鐘希文，王賢兒

(1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山中醫(yī)院，廣東 中山 528400； 2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣東 廣州 510006)

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蛇鱗草-大黃固體脂質(zhì)納米粒體外釋藥藥劑學(xué)特性研究

鐘希文1，王賢兒2

(1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山中醫(yī)院，廣東 中山 528400； 2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣東 廣州 510006)

目的：考察蛇鱗草-大黃固體脂質(zhì)納米粒(SH-SLN)的體外釋藥規(guī)律。方法：采用動態(tài)透析釋藥法考察SH-SLN的體外釋藥特性，并采用高效液相色譜法測定不同時(shí)間點(diǎn)有效成分的含量，計(jì)算累積釋藥量，進(jìn)行釋藥曲線擬合，分析釋藥規(guī)律。結(jié)果：SH-SLN中triphyllinA在最初釋藥1h內(nèi)累積釋藥率達(dá)14.7%，大黃素為9.6%，有突釋現(xiàn)象，釋藥曲線均符合Weibull方程。結(jié)論：與SH-YY比較，SH-SLN能夠明顯延緩藥物釋放時(shí)間，有一定的緩釋作用。

蛇鱗草；大黃；固體脂質(zhì)納米粒；體外釋藥；動態(tài)透析技術(shù)

蛇鱗草(Pronephrium triphyllum(Sw.)Holtt)為廣東地產(chǎn)嶺南特色藥材，藥理研究表明其具有顯著的抑菌、抗炎、鎮(zhèn)痛效果[1-2]。以蛇鱗草為主藥的制劑包括蛇黃散、復(fù)方蛇鱗草膏及制劑改良的蛇黃凝膠[3]等，均可用于治療癰瘡癤腫、蟲咬腫痛、毒蛇咬傷、皮炎濕疹等兩廣地區(qū)常見皮膚疾病，該類疾病患者傷口處往往疼痛難忍，持續(xù)時(shí)間長，因此有必要將蛇鱗草為主藥的制劑開發(fā)成為具有一定緩釋作用的劑型，從而延長藥物的釋放，增加藥物在皮膚的貯留時(shí)間，有效緩解疼痛。本研究采用新型載體固體脂質(zhì)納米粒(Solid Lipid Nanoparticles，SLN)對模型藥物——蛇鱗草(triphyllin A)和大黃目標(biāo)成分(大黃素)進(jìn)行包載[4]，采用薄膜超聲法制備蛇鱗草-大黃固體脂質(zhì)納米粒(SH-SLN)，并在此基礎(chǔ)上采用動態(tài)透析技術(shù)對SH-SLN的體外釋藥規(guī)律進(jìn)行考察[5]。

1 材料

1.1 儀器

Agilent 1100系列高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)，低溫超速離心機(jī)GL-20G-Ⅱ(上海安亭科技儀器廠)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE-2000B(上海亞榮生化儀器廠)，醫(yī)用超聲波清洗器KQ-3200e(昆山市超聲儀器有限公司)，BS224S電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)，透析袋(美國BIOSHARP公司，MW8000-14000)。

1.2 試劑

蛇鱗草采自中山市五桂山，由廣東藥學(xué)院田素英教授鑒定為金星蕨科植物三羽新月蕨(Prpnephrium triphyllum(Sw.)Holtt)的干燥全草；大黃購自廣東省中山市中智藥業(yè)公司；三羽新月蕨苷A(triphyllin A)對照品(由中山市中醫(yī)院提供，從蛇鱗草中分離純化得到，結(jié)構(gòu)由波譜分析鑒定，純度大于98%)；大黃素對照品，購自中國食品藥品檢定研究院，批號：110756-200110；蛇鱗草-大黃提取物(自制，采用95%醇提取，濃縮為1g·mL-1，備用)。

硬脂酸(分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠)；大豆卵磷脂(武漢勝天宇生物技術(shù)有限公司)；吐溫-80(化學(xué)純，廣州醫(yī)藥站化學(xué)試劑公司)；乙腈、甲醇為色譜純；水為屈臣氏蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 SH-SLN制備

采用薄膜超聲法[6]制備，稱取處方量的硬脂酸和卵磷脂置于圓底燒瓶，加入適量無水乙醇，50℃水浴加熱溶解，精密加入藥液，超聲5min，在60℃恒溫條件下減壓回收溶劑成膜附壁，另取適量1%吐溫-80置于成膜的圓底燒瓶，旋轉(zhuǎn)將膜洗下，超聲處理50min，過0.80μm濾膜，除去大顆粒物質(zhì)及無法包封的雜質(zhì)，可得蛇鱗草-大黃SLN混懸液。

2.2 SH-SLN含藥量的測定

采用HPLC法測定指標(biāo)成分triphyllin A和大黃素含量。色譜條件：色譜柱為Dikma Diamonsil (2)C18(250mm×4.6mm，5μm)，流動相為乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)-水(C)，梯度洗脫，0～35min：15%A→75%A；25%B→25%B；60%C→0%C；流速1.0mL·min-1，柱溫30℃，檢測波長226nm，進(jìn)樣量為20μL。理論塔板數(shù)按triphyllin A峰面積和大黃素峰面積計(jì)算，應(yīng)不低于3 000。定時(shí)吸取溶出介質(zhì)，過0.45μm濾膜，取續(xù)濾液進(jìn)高效液相測定峰面積，測定累積釋放率Q(%)。

2.3 SH-SLN體外釋藥實(shí)驗(yàn)

2.3.1 釋放介質(zhì)的選擇 模擬體內(nèi)條件，以去離子水、生理鹽水或磷酸緩沖鹽作為釋放介質(zhì)，但指標(biāo)成分triphyllin A和大黃素極性具有一定差異，因此以生理鹽水加不同濃度無水乙醇作為溶出介質(zhì)：pH7.4生理鹽水、pH7.4生理鹽水+0.05%吐溫、pH7.4生理鹽水+20%無水乙醇、pH7.4生理鹽水+40%無水乙醇。結(jié)果顯示：triphyllin A和大黃素在pH7.4生理鹽水+40%無水乙醇介質(zhì)中溶解度最大，藥物溶出效果較好，符合漏槽原理，故選擇該釋放介質(zhì)。

2.3.2 釋放介質(zhì)穩(wěn)定性考察 精密吸取0.1mL的triphyllin A和大黃素混合對照品溶液(triphyllin A濃度為0.100 0mg·mL-1、大黃素濃度為0.152 0mg·mL-1)溶于pH7.4生理鹽水+40%無水乙醇，置于100mL容量瓶，定容至刻度，37 ℃恒溫水浴，50r/min恒溫?cái)嚢?，分別在12h、24h、48h定時(shí)取樣1mL，測定在0～48h的峰面積變化。triphyllin A和大黃素RSD值分別為1.15%、1.06%(n=3)，表明指標(biāo)成分在該釋放介質(zhì)的穩(wěn)定性較好。

2.3.3 體外釋藥曲線繪制 精密量取“2.1”項(xiàng)制備的SH-SLN混懸液10mL于預(yù)處理的透析袋(截留量為8 000～14 000)，兩端密封，置于100mL燒杯，加入“2.3.1”項(xiàng)篩選的最佳釋放介質(zhì)50mL，加入磁力攪拌子，燒杯蓋好密封膜，置于恒溫(37±1)℃磁力攪拌器，以100r/min的轉(zhuǎn)速旋轉(zhuǎn)，分別于0.5、1、2、4、6、10、12、14、16、18、24、48h不同時(shí)間點(diǎn)定時(shí)精密量取釋放液2mL(同時(shí)補(bǔ)加2mL的釋放介質(zhì))，過0.45μm濾膜，取續(xù)濾液進(jìn)樣采用高效液相色譜儀測定釋放液中指標(biāo)成分的含量，計(jì)算各自累積釋放百分率。同時(shí)，精密吸取150μL的蛇鱗草-大黃藥液(SH-YY)于50mL釋放介質(zhì)中，同法測定SH-YY在0.5、1、2、4、6、10、12、14、16、18、24、48h時(shí)間點(diǎn)釋放液中指標(biāo)成分的含量，計(jì)算各自累積釋放百分率。見圖1。

圖1 體外釋藥曲線

2.3.4 體外釋藥數(shù)據(jù)處理 分別以零級方程、一級動力學(xué)方程、Weibull方程、Ritger-Peppas方程對SH-SLN和SH-YY中triphyllin A和大黃素體外釋藥數(shù)據(jù)進(jìn)行曲線擬合，比較相關(guān)系數(shù)，找出最佳擬合方程，其中R2越接近1表明擬合效果越好。兩成分均與一級動力學(xué)方程、Weibull方程擬合效果較好。見表1、表2。

表1 triphyllin A體外釋藥曲線

表2 大黃素體外釋藥曲線

3 討論

所制備的SH-SLN在初期釋藥速度較快，有突釋現(xiàn)象，其中triphyllin A由于極性相對于大黃素較大，因此可能更多吸附于固體脂質(zhì)納米粒表面，較易游離或釋放，突釋現(xiàn)象較明顯；而大黃素更多包載于內(nèi)部，釋放速度相對較慢，因此在最初的1h內(nèi)，triphyllin A累積釋放量達(dá)14.7%，而大黃素僅9.6%。此外，在釋放的48h內(nèi)，triphyllin A累積釋放量達(dá)90.1%，大黃素達(dá)85.3%，但兩種成分在后期(10～48h)的釋放速度相對較慢，可能是因?yàn)槲接诒砻婊蛴坞x的藥物已釋放完，藥物要透過固體脂質(zhì)納米粒進(jìn)行擴(kuò)散較困難，因此釋藥曲線相對平緩。

根據(jù)數(shù)據(jù)擬合處理，兩成分均與一級動力學(xué)方程、Weibull方程擬合效果較好，可知道所制備的SH-SLN藥物在釋出過程需通過納米級的骨架材料，因此具備了一定的緩釋特征[7-8]，可達(dá)到長時(shí)間釋藥，作用于疼痛部位，持續(xù)緩解疼痛，且在皮膚上有一定的藥物滯留量，而在動物體內(nèi)的作用效果，需進(jìn)一步做藥效學(xué)的評價(jià)驗(yàn)證。

[1] 鐘希文,梅全喜,林慧,等.蛇鱗草抗炎鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2009,10(6):14-16.

[2] 周歲鋒,繆英年,鐘希文.蛇黃散凝膠劑治療蟲咬皮炎臨床觀察[J].中國中醫(yī)急癥,2013,22(12):2116-2117.

[3] 鐘希文,汪亞飛,梅全喜,等.蛇黃凝膠成型工藝研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2014,25(5):1122-1124.

[4] 汪亞飛,鐘希文,梅全喜,等.正交試驗(yàn)優(yōu)選蛇黃凝膠提取工藝[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2013,19(24):39-42.

[5] 張洪,成蓓,詹新安.聯(lián)苯雙酯固體脂質(zhì)納米粒的體外釋藥特性評析[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào),2009,25(1):15-17.

[6] 劉紅梅,褚惠媛,崔金霞,等.薄膜-超聲分散法制備β-欖香烯固體脂質(zhì)納米粒[J].中草藥,2008,39(2):193-195.

[7] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].一部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010,附錄XIX D:202.

[8] 謝秀瓊.中藥新制劑開發(fā)與應(yīng)用 [M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2006:494.

(責(zé)任編輯：李嵐春)

Pharmaceutical Characteritics Study of Prpnephrium Triphyllum and Rheum Solid Lipid Nanoparticles in Vitro Release

Zhong Xiwen1,Wang Xian'Er2

(1.Hospital of Traditional Chinese Medicine of Zhongshan,Zhongshan 528400, China; 2.Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine,Guangzhou 510006,China)

Objective:To investigate the drug release pattern of Prpnephrium triphyllum and Rheum solid lipid nanoparticles (SH-SLN) in vitro.Methods:The dynamic dialysis method was employed to study the characteritics of SH-SLN in vitro release;The content of active ingredients from different time points were determined by HPLC,and then cumulative amount of drug release to was calculated to fit the release curve models and identify drug releasing pattern. Results:Cumulative release rate of triphyllin A in SH-SLH was 14.7% within the first one hour, while emodin was 9.6%, showing the phenomenon of sudden release, and the release curves all fitted with Weibull equation.Conclusion:SH-SLN showed a sustained release effect compared with SH-YY,and could delay drug release obviously.

Pronephrium triphyllum (Sw.) Holtt;Rhubarb;Solid Lipid Nanoparticles;Releasein Vitro;Dynamic Dialysis Method

2014-09-17

廣東省中山市科技計(jì)劃立項(xiàng)項(xiàng)目( 20132A161)

鐘希文(1968-)，女，廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山中醫(yī)院主任中藥師，教授，研究方向?yàn)樾滤庨_發(fā)與中藥藥理研究。E-mail：zszxw@163.com

R944

A

1673-2197(2015)02-0022-02

10.11954/ytctyy.201502009