劉繼永，趙卉，王玉方，周長霞，張亞玉※，劉敏

(1．中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所，長春 130112； 2．輝南縣喜霞林下中藥材種植專業(yè)合作社，吉林 輝南 135100；3．吉林省標(biāo)準(zhǔn)研究院，長春 130022)

植物天麻(GastrodiaelataBlume)屬蘭科天麻屬多年生寄生植物，其寄主為蜜環(huán)菌(Armillariamellea(Vahl ex Fr)Quel)，以蜜環(huán)菌的菌絲或菌絲的分泌物為營養(yǎng)來源，借以生長發(fā)育，生于林下濕潤肥沃的土壤上。天麻為蘭科植物天麻的干燥塊莖，是我國名貴的中藥材之一，又名赤箭、赤箭芝、獨搖芝、定風(fēng)草、離母、合離草。據(jù)本草綱目記載，天麻辛、溫、無毒，主治諸風(fēng)濕痹、四肢拘攣、癱瘓不遂、眩暈頭痛等癥[1]。

“烏美”天麻是吉林省輝南縣“喜霞林下中藥材種植專業(yè)協(xié)會”通過野生“長白山烏桿天麻”提純復(fù)壯選育出的天麻品種，2010年，“烏美”天麻被吉林省農(nóng)委、省農(nóng)作物品種審定委員會審定通過，成為吉林省目前惟一審定通過的天麻品種。

為了系統(tǒng)評價“烏美”天麻質(zhì)量，本試驗對“烏美”天麻和野生天麻根莖、地上莖和花序中氨基酸和天麻素含量進(jìn)行對比分析。

1 材料

1.1 材料

“烏美”天麻采自吉林省輝南縣“喜霞林下中藥材種植專業(yè)協(xié)會”的林下種植基地，栽培基質(zhì)為火山灰。野生天麻采自吉林省輝南縣(東經(jīng)126°45′，北緯42°32′，海拔734m)，生長基質(zhì)為林下腐殖土。

1.2 儀器與試劑

全自動氨基酸分析儀(L-8900，日本日立公司)，超高效液相色譜儀(ACQUITY UPLC H-Class，Waters公司)，電熱鼓風(fēng)干燥箱(DHG-9240A，上海一恒科技有限公司)，多樣品平行蒸發(fā)儀(Syncore101，Buchi公司)，回流提取器(500mL，上海本昂儀器公司)。

天麻素標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品檢定所)，乙腈、甲酸(色譜純，F(xiàn)isher公司)，超純水(自制)，無水乙醇(分析純，北京化工廠)，濃鹽酸、苯酚、檸檬酸鈉、氫氧化鈉、氯化鈉(優(yōu)級純，北京化工廠)，氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(Type H，日本和光純藥工業(yè)株式會社)。

2 方法

2.1 天麻素測定

2.1.1樣品溶液制備精密稱取“烏美”天麻和野生天麻根莖、莖和花序的干燥粉末(表1)，用50%乙醇于85℃水浴回流提取4h，放冷，稱重，補足減失的乙醇，過濾，減壓濃縮，用乙腈∶水(3∶97，v/v)溶液定溶于25mL容量瓶，待測。

表1不同部位天麻素含量測定供試樣品質(zhì)量

Table 1 The samples quality for test gastrodine of different parts of Gastrodia (g)

2.1.2標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備精密稱取天麻素標(biāo)準(zhǔn)品，加乙腈配制成濃度為0.05mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.1.3色譜條件色譜柱：ACQUITY UPLC HSS T(2.1mm×50mm，31.8μm)；柱溫35℃；流速0.5mL/min；流動相A：0.05%甲酸溶液，0min～3min，100% A；檢測器PDA；檢測波長220nm。

2.1.4線性關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)品溶液按2.5μL、5.0μL、7.5μL、10μL進(jìn)樣，在上述色譜條件下測定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)、含量(mg/mL)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出天麻素回歸方程為Y=8.37×106x，R2=100。

2.1.5精密度標(biāo)準(zhǔn)品溶液重復(fù)進(jìn)樣5次，每次5.0μL，天麻素面積RSD值為0.3%。說明該方法重復(fù)性良好。

2.2 氨基酸測定

供試材料中17種氨基酸含量依照“GB/T5009.124-2003”有關(guān)方法進(jìn)行測定。用四分法縮減分取供試樣品各25g，粉碎并過0.25mm孔徑標(biāo)準(zhǔn)篩。精密稱取粉碎后樣品(表2)，于50mL水解管中，加入15mL酸解劑，在氮氣保護(hù)狀態(tài)下封管。將水解管放在110℃恒溫干燥箱中水解22h。待冷卻到室溫后用超純水定容至50mL，用移液管吸取1.0mL濾液置于真空干燥箱中，70℃蒸干，殘留物用同體積超純水重復(fù)清洗蒸干2次，加入1.0mL上機緩沖液稀釋，搖勻后過微孔濾膜待測。

精密稱取“烏美”天麻和野生天麻根莖、莖和花序的干燥粉末(表2)，分別用15mL 6.0mol/L的鹽酸溶液于110℃水解22h，放冷，定容，待測。

表2測定不同部位天麻氨基酸含量供試樣品質(zhì)量

Table 2 The samples quality for test AA of different parts of G.elata (g)

3 結(jié)果與分析

3.1 2種天麻不同部位天麻素含量分析

天麻素標(biāo)準(zhǔn)品UPLC色譜圖(圖1)。

圖1 天麻素標(biāo)準(zhǔn)品UPLC色譜圖

按“2.1.3”項下色譜條件進(jìn)樣測定(圖2～圖7)，計算，野生天麻和“烏美”天麻3個部位天麻素含量見表3。

表3野生天麻和“烏美”天麻3個部位天麻素含量

Table 3 Gastrodin contents in three parts of Wild G.elata and Wu-mei G.elata (g/kg)

圖2 圖3

圖4

圖5 圖6

圖7

3.2 2種天麻不同部位氨基酸含量分析(表4)

表4野生天麻和“烏美”天麻3個部位氨基酸含量

Table 4 AA contents in three parts of Wild G.elata and Wumei G.elata (g/100g)

表3、表4分別給出了野生天麻和“烏美”天麻根莖、莖和花序中天麻素和氨基酸含量。2種天麻中，天麻素及17種氨基酸和總氨基酸含量大小順序為根莖<莖<花序，這與植物源-庫關(guān)系理論完全相符合。“烏美”天麻花序中天麻素含量是根莖的20.95倍、是莖的2.77倍；野生天麻根

莖中天麻素含量是根莖的13.62倍、是莖的2.86倍?！盀趺馈碧炻榛ㄐ蛑刑炻樗睾渴且吧炻榈?.32倍；野生天麻根莖中除Glu、Ile、Leu、Phe略高于“烏美”天麻外，其它氨基酸和總氨基酸含量均低于“烏美”天麻。說明“烏美”天麻比野生天麻具有較好的綜合品質(zhì)。

4 討論

實驗結(jié)果表明，從2種天麻中天麻素及氨基酸含量在不同部位中量的分配來看，“烏美”天麻各項指標(biāo)均略高于野生天麻，其原因可能是由于遺傳背景和生長環(huán)境不同所造成。

4.1 栽培基質(zhì)

“烏美”天麻是以火山灰為栽培基質(zhì)，野生天麻生長基質(zhì)大多為林下腐殖土，火山灰的透氣性略優(yōu)于腐殖土，優(yōu)良的栽培基質(zhì)有利于天麻生長。

4.2 菌材

“烏美”天麻是以人工培育的蜜環(huán)菌菌棒或樹葉為菌材，其營養(yǎng)成分豐富[2]。人工培養(yǎng)的蜜環(huán)菌菌索中蛋白質(zhì)、脂肪、多糖含量均高于野生菌索；氨基酸組成二者相似，但人工培養(yǎng)的菌索氨基酸總量高于野生菌索。

[1]徐錦堂,蘭進(jìn).天麻的營養(yǎng)繁殖莖及其抑菌功能[J].植物學(xué)報,2001,43(4):348-353.

[2]孫小衛(wèi),沈業(yè)壽.野生和人工培養(yǎng)的蜜環(huán)菌菌索營養(yǎng)成分比較[J].生物學(xué)雜志,2004,(2)：23-25.