吳中華

(安徽省生物研究所， 合肥 230088)

齊多拉米雙夫定片微生物檢查方法研究

吳中華

(安徽省生物研究所， 合肥 230088)

建立齊多拉米雙夫定片微生物檢查方法。方法取齊多拉米雙夫定片，按《中國(guó)藥典》2010版二部附錄所載的“微生物限度檢查法”項(xiàng)下方法試驗(yàn)，結(jié)果表明：采用薄膜過濾法測(cè)定細(xì)菌數(shù)，平皿法測(cè)定霉菌和酵母菌數(shù)，薄膜過濾法檢查控制菌大腸埃希菌。

齊多拉米雙夫定片；微生物限度檢查法

齊多拉米雙夫定片為復(fù)方制劑，主要成分為齊多夫定和拉米夫定，該制劑有協(xié)同抑菌作用，抗菌作用較單一成分增強(qiáng)，是治療HIV感染較為理想藥物。因藥品的處方、劑型、生產(chǎn)工藝的不同，其微生物檢驗(yàn)方法也不盡相同，本試驗(yàn)按照《中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》[1]和《中國(guó)藥典》2010版二部附錄要求，通過加入大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉5種試驗(yàn)菌，建立該產(chǎn)品的微生物檢查方法。

1 試驗(yàn)材料

1.1 供試品

齊多拉米雙夫定片(安徽貝克生物制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)110501、110502、110503，規(guī)格：拉米夫定150 mg/片和齊多夫定300 mg/片)。

1.2 培養(yǎng)基

玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、膽鹽乳糖培養(yǎng)基、改良馬丁培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基均由北京三藥科技開發(fā)公司生產(chǎn)，稀釋劑為pH值7.0的氯化鈉-蛋白胨緩沖液；以上均參照產(chǎn)品說(shuō)明書和《中國(guó)藥典》2010年版配制。采用濕熱滅菌法[2]滅菌。

1.3 菌種

金黃色葡萄糖球菌(Staphylococcusaureus)[CMCC(B)26003] 、大腸埃希菌(Escherichiacoli)[CMCC(B)44102]、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)[CMCC(B)63501]、白色念珠菌(Candidaalbicans)[CMCC(F)98001]、黑曲霉(Aspergillusniger)[CMCC(F)98003]均來(lái)自中國(guó)食品藥品檢定院。

2 方法與結(jié)果

2.1 菌液制備[3]按《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄“微生物限度檢查法”項(xiàng)下制備，制成50～100cfu/mL的菌懸液。菌株培養(yǎng)物均為第3代培養(yǎng)物。

2.2 供試液制備 取供試品10 g，加稀釋液至100 mL，混勻，制成1∶10供試液，薄膜過濾法取1∶10供試液50 mL，離心3 min(500 r/min)，取上清液薄膜過濾。

2.3 回收率計(jì)算

試驗(yàn)組：取供試液，參照2.4和2.5方法計(jì)數(shù)。

菌液組：取各試驗(yàn)菌，與試驗(yàn)組相同操作(不加供試液)測(cè)定所加的試驗(yàn)菌數(shù)。

供試品對(duì)照組：取供試液，與試驗(yàn)組相同操作(不加試驗(yàn)菌)測(cè)定供試液本底菌數(shù)。

試驗(yàn)組菌落回收率(%)=(試驗(yàn)組平均菌落數(shù)-供試品對(duì)照組平均菌落數(shù))/菌液組平均菌落數(shù)×100%

2.4 細(xì)菌計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證試驗(yàn)

平皿法取1∶10供試液1 mL加入無(wú)菌平皿，培養(yǎng)基稀釋法取1∶10供試液1 mL分別等量分注[4]2個(gè)平皿和5個(gè)平皿，以上平皿分別加入大腸埃希菌、金黃色葡萄糖球菌 、枯草芽孢桿菌50～100 cfu，立即傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，各制備2個(gè)平行培養(yǎng)[3]計(jì)數(shù)；薄膜過濾法取離心上清液1 mL加入無(wú)菌薄膜過濾器(微孔濾膜直徑50 mm，孔徑不大于0.45 μm)中，加稀釋劑300 mL(50 mL/次)進(jìn)行沖洗過濾。在最后一次沖洗液中加入50～100 cfu上述試驗(yàn)菌，取出薄膜，正面朝上貼于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)，結(jié)果見表1。

表1 試驗(yàn)菌平均回收率

2.5 霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)驗(yàn)證試驗(yàn)

取1∶10供試液1 mL加入無(wú)菌平皿，分別加入白色念珠菌、黑曲霉50～100 cfu，立即傾注玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，各制備2個(gè)平行培養(yǎng)計(jì)數(shù)，結(jié)果見表1。

2.6 薄膜過濾法檢查控制菌大腸埃希菌

取離心上清液10 mL，參照2.4薄膜過濾，取出薄膜，加入100 mL膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，按控制菌大腸埃希菌檢查方法檢查[3]，結(jié)果見表2。

以上試驗(yàn)獨(dú)立平行3次。

表2 控制菌大腸埃希菌測(cè)試結(jié)果

表中“+”表示檢出控制菌；“-”表示未檢出控制菌。

3 討論

從表1可以看出：在細(xì)菌、霉菌和酵母菌數(shù)檢查方法試驗(yàn)中，平皿法對(duì)白色念珠菌和黑曲霉的回收率均高于70%[3]；薄膜過濾法對(duì)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的回收率高于70%[3]。從表2可以看出控制菌大腸埃希菌采用薄膜過濾法試驗(yàn)組和陽(yáng)性對(duì)照組檢出，陰性對(duì)照組未檢出，符合《中國(guó)藥典》要求。

試驗(yàn)結(jié)論：齊多拉米雙夫定片微生物限度檢查方法，細(xì)菌和控制菌大腸埃希菌可采用薄膜過濾法檢查，而霉菌和酵母菌則應(yīng)采用平皿法檢查。

[1]中國(guó)藥品生物制品檢定所，微生物限度檢查法[M] 《中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》，北京，中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010，356-358.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì)， 滅菌法[M]，中華人民共和國(guó)藥典(二部)，北京，中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010，附錄190.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì)， 微生物限度檢查法[M]，中華人民共和國(guó)藥典(二部)，北京，中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010，附錄 107-113.

[4]國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局藥品認(rèn)證中心， 微生物檢查[M]//質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室與物料系統(tǒng)，北京，中國(guó)醫(yī)藥科技出版社， 2011： 244.

Methodological study on microbial limit test of Zidovudine and Lamivudine tablets

WU Zhong-hua

(Biological Institute of Anhui Province， Hefei 230088， China)

According to the Chinese pharmacopieia(2010 Edition), an accurate method for microbial limit test of Zidovudine and Lamivudine tablets was established in this study. Membrane filtration and/or direct plate culture were taken for counting bacteria, mold and yeast usingE.colias the controls.

Zidovudine and Lamivudine tablets; microbial limit test

2015-01-14；

2015-02-16

吳中華，執(zhí)業(yè)藥師，主要從事藥品開發(fā)，E-mail:1291139562@qq.com。

R96

B

2095-1736(2015)05-0099-02

doi∶10.3969/j.issn.2095-1736.2015.05.099