沈潔

黃芪為豆科植物膜莢黃芪Bge和蒙古黃芪Hsiao的干燥根，對機體免疫系統(tǒng)影響廣泛，免疫活性促進作用明顯，并促體液免疫，使單核巨噬細胞所具有的吞噬作用增強，對T、B淋巴細胞吞噬作用有刺激作用，并對自然殺傷細胞相關(guān)功能加以促進，使體內(nèi)組織細胞的存活延工，黃芪多糖F 8可使腫瘤患者和正常人淋巴細胞免疫功能提高，T抑制細胞功能降低，進而將TS細胞抑制免疫反應(yīng)的作用解除[1-2]。黃芪以多糖、黃酮、皂苷為主要成分，對其行薄層鑒別，并探討鑒別改進方法，對其臨床應(yīng)用有推動意義。本研究對探討黃芪薄層鑒別方法的改進措施，現(xiàn)總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 材料 選用黃芪藥材、黃芪甲苷對照品作材料，各50份，薄層色譜硅膠G板，分析純作化學試劑。

1.2 方法

1.2.1 黃芪甲苷對照品 （1）藥典方法：在20m L甲醇中加入黃芪粉末3 g，加熱回流1 h，完成濾過處理，將濾液在中性氧化鋁柱中加入，用100m L 40%甲醇完成洗脫處理，對洗脫液進行收集，蒸干，取水30m L在殘渣中加入，促使其達到溶解狀態(tài)，用正丁醇振搖提取2次，20m L/次，與正丁醇液合并，用水洗滌2次，20m L/次，將水液棄去，蒸干正丁醇液，取甲醇0.5m L加入殘渣促其溶解，充當供試品溶液。對照組為黃芪甲苷。運用照薄層色譜法完成相關(guān)試驗，將上述2種溶液各吸收2μL，于同一硅膠G薄層板上放置，展開劑為三氯甲烷-甲醇-水的下層，行展開處理后，完成取出處理，并晾干，取10%硫酸乙醇溶液噴灑，加熱至斑點清晰顯色。（2）新擬方法：取3 g黃芪粉末，加40m L水飽和正丁醇，完成加熱及回流1 h操作，行濾過處理，用氨試液將濾液洗滌2次，20m L/次，與氨試液合并，備用。用水將正丁醇洗滌2次，20m L/次，將水液棄去，蒸干正丁醇，取甲醇0.5m L在殘渣中加入，促其溶解，充作供品溶液。（3）對比2種方法：分析照薄層色譜法試驗特點，對新擬方法制備和按藥典方法制備的對照品溶液和供試品溶液各吸取2μL，于同一硅膠G薄層板上放置，展開，完成顯色處理。

1.2.2 黃芪藥材 （1）藥典方法：取2 g黃芪粉末，在30m L乙醇中加入，加熱回流30m in，蒸干濾液，取0.3%氫氧化鈉溶液15m L在殘渣中加入促使溶解，完成濾過處理，用稀鹽酸對濾液進行調(diào)節(jié)，使pH值達5～6，振搖提取，對乙酸乙酯液分取，濾液蒸干。取乙酸乙酯1m L對殘渣溶解，發(fā)揮供試品溶液作用。取黃芪對照藥格，采用相同的方法做成對照藥材溶液。應(yīng)用照譜層色普法開展相關(guān)試驗，上述2種溶液各吸取10μL，于同一硅膠G薄層板上放置，展開，晾干，檢視。（2）新擬方法：取氨試液，調(diào)節(jié)pH至5～6，振搖提取，蒸干，取乙醇乙酯1m L加入殘渣溶解，作供試品溶液。（3）方法對比：相較照薄層色譜法試驗，對2種方法所獲試液可吸取10μL，于同一硅膠G薄層板上放置，展開，顯色。

2 結(jié)果

采用新擬薄層方法對黃芪甲苷進行鑒別，鑒別有效率為98%，應(yīng)用藥典方法提取供試品溶液最為簡便，薄層分離有效率為96%。居較高水平，所獲取的黃芪甲苷斑點較為清晰和明顯。

3 討論

黃芪對T細胞功能、淋巴細胞增殖有較大影響，研究顯示，黃芪對免疫功能有促進作用，且從黃芪中提取的成分，經(jīng)篩選，部分促進免疫作用明顯，其中作用最強的為F 3，應(yīng)用后機體可完全免疫，而取白芥素-2、干擾素等應(yīng)用，僅部分免疫恢復(fù)，F(xiàn) 2免疫抑制機能較強，可在腎、心移植中作用免疫抑制劑應(yīng)用，以對排斥反應(yīng)進行對抗[3-4]。黃芪對正常機體抗體生長促進作用明顯，研究顯示，取黃芪100%水煎劑應(yīng)用，可使免疫早期的抗原與細胞結(jié)合，包括T淋巴細胞和抗體分泌細胞，自然殺傷細胞及B淋巴細胞明顯增多，故對鑒別黃芪有較高的要求，以為臨床用藥提供準確的參考依據(jù)[5]。

鑒別黃芪，從1990年版至后完善的2005年版，《中國藥典》均對薄層色譜鑒別方法有所收集，以黃芪甲苷作對照品，黃芪薄層鑒別方法無明顯差異，在含黃芪的中成藥中，多引用《中國藥典》的質(zhì)量標準，在藥品檢驗中，依據(jù)藥典方漢對黃芪和黃芪成分的中成藥行多次檢驗，藥點收截的鑒別黃芪薄層色譜的方法，提出供試品溶液的措施較繁瑣，特別是柱層析分離時比較浪費時間。依據(jù)黃芪化學成分，查找相關(guān)文獻，反復(fù)試驗，對黃芪薄層對供試品溶液進行鑒別的方法進行模索，相較藥典方法，操作較為簡單，黃芪甲苷有明顯斑點，具理想的分離效果[6]。

黃芪以皂苷、多糖、黃酮為主要成分。黃酮和皂苷均于正丁醇中溶解，故可直接用正丁醇提取，黃酮類成分用氨試液洗滌去除，多糖類成分用水洗滌移除，黃芪總皂苷粗口即可抽出，用用薄層色譜法完成下一步分離操作，供試品色譜中，可明顯顯現(xiàn)黃芪甲苷斑點[7-8]。

2005年版《中國藥典》黃芪項下，黃芪對照藥材實施薄層鑒別的措施有增加，實際為對黃芪中含有黃酮類成分的鑒別，用新擬方法對供試品溶液進行提取，使操作過程簡化，方漢較簡單，可獲得可靠的檢測結(jié)果。

綜上，黃芪薄層色譜鑒別采用新擬方法，相較藥典，提取供試品溶液快速、簡便，可獲得可靠、準確的檢驗結(jié)果，具較高的應(yīng)用價值。

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