(yī)臨床上有祛風(fēng)濕生用、溫腎助陽(yáng)炙用的傳統(tǒng)用藥經(jīng)驗(yàn)。淫羊藿用羊脂油炮制入藥歷史悠久，最早見(jiàn)于《雷公炮炙論》：“凡使(時(shí)呼仙靈脾)，需用夾刀去葉、四畔花(枝)盡后，用羊脂相對(duì)拌炒過(guò)，待羊脂四兩為度也[2]?！毖蛑椭朔ǎ瑥哪媳背连F(xiàn)代一直沿用，且為1963-2010版《中華人民共和國(guó)藥典》(簡(jiǎn)稱《中國(guó)藥典》)淫羊藿項(xiàng)下唯一收載的炮制品種。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)淫羊藿油炙前后及分別組成二仙湯對(duì)腎陽(yáng)虛小鼠耐寒能力和交配能力進(jìn)行對(duì)比研究，以期為中醫(yī)臨床合理用藥提供依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

昆明種小鼠，體重18～22g，清潔級(jí)，由成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)合格證號(hào)：SCXK(川)2008-24)。動(dòng)物于成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥藥理三級(jí)科研實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)(許可證號(hào)：川實(shí)動(dòng)管第015號(hào))，國(guó)家中醫(yī)藥管理局三級(jí)實(shí)驗(yàn)室觀察(NO.TCM-2009-324)。

1.2 藥物與試劑

淫羊藿、黃柏、知母、仙茅、巴戟、當(dāng)歸均購(gòu)自荷花池中藥材市場(chǎng)，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)生藥教研室盧先明教授鑒定為2010版《中國(guó)藥典》收載品種。實(shí)驗(yàn)室前期分別對(duì)已購(gòu)得的淫羊藿(EpimediumbrevicornuMaxim)和箭葉淫羊藿(Epimediumsagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim)進(jìn)行入藥標(biāo)準(zhǔn)的考察，結(jié)果表明淫羊藿在總黃酮含量、淫羊藿苷含量、醇浸出物等指標(biāo)上均高于箭葉淫羊藿，且已有文獻(xiàn)[3]報(bào)道淫羊藿化學(xué)成分較穩(wěn)定，箭葉淫羊藿種內(nèi)質(zhì)量差異較大，故本實(shí)驗(yàn)選擇淫羊藿作為實(shí)驗(yàn)藥物。

氫化可的松(規(guī)格100mg/2mL，天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司，批號(hào)1103052)；氯化鈉注射液(0.9%，四川科倫藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)M12011117)；乙烯雌酚(合肥久聯(lián)制藥有限公司，批號(hào)20100920)；金匱腎氣丸(北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠，批號(hào)1030582)。

1.3 儀器

LT502 型電子天平(常熟市天量?jī)x器有限責(zé)任公司)； AR862A型紅外測(cè)溫儀(?，擲MART SENSOR)；計(jì)時(shí)秒表(中國(guó)卡西歐有限責(zé)任公司)；紅外線攝像頭(臺(tái)灣多安科技有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 藥物制備

炙淫羊藿按實(shí)驗(yàn)室前期研究篩選出的最佳工藝條件制得[4]。由于淫羊藿、二仙湯臨床上多以湯劑入藥，故本實(shí)驗(yàn)采用水提液的濃縮物灌胃。淫羊藿油炙前后及分別組成二仙湯后，加12倍量水浸泡0.5h，煎煮1h，過(guò)濾，濾渣再加12倍量水，煎煮2次，每次1h，過(guò)濾，合并藥液，濃縮至相應(yīng)濃度。金匱腎氣丸懸液制備：劑量參考實(shí)驗(yàn)室前期研究配制(5g·mL-1)，粉碎后過(guò)100目篩，制備成濃度為0.25g·mL-1的混懸液。乙烯雌酚混懸液制備:乙烯雌酚片0.5mg碾碎成粉末，用25mL水配制成混懸液[5-7]。

2.2 交配實(shí)驗(yàn)

取健康KM小鼠雄性150只，雌性50只，體重22g～25g。將雄性小鼠按體重隨機(jī)分為15組：正常對(duì)照組，模型組，金匱腎氣丸組(即陽(yáng)性組，5g·kg-1)，生品低、中、高劑量組(6g·kg-1、12g·kg-1、24g·kg-1)，炙品低、中、高劑量組(6g·kg-1、12g·kg-1、24g·kg-1)，二仙湯生品低、中、高劑量組(8g·kg-1、16g·kg-1、32g·kg-1)，二仙湯炙品低、中、高劑量組(8g·kg-1、16g·kg-1、32g·kg-1)。每組10只，正常對(duì)照組和模型組灌胃純凈水0.4mL/20g，其余各組分別灌胃相應(yīng)藥物，每天1次，連續(xù)30天。從給藥第 4 天開(kāi)始，除正常對(duì)照組皮下注射生理鹽水0.1mL/20g外，其余各組均注射氫化可的松0.1mL/20g，每天1次，連續(xù)7天，造模同時(shí)連續(xù)給藥。于給藥后第30天給藥1h后將雌雄小鼠按(1∶3)比例合籠觀察 30min內(nèi)交配能力，雌性小鼠于交配前3天按照0.4mL/20g灌胃乙烯雌酚混懸液使之發(fā)情時(shí)間同步于交配時(shí)間。

2.3 耐寒實(shí)驗(yàn)

取健康KM小鼠雄性150只，雌性150只，體重22 g～25g。將雄性小鼠按體重隨機(jī)分為15組：正常對(duì)照組，模型組，金匱腎氣丸組(即陽(yáng)性組，5g/kg)，生品低、中、高劑量組(6g·kg-1、12g·kg-1、24g·kg-1)，炙品低、中、高劑量組(6g·kg-1、12g·kg-1、24g·kg-1)，二仙湯生品低、中、高劑量組(8g·kg-1、16g·kg-1、32g·kg-1)，二仙湯炙品低、中、高劑量組(8g·kg-1、16g·kg-1、32g·kg-1)。每組雌雄各10只。正常對(duì)照組和模型組灌胃純水0.4mL/20g，其余各組分別灌胃相應(yīng)藥物，每天1次，連續(xù)16天。從給藥第4天開(kāi)始，除正常對(duì)照組皮下注射生理鹽水0.1mL/20g外，其余各組均注射氫化可的松0.1mL/20g，每天1次，連續(xù)7天，造模同時(shí)連續(xù)給藥。第16天給藥(或給水)后60min，將小鼠放入-18 ℃冰箱內(nèi)，于40min后每隔5min觀察小鼠存活情況，記錄死亡時(shí)間，直至所有小鼠全部死亡。

2.4 數(shù)據(jù)分析

2.5 結(jié)果

2.5.1 交配實(shí)驗(yàn) 與模型組相比，淫羊藿炙品高劑量跨騎潛伏時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P<0.05)，跨騎次數(shù)極顯著增加(P<0.01)；二仙湯炙品低、中、高劑量組跨騎潛伏期顯著縮短(P<0.05)，二仙湯炙品中、高劑量組跨騎次數(shù)顯著增加(P<0.05或P<0.01)。結(jié)果提示，雖然生品淫羊藿與炙品淫羊藿、生品二仙湯與炙品二仙湯，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)差異，但炙品淫羊藿和炙品二仙湯達(dá)到一定劑量時(shí)可分別在縮短跨騎潛伏時(shí)間和增加跨騎次數(shù)上表現(xiàn)出差異，而生品淫羊藿或生品二仙湯并未表現(xiàn)出顯著差異，說(shuō)明炙品淫羊藿在改善交配能力方面，無(wú)論單味使用或是納入二仙湯中，皆優(yōu)于生品淫羊藿。具體結(jié)果見(jiàn)表1。

2.5.2 耐寒實(shí)驗(yàn) 與模型組相比，淫羊藿炙品中劑量雄性小鼠死亡時(shí)間顯著縮短(P<0.05)，炙品高劑量雌性、雄性小鼠死亡時(shí)間皆顯著縮短(P<0.01)；炙品二仙湯中、高劑量雌性、雄性小鼠死亡時(shí)間均極顯著縮短(P<0.01)。結(jié)果提示，雖然生品淫羊藿與炙品淫羊藿、生品二仙湯與炙品二仙湯在統(tǒng)計(jì)學(xué)上沒(méi)有差異，但炙品淫羊藿及炙品二仙湯達(dá)到一定劑量以上時(shí)，可在延長(zhǎng)死亡時(shí)間上表現(xiàn)出顯著差異，生品及生品二仙湯未出現(xiàn)顯著性差異，表明淫羊藿炙品在對(duì)耐寒能力有改善作用上，無(wú)論是單味使用還納入二仙湯，均優(yōu)于生品，結(jié)果見(jiàn)表2。

組別跨騎潛伏時(shí)間(min)跨騎次數(shù)(次/30min)正常對(duì)照組17.94±3.873.3±1.30模型組27.80±1.32**0.8±0.64**金匱腎氣丸組22.89±2.35#3.2±1.40##生淫羊藿Min23.67±4.101.5±0.70生淫羊藿Mid23.08±4.822.2±1.04生淫羊藿Max25.31±1.972.5±1.20炙淫羊藿Min25.00±2.051.7±0.90炙淫羊藿Mid23.80±2.231.5±0.90炙淫羊藿Max22.99±1.96#3.3±1.16##生品二仙湯Min25.42±2.351.8±1.20生品二仙湯Mid24.42±2.451.8±1.20生品二仙湯Max26.20±2.472.5±0.90炙品二仙湯Min22.07±3.20#2.5±1.00炙品二仙湯Mid22.90±2.33#3.1±0.94#炙品二仙湯Max22.68±1.43#3.8±1.40##

注：30min內(nèi)未出現(xiàn)跨騎的雄性小鼠，其跨騎潛伏期均按30min計(jì)。與正常對(duì)照組比較，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05,##P<0.01。

組別雌性小鼠死亡時(shí)間雄性小鼠死亡時(shí)間正常對(duì)照組101.0±10.288.5±9.5模型組61.0±10.2**57.0±8.0**金匱腎氣丸組84.0±9.0##79.5±9.5##生品淫羊藿Min68.0±5.463.0±6.0生品淫羊藿Mid71.5±6.167.0±6.4生品淫羊藿Max68.5±6.867.5±9.0炙品淫羊藿Min69.0±6.064.5±5.6炙品淫羊藿Mid69.5±4.670.0±5.0#炙品淫羊藿Max74.0±4.2##84.0±6.4##生品二仙湯Min71.5±5.866.5±5.8生品二仙湯Mid69.5±6.565.0±5.0生品二仙湯Max72.0±5.467.5±5.5炙品二仙湯Min69.0±5.266.0±4.2炙品二仙湯Mid84.0±8.2##83.5±5.8##炙品二仙湯Max91.5±9.5##97.0±5.4##

注：與正常對(duì)照組比較，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05,##P<0.01。

3 討論

采用氫化可的松造模后，與正常對(duì)照組比較，小鼠的跨騎潛伏時(shí)間明顯延長(zhǎng)，跨騎次數(shù)明顯減少，說(shuō)明造模成功。淫羊藿生品與油炙品組比較，無(wú)論是單味使用還是納入二仙湯,跨騎潛伏時(shí)間和跨騎次數(shù)沒(méi)有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, 但炙品淫羊藿有優(yōu)于生品淫羊藿的趨勢(shì)。

動(dòng)物采用氫化可的松造模后，與正常組比較，小鼠耐寒時(shí)間顯著縮短，說(shuō)明氫化可的松可致模型動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)紊亂、應(yīng)激反應(yīng)下降。淫羊藿生品組與炙品組比較，無(wú)論單味使用還是納入二仙湯，耐寒時(shí)間雖無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但炙品有優(yōu)于生品的趨勢(shì)。

傳統(tǒng)藥性理論認(rèn)為，羊脂油甘溫，具有補(bǔ)虛、 潤(rùn)燥的功效[7]。但目前關(guān)于羊脂油的現(xiàn)代研究?jī)H限于羊脂油的化學(xué)成分研究，對(duì)單獨(dú)應(yīng)用時(shí)羊脂油是否具有溫腎助陽(yáng)功效或與淫羊藿的相加增效作用，目前尚缺乏報(bào)道，還有待進(jìn)一步研究。

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(責(zé)任編輯：宋勇剛)

Study on the Effect of the Crude and Mutton-fat-processed Epimedii Folium in Er’xian Decoction on Freeze Resistance Capability and Mating Ability in Model of Kidney-yang Asthenia

Xiong Rui,Hu Changjiang*,Zhang Mei，Chen Zhimin，Cui Yuanyuan

(College of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu 611137，China)

Objective:Objective To compare the effect of the crude Epimedii folium, mutton-fat-processed Epimedii folium and Er’xian Decoction (EXD) containing the two respectively on freeze resistance capability and mating ability in model of kidney-yang asthenia. Methods:To adopt murine model of kidney-yang asthenia caused by hydrocortisone and gavage water extraction and concentraction. Assessment criteria of mating experiment are straddle latency period and straddle frequency, and assessment criteria of freezing test is survival time in anoxia and a low temperature(-18℃) condition after 40 minutes. Results:Compared with normal control group, the mutton-fat-processed in high dose significantly improved mating ability(P<0.05), also well as mutton-fat-processed in EXD(P<0.05 orP<0.01), and the crude in middle dose significantly shortened latent period(P<0.05). The mutton-fat-processed in middle and high dose significantly improved freeze resistance capability(P<0.05 orP<0.01). It was the same as the mutton-fat-processed in EXD (P<0.01). Conclusion:The mutton-fat-processed Epimedii folium can significantly improve freeze resistance capability and mating ability.

Epimedii Folium ; Mutton-fat-processed ; Kidney-yang Asthenia ; Mating Ability ; Freeze Resistance Capability

2014-09-24

中醫(yī)藥行業(yè)科研專項(xiàng)(20110700717)

熊瑞(1991-)，女，成都中醫(yī)藥大學(xué)碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幣谥萍爸苿┭芯俊?/p>

胡昌江(1952-)，男，成都中醫(yī)藥大學(xué)教授，博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幣谥茖W(xué)的教學(xué)及科研。Email：hhccjj@hotmail.com

R285.5

A

1673-2197(2015)03-0005-03

10.11954/ytctyy.201503003