龐 佩，蘇 成，翟云霞，鞏文峰，旺 姆

（西藏大學(xué) 農(nóng)牧學(xué)院，西藏 林芝860000）

1 引言

灰霉病是全世界蔬菜、觀賞植物、果實(shí)甚至一些大田糧食作物上發(fā)生最普遍和分布最廣泛的病害，是溫室種植植物最常見的病害［1］。目前，在世界范圍內(nèi)，灰霉菌（Botrytis.cinerea）侵染葡萄、蔬菜、漿果以及核果類作物，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，它不僅能引起田間損失，甚至在果實(shí)的儲(chǔ)存和運(yùn)輸中同樣造成危害［2］。自20世紀(jì)70年代以來，我國在防治番茄灰霉病上相繼使用多菌靈、甲基托布津、速克靈等化學(xué)藥劑［3～4］，由于長期連續(xù)使用同一種藥劑（如多菌靈），不僅使環(huán)境受到污染，也使病原菌產(chǎn)生了嚴(yán)重的抗藥性問題［5～6］。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)6種不同化學(xué)藥劑進(jìn)行室內(nèi)毒力測定，了解該6種藥劑地區(qū)對(duì)番茄灰霉菌的毒性強(qiáng)弱，篩選出防治效果較好的藥劑，為番茄灰霉菌抗藥性治理提供理論參考。

2 材料與方法

2.1 試驗(yàn)材料

2.1.1 供試菌種

采取林芝地區(qū)溫室大棚番茄病果進(jìn)行室內(nèi)分離、純化獲得的番茄灰霉菌菌種，并良好保存于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。

2.1.2 供試藥劑

供試藥劑500g/L撲海因SC，拜耳作物科學(xué)（中國）有限公司生產(chǎn)；50% 腐霉利WP，海南正業(yè)中農(nóng)高科股份有限公司；70%純托津超微 WP，山東東信生物農(nóng)藥有限公司；25%腐霉·福美雙 WP，陜西美邦農(nóng)藥有限公司；80%多菌靈 WP，江蘇太倉市農(nóng)藥廠有限公司；75%百菌清WP，海南正業(yè)中農(nóng)高科股份有限公司。

2.2 試驗(yàn)方法

采用菌絲生長速率法［7］，將提前用滅菌水稀釋好的6種供試藥劑（5 000mg/L）的母液分別以無菌水按倍數(shù)逐步稀釋為500μg/mL、200μg/mL、50μg/mL、20μg/mL、12.5μg/mL的藥液，在培養(yǎng)基為50℃左右時(shí)，用移液槍分別取1mL藥液于9mlPDA培養(yǎng)基中，混合均勻，制成帶藥培養(yǎng)基平板，以不加任何藥劑的培養(yǎng)基為空白對(duì)照，重復(fù)3次。

從實(shí)驗(yàn)室取出保存的番茄灰霉菌，活化后，在培養(yǎng)好的平板邊緣用無菌打孔器打取直徑為5mm的菌餅，分別移到帶藥和對(duì)照平板上，在20℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)3d后，運(yùn)用十字交叉法測量菌落直徑。計(jì)算出菌落直徑的平均值，將菌絲生長抑制率換算成y，藥劑濃度換算成x，求得線性回歸方程y=kx＋b，求出各菌株的抑制中濃度（EC50）［8］。菌絲生長抑制率公式為：

生長抑制率（%）=（對(duì)照菌落凈直徑（mm）- 處理菌落凈直徑（mm）/對(duì)照菌落凈直徑（mm）×100%。

3 結(jié)果與分析

3.1 6種藥劑劑對(duì)番茄灰霉菌的相對(duì)抑菌率

據(jù)表1可知，在一定范圍內(nèi)，6種藥劑隨濃度的增加，相對(duì)抑菌率增大，濃度越大，抑菌效果越明顯。

3.2 6種藥劑對(duì)番茄灰霉菌的EC50比較值

6種藥劑對(duì)番茄灰霉病的室內(nèi)毒力測定表明（表2），百菌清、撲海因、純托津、多菌靈、腐霉利、腐霉 .福美雙對(duì)番茄灰霉病菌的質(zhì)量濃度EC50分別為9.944、0.632 3、1.402 1、0.466 7、5.646 1和0.286 9μg/mL。其中，腐霉 .福美雙的EC50最小，說明對(duì)番茄灰霉菌的毒力最大，而多菌靈的EC50最大，說明對(duì)番茄灰霉菌的毒力最小。

4 結(jié)語

室內(nèi)毒力測定實(shí)驗(yàn)表明，在防治番茄灰霉病時(shí)首選腐霉·福美雙，其次是百菌清、樸海因。在選擇藥劑時(shí)，要交替使用，可以提高防效。而多菌靈的毒力最差，可能是長期單一使用多菌靈，使灰霉菌對(duì)此藥劑產(chǎn)生了抗藥性，因而多菌靈不再適合單獨(dú)使用。因此，采取不同化學(xué)藥劑配合使用，例如多菌靈與福美雙混合，對(duì)防止草莓灰霉菌抗藥性產(chǎn)生有明顯作用［9］，同時(shí)，研究新型低毒、高效的藥劑，配合不同防治措施，綜合治理番茄灰霉菌的抗藥性產(chǎn)生，提高番茄品質(zhì)與產(chǎn)量。

表1 6種不同藥劑對(duì)番茄灰霉病菌的相對(duì)抑制率

表2 6種供試藥劑對(duì)番茄灰霉病菌的毒力回歸方程及EC50值

［1］阿格里斯 .植物病理學(xué)［M］.許崇堯，譯.5版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2009.

［2］陳宇飛，文景芝，李立軍 .葡萄灰霉病研究進(jìn)展［J］.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，37（5）：693～699.

［3］楊升炯，張曉鋼 .番茄灰霉病發(fā)生規(guī)律及防治技術(shù)研究［J］.西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，1996，5（2）：66～70.

［4］劉 波 .對(duì)多菌靈、速克靈具多重抗性的灰葡萄孢菌株性質(zhì)的研究［J］.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1994，16（3）：50～54.

［5］張從宇，黃劍鵬，王榮華 .番茄灰霉病菌對(duì)速克靈的抗性檢測［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2004，32（2）：310～311.

［6］劉 波，葉鐘音，劉經(jīng)芬 .速克靈抗灰霉病菌菌株性質(zhì)的研究［J］.植物保護(hù)學(xué)報(bào)，1992，19（4）：297～301.

［7］農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所.NY/T 1156.2-2006.農(nóng)藥室內(nèi)生物測定試驗(yàn)準(zhǔn)則：抑制病原真菌菌絲生長試驗(yàn)——平皿法（農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)）［S］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2006.

［8］孫廣宇，宗兆鋒 .植物病理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2002：142～143.

［9］楊 謙 .植物病原菌抗藥性分子生物學(xué)（第二版）［M］.北京：科學(xué)出版社，2012.