趙雁鳴等

摘 要：以非洲菊品種‘F53的莖尖作為外植體進(jìn)行離體培養(yǎng)技術(shù)研究，為建立以莖尖為外植體的非洲菊高頻、高效、穩(wěn)定的工廠化育苗技術(shù)體系奠定基礎(chǔ)。結(jié)果表明，適宜于不定芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)基為MS+6-BA2mg/L+NAA1mg/L+KT0.5mg/L+蔗糖25g/L；增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L+蔗糖20g/L；最適生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.1mg/L+蔗糖15g/L。

關(guān)鍵詞：非洲菊；莖尖；離體培養(yǎng)

中圖分類(lèi)號(hào) S68 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2015）05-12-04

非洲菊（Gerbera jamesonii Bolus），別名扶郎花、大丁草、燈盞花等，屬于菊科宿根多年生草本花卉，全株具細(xì)毛，葉基部簇生，具長(zhǎng)柄，柄長(zhǎng)15～20cm，植株挺拔，花艷麗、秀美，花大梗長(zhǎng)，頭狀花序單生，花色豐富，可盆栽室內(nèi)擺放，也可點(diǎn)綴庭院、草坪邊緣、花壇等，是當(dāng)今世界重要的切花種類(lèi)之一[1-2]。非洲菊品種非常豐富，有單瓣和重瓣品種，有露地切花和溫室栽培四季開(kāi)花品種，以及供盆栽、花壇栽種的品種等[3]。

非洲菊為異花授粉植物，自交不孕，有性繁殖易產(chǎn)生分離，不能保持原品種性狀的穩(wěn)定性，而傳統(tǒng)的無(wú)性分株繁殖方式，其繁殖系數(shù)較低，而且分株繁殖容易使病毒逐代積累，從而造成種性退化[4]。因此，組織培養(yǎng)技術(shù)是非洲菊商品化生產(chǎn)的主要繁殖方式，既可在短期內(nèi)大量生產(chǎn)優(yōu)良種苗，也可用于生產(chǎn)脫毒苗，防止種質(zhì)退化[5]。目前，非洲菊組培快繁技術(shù)國(guó)內(nèi)已有不少報(bào)道，大多采用的外植體是花托、花絲、花蕾等花器官以及葉柄、葉片等，而以莖尖為外植體的研究報(bào)道則較少。本試驗(yàn)以非洲菊品種‘F53幼嫩的莖尖為外植體，針對(duì)其進(jìn)行不定芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)和生根培養(yǎng)研究，以期為該品種的工廠化育苗建立離體培養(yǎng)技術(shù)體系，也為其他非洲菊品種的組織培養(yǎng)技術(shù)體系的建立提供參考。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料及預(yù)處理 試驗(yàn)材料為昆明市美蘭花卉公司提供的非洲菊‘F53品種花絲組培瓶苗。將非洲菊品種‘F53組培苗放入恒溫箱中進(jìn)行預(yù)處理。首先在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)溫度為32℃下放置2d，之后再將溫度調(diào)至34℃，放置2d，再將溫度調(diào)至36℃，放置2d，最后將溫度調(diào)至38℃，放置2d。將預(yù)處理后的組培苗取出，在超凈工作臺(tái)上切取莖尖，長(zhǎng)度為0.1～0.3cm，放于無(wú)菌水中備用。

1.2 試驗(yàn)方法 試驗(yàn)中的每個(gè)處理接種10瓶，每瓶2～3個(gè)材料（莖尖或不定芽苗），同一處理重復(fù)3次。不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)在外植體接入后第5d開(kāi)始觀察，記錄啟動(dòng)材料數(shù)，以不定芽萌動(dòng)生長(zhǎng)至肉眼可見(jiàn)即認(rèn)為材料已啟動(dòng)，以高度大于0.2cm的不定芽為有效芽。增殖培養(yǎng)從叢生芽增殖倍數(shù)、增殖芽數(shù)率和增殖芽平均增殖芽數(shù)3個(gè)方面來(lái)考察，第5天開(kāi)始觀察，20d后記錄增殖的芽數(shù)和大于0.5cm的芽苗數(shù)。生根效果以生根率來(lái)考察，20d后記錄生根苗數(shù)。

1.2.1 不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng) 用MS作為基本培養(yǎng)基，在基本培養(yǎng)基中加入不同濃度的細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素（KT、6-BA、NAA），6-BA的質(zhì)量濃度設(shè)為2mg/L和4mg/L，NAA的質(zhì)量濃度設(shè)為0.5mg/L和1mg/L，KT的質(zhì)量濃度設(shè)為0.5mg/L和1mg/L，采用3因素2水平的正交設(shè)計(jì)（表1），蔗糖均為25g/L，卡拉膠為4g/L，pH值為5.8～6.2。接種后在光照強(qiáng)度為1 500～2 000lx，光暗時(shí)間為16h/8h，溫度為（25±2）℃的環(huán)境下培養(yǎng)。

1.2.3 生根培養(yǎng) 將增殖后生長(zhǎng)健壯的不定芽苗接種于生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，20d后統(tǒng)計(jì)組培苗的生根情況。生根培養(yǎng)采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)（表3），采用MS和1/2MS作為基本培養(yǎng)基，分別加入激素2，4-D、6-BA、NAA、IBA，以1/2MS基本培養(yǎng)基作為對(duì)照，蔗糖均為15g/L，卡拉膠為4g/L，pH值為5.8～6.2。接種后在光照強(qiáng)度為1 500～2 000lx，光暗時(shí)間為16h/8h，溫度為（25±2）℃的環(huán)境下培養(yǎng)。

2.4 煉苗與移栽 當(dāng)生根后的組培苗高度達(dá)到3～5cm，根長(zhǎng)達(dá)到2.0cm時(shí)，將組培瓶口封口膜打開(kāi)，使其逐漸適應(yīng)外界環(huán)境。3～5d后完全揭去封口膜，將瓶苗移到靠近窗戶的試驗(yàn)臺(tái)上，每天接受日照1.5h左右，后期逐漸延長(zhǎng)日照時(shí)間。瓶苗生長(zhǎng)至高度為10～15cm，且生長(zhǎng)出5～6片葉時(shí)，移栽到腐殖土∶蛭石∶珍珠巖=2∶1∶1的基質(zhì)中，成活率可達(dá)90%以上。

3 結(jié)論與討論

非洲菊屬于世界5大切花之一，品種眾多，且商品化生產(chǎn)已經(jīng)非常普及，在當(dāng)前的非洲菊組織培養(yǎng)快繁中，較多采用花絲、花托、花蕾以及花瓣等花器官作為外植體[1-2，6-8]。雖然采用的花器官屬于較為幼態(tài)的組織，但植物體生殖器官的成熟效應(yīng)比營(yíng)養(yǎng)器官更為明顯，經(jīng)過(guò)多世代繼代增殖培養(yǎng)后，容易引起組培苗種質(zhì)的退化。因此，在非洲菊的組培快繁中，也有探索建立以葉等營(yíng)養(yǎng)器官為外植體的離體培養(yǎng)技術(shù)研究[4，9]。本研究首先將非洲菊無(wú)菌組培苗進(jìn)行逐漸升溫培養(yǎng)預(yù)處理，其目的主要是通過(guò)熱處理抑制內(nèi)生菌的生長(zhǎng)，而后再將幼嫩的莖尖部分切下進(jìn)行不定芽的誘導(dǎo)、增殖培養(yǎng)和生根培養(yǎng)，期望為非洲菊工廠化育苗建立以營(yíng)養(yǎng)器官為外植體的新途徑。該方法取材更為容易，不受季節(jié)的限制與影響，而且獲得的外植體即為無(wú)菌材料，不用進(jìn)行消毒處理，程序更為簡(jiǎn)便；同時(shí)，以莖尖為外植體，在一定程度上可以發(fā)揮組培苗脫毒的作用效果。

在離體培養(yǎng)中，外源激素的種類(lèi)、濃度及其配比發(fā)揮著決定性作用，只有外源激素配比適宜的培養(yǎng)基才能誘導(dǎo)細(xì)胞分裂的啟動(dòng)、愈傷組織的形成、生長(zhǎng)、分化及根芽器官的發(fā)生[2]。王春彥和羅鳳霞[9]以葉為外植體的非洲菊組織培養(yǎng)研究中發(fā)現(xiàn)，BA和KT二者濃度上的變化對(duì)不定芽再生影響不大；張素勤等[10]以非洲菊葉為外植體的研究結(jié)果表明，6-BA對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)率高于KT；張希太[4]的研究結(jié)果表明，適宜于非洲菊莖尖外植體愈傷組織不定芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)基為MS+KT10mg/L+IAA0.5mg/L。本研究中，將6-BA與KT相結(jié)合，篩選出適合于非洲菊莖類(lèi)外植體的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA2mg/L+NAA1mg/L+KT0.5mg/L+蔗糖25g/L，是否能夠僅采用6-BA或KT而取得同樣的不定芽誘導(dǎo)效果，有待于進(jìn)一步研究。在試驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)，1/2MS培養(yǎng)基更有利于增殖后不定芽的生根培養(yǎng)，且非洲菊的生根培養(yǎng)需要糖的濃度較低，低糖更容易生根。對(duì)于激素而言，低濃度的IBA和NAA有利于非洲菊的生根，而且根系生長(zhǎng)健壯。

總之，通過(guò)本研究的開(kāi)展成功建立了以幼嫩的莖尖作為外植體的非洲菊離體培養(yǎng)再生技術(shù)體系，不定芽誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基配方為MS+6-BA2mg/L+NAA1mg/L+KT0.5mg/L+蔗糖25g/L；最佳增殖培養(yǎng)基配方為MS+

6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L+蔗糖20g/L；最佳生根培養(yǎng)基配方為1/2MS+IBA0.1mg/L+蔗糖15g/L。

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