宋志勇

(河北省玉田縣中醫(yī)醫(yī)院制劑科，河北 玉田 064100)

地黃和胃口服液由黃芪、熟地黃、玄參、沙參、葛根等13味中藥制成，具有益氣滋陰、清熱和胃的作用。臨床上主要用于陰虛燥熱、濕濁內(nèi)生之口干、煩渴多飲、納差、脘腹不適、周身乏力、小便頻數(shù)、量多及大便干結(jié)等糖尿病并發(fā)癥。根據(jù)地黃和胃口服液處方及制法的特點(diǎn)，研究參考2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》［1］葛根中葛根素含量測(cè)定方法及有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道［2］，采用高效液相色譜法測(cè)定地黃和胃口服液中葛根素的含量，方法簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，結(jié)果如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 SpECTRA SYSTEM P1000高效液相色譜泵;Spectra SERIES UV100型紫外分光檢測(cè)器;N2000色譜工作站。

1.2 藥材與試劑 葛根素對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)110752－200912);地黃和胃口服液(河北省玉田縣中醫(yī)醫(yī)院生產(chǎn)，冀藥制字Z20110090，批號(hào)20130809);試驗(yàn)中所用化學(xué)試劑為分析純和色譜純。

2 方法及結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:大連 ODS柱(5 μm，200 mm×4.6 mm)，柱效按葛根素峰計(jì)算，理論板數(shù)不得低于4 000。流動(dòng)相:甲醇－水(25∶75)。測(cè)定波長(zhǎng):250 nm。柱溫為室溫。

2.2 對(duì)照品溶液制備及測(cè)定 精密稱取葛根素對(duì)照品16.87 mg，置50 mL容量瓶?jī)?nèi)，加25%甲醇使溶解，并加25%甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取10 mL，置50 mL量瓶?jī)?nèi)，加25%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得(每mL含葛根素67.48 μg)。取10 μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。葛根素對(duì)照品色譜圖見圖1。

圖1 葛根素對(duì)照品色譜圖

2.3 供試品溶液制備及測(cè)定 精密量取地黃和胃口服液2 mL，置100 mL量瓶中，用25%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液10 μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。地黃和胃口服液供試品色譜圖見圖2。

圖2 地黃和胃口服液供試品色譜圖

2.4 陰性對(duì)照品溶液干擾情況 按地黃和胃口服液的制法制取缺葛根陰性對(duì)照品，按2.3項(xiàng)下制備方法制成葛根陰性對(duì)照溶液。取10 μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。通過色譜圖可以看出，陰性圖譜中在與葛根素對(duì)照品圖譜相應(yīng)的位置上無色譜峰，陰性無干擾。地黃和胃口服液葛根陰性對(duì)照品色譜圖見圖3。

圖3 地黃和胃口服液葛根陰性對(duì)照品色譜圖

2.5 線性關(guān)系考察 精密稱取葛根素對(duì)照品16.87 mg，置50 mL容量瓶?jī)?nèi)，加25%甲醇使溶解，并加25%甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為儲(chǔ)備液。分別精密吸取此儲(chǔ)備液 1、2、3、5、10、15 mL，置50 mL量瓶?jī)?nèi)，加25%甲醇稀釋至刻度，得葛根素的濃度分別為:6.748、13.496、20.244、33.740、67.480、101.220 μg/mL;分別精密吸取上述溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，以濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸，方程為 Y=357 693X+340 132，r=0.999 9，由此可知，葛根素在6.748～101.220 μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。見表1。

表1 線性關(guān)系考察結(jié)果

2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定葛根素峰面積，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。結(jié)果顯示，對(duì)照品溶液峰面積RSD=0.4%，測(cè)定結(jié)果表明儀器精密度良好。見表2。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.7 對(duì)照品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 將2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液于5 ℃左右存放24 h，分別于 1、2、3、4、6、8、12、24 h各進(jìn)樣1次，考察樣品24 h內(nèi)的穩(wěn)定性。結(jié)果顯示，對(duì)照品葛根素RSD=0.9%，表明對(duì)照品溶液24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。結(jié)果見表3。

表3 對(duì)照品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 對(duì)2.3項(xiàng)下供試品溶液，重復(fù)試驗(yàn)6次，得葛根素平均含量2.19 mg/mL，RSD=1.3%，＜2%。說明方法重現(xiàn)性良好。見表4。

表4 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.9 穩(wěn)定性考察 對(duì)2.3項(xiàng)下供試品溶液分別間隔一定時(shí)間測(cè)定1次，共考察12 h。結(jié)果顯示，供試品溶液至少在12 h內(nèi)穩(wěn)定。見表5。

表5 穩(wěn)定性考察結(jié)果

2.10 回收率試驗(yàn) 精密量取已知含量(含葛根素2.19 mg/mL)的樣品，精密加入一定量的葛根素對(duì)照品，按2.5項(xiàng)下樣品所述方法測(cè)定，按下式計(jì)算回收率，回收率=［(測(cè)出葛根素的量－樣品中含葛根素的量)/添加葛根素的量］×100%。結(jié)果顯示，平均回收率100.23%，RSD=0.5%(n=9)。說明方法簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確。結(jié)果見表6。

表6 葛根素回收率試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

本試驗(yàn)參考相關(guān)文獻(xiàn)［3－4］，比較了甲醇－水，乙腈－水，等各種流動(dòng)相及不同比例，結(jié)果發(fā)現(xiàn)甲醇－水(25∶75)作為流動(dòng)相，葛根素與其他雜質(zhì)峰之間能得到較好的分離，由樣品色譜圖可以看出，在本色譜條件下，其他組分對(duì)葛根素?zé)o干擾，可以做為地黃和胃口服液中葛根素的含量測(cè)定方法，用以控制地黃和胃口服液的質(zhì)量。

［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:2010年版［S］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:312.

［2］ 黃櫻華，黃月純，王祝彬，等.葛根骨康寧顆粒中的葛根素的含量測(cè)定研究［J］.中國(guó)藥師，2010，15(2):186－188.

［3］ 王宛，王建明.HPLC法測(cè)定頸通茶中葛根素和芍藥苷的含量［J］.中國(guó)中醫(yī)藥科技，2010，17(6):529－530.

［4］ 楊芳.RP－HPLC測(cè)定益腦復(fù)健膠囊中葛根素的含量［J］.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2009，6(20):43－44.