唐 輝，蔡 躍，張 苗，唐乙媚，曾春雨，周 林

（1.中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所心血管內(nèi)科，重慶 400042； 2.重慶市心血管病研究所，重慶 400042； 3.重慶市雙橋區(qū)人民醫(yī)院心血管內(nèi)科，重慶 400900）

G蛋白偶聯(lián)受體激酶4變異體A142V與血壓晝夜節(jié)律的相關(guān)性*

唐 輝1，2，蔡 躍1，2，張 苗1，2，唐乙媚3，曾春雨1，2，周 林1，2

（1.中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所心血管內(nèi)科，重慶 400042； 2.重慶市心血管病研究所，重慶 400042； 3.重慶市雙橋區(qū)人民醫(yī)院心血管內(nèi)科，重慶 400900）

目的 觀察G蛋白偶聯(lián)受體激酶4（GRK4）變異體A142V與高血壓患者血壓晝夜節(jié)律變化的關(guān)系。方法 根據(jù)動態(tài)血壓晝夜節(jié)律變化，將110例高血壓患者分為杓型組48例和非杓型組62例，分析GRK4的SNPA位點變異體A142V在兩組中的分布。結(jié)果 杓型組與非杓型組GRK4變異體A142V分布存在顯著差異；杓型組以野生型GG分布為主，而非杓型組AG＋AA突變基因型分布顯著高于杓型組（P＜0.05）。結(jié)論 GRK4 A142V變異體與高血壓患者血壓晝夜節(jié)律變化有關(guān)，攜帶A142V變異體的患者夜間血壓更易升高。

G蛋白偶聯(lián)受體激酶4基因；高血壓；血壓節(jié)律

原發(fā)性高血壓是最常見的心血管疾病，其并發(fā)癥嚴重影響人類健康［1］。研究表明，原發(fā)性高血壓患者血壓的波動表現(xiàn)出晝夜節(jié)律性的特點［2］。根據(jù)夜間血壓較白晝血壓下降的幅度，可將高血壓分為兩類，幅度超10%的為杓型高血壓，幅度小于10%的為非杓型高血壓［2］。原發(fā)性高血壓患者血壓晝夜節(jié)律的異常往往與靶器官損害密切相關(guān)［3］。因此，監(jiān)測血壓的波動情況及探究其血壓波動的可能機制，對于高血壓的防治具有重要意義。在血壓調(diào)控的眾多因素中，G蛋白偶聯(lián)受體激酶4（GRK4）可通過磷酸化相應的G蛋白偶聯(lián)受體，改變相應受體的功能，使其腎臟的排鈉利尿及血管的舒張功能受損，從而引起血壓升高［4］。GRK4存在多個SNP位點，GRK4的SNPA位點A142V對于高血壓的發(fā)生及血壓的調(diào)節(jié)具有重要的作用［5］，但其是否與血壓晝夜節(jié)律有關(guān)，尚不清楚。因此，通過探討高血壓患者GRK4 SNP位點A142V的基因多態(tài)性與血壓晝夜節(jié)律變化的相關(guān)性，以分析其在高血壓發(fā)病中的作用，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年10月至2014年1月在第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院心血管內(nèi)科確診的高血壓患者110例，男女比例為1.2∶1（60／50），平均年齡62.4歲，均符合2005年《中國高血壓防治指南（修訂版）》的高血壓診斷標準。其中包括未用藥物治療前收縮壓（SBP）≥140 mmHg和／或舒張壓（DBP）≥90 mmHg者。排除繼發(fā)性高血壓，合并有嚴重糖尿病，合并有肝、腎功能不全，不能耐受檢查者。將110例高血壓患者分為構(gòu)型組48例和非構(gòu)型組62例。兩組患者的一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

所有患者測量心率、血壓、身高、體重等指標，并計算相應體重指數(shù)（BMI）＝體重（kg）／身高m2；同時抽取清晨空腹血，檢測其血脂（三酰甘油、膽固醇）、空腹血糖及肌酐等指標；詢問飲酒史、吸煙史，高血壓史及降壓藥服用情況。

動脈血壓監(jiān)測：采用無創(chuàng)性攜帶式動態(tài)血壓監(jiān)測儀（美高儀公司），將袖帶縛于研究對象左上臂，設(shè)定白晝（6：00～22：00）每30 min、夜間（22：00～次日6：00）每60 min自動充氣測量，有效測量次數(shù)不低于90%者即可入選。參數(shù)指標包括：24 h平均收縮壓（24 h SBP）和24 h平均舒張壓（24 h DBP）；白晝平均收縮壓（dSBP）和平均舒張壓（dDBP）；夜間平均收縮壓（nSBP）和平均舒張壓（nDBP）；收縮壓的晝夜變異率［BPF，等于（白晝平均值－夜間平均值）／白晝平均值］。按晝夜時間段，血壓晝夜節(jié)律曲線分為杓型和非杓型。杓型者血壓下降幅度（BPF）＞10%，非杓型BPF＜10%［2］。

基因變異體檢測：抽取外周血2 mL，提取基因組DNA。進行GRK4基因 A142V變異體檢測：采用目的片段多聚酶鏈反應（PCR）擴增引物序列，上游引物為5′－AAGGGTCAACTACACTCTAGGAAC－3’，下游引物為5′－TGGTTTGTACTGTATTAAGTTGGC－3’（上海生工生物工程技術(shù)服務有限公司）。95℃預變性3 min；94℃變性30 s，55℃退火35 s，72℃延伸40 s，72℃修復延伸5～8 min，35個循環(huán)。取PCR產(chǎn)物8 μL，采用1%瓊脂糖凝膠電泳，150 V，100 mA，20 min電泳觀察（見圖1）。PCR產(chǎn)物使用生工SK1141純化回收試劑盒，隨機抽樣在ABI3700型全自動測序儀測序核實基因型。采用SeqMan軟件進行相關(guān)序列分析。

1.3 統(tǒng)計學處理

2 結(jié)果

2.1 一般情況

結(jié)果見表1。非杓型組白晝24 h SBP和夜間nSBP均高于杓型組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；非杓型組白晝dSBP，dDBP，24 h DBP及夜間nDBP與杓型組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；兩組患者的年齡、性別、體重指數(shù)、高血壓史、血脂及肌酐水平等比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

表1 兩組患者一般資料比較

2.2 GRK4基因A142V變異體電泳圖及測序

GRK4基因A142V基因型分析PCR擴增產(chǎn)物片段大小為225 bp，基因型電泳圖見圖1，測序結(jié)果見圖2。GG型為野生型，通過片段中G→A堿基替換，因此產(chǎn)生2種突變基因型，即AG型（突變雜合子）和AA型（突變純合子）。

圖1 GRK4基因A142V變異體電泳結(jié)果

2.3 GRK4基因變異體142V組間分布

GRK4基因的第142位堿基目前發(fā)現(xiàn)3種基因型：GG為野生型，AG和AA為變異體。3種基因型在杓型組與非杓型組間的分布差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），提示GRK4基因變異體142V與血壓晝夜節(jié)律的變化密切相關(guān)。其中杓型組以GG基因型分布為主，AG型次之，AA型最低；而非杓型組分布以AA型為主。比較杓型組和非杓型組GG型和AG型分布以及GG型與AA型分布，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。比較AG基因型與AA基因型分布，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。非杓型高血壓組AA基因型及A等位基因頻率顯著高于杓型高血壓組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），結(jié)果見表2。

圖2 GRK4基因A142V變異體測序結(jié)果

表2 GRK4基因野生型及變異體A142V在兩組的分布情況

3 討論

GRK是一類絲氨酸 ／蘇氨酸激酶，共有7個亞型。其中，GRK4在腎臟及血管中表達豐富，作為一種激酶，可磷酸化相應的G蛋白偶聯(lián)受體，使其功能受損，促進血壓升高［6］。GRK4有多個變異體，包括R65L，A142V，A486V，V247I等，其中A142V與高血壓的發(fā)生最密切，預測發(fā)生高血壓的準確率高達94%［7］。GRK4基因定位于染色體4 p16.3，在第142位堿基，GG為野生型，通過鳥嘌呤（G）／腺嘌呤（A）的轉(zhuǎn)換，呈現(xiàn)變異體A142V的純合子（AA型）和雜合子（AG型），這種基因多態(tài)性的存在可能影響了GRK4基因的表達和生物學功能。

動態(tài)血壓監(jiān)測能較準確地反映血壓晝夜節(jié)律與心、腦、腎等靶器官損害程度的密切關(guān)系。人的血壓呈現(xiàn)晝夜節(jié)律性改變，夜間血壓較白晝血壓明顯偏低。持續(xù)的動脈血壓呈現(xiàn)高水平，不僅會引起相應的癥狀和體征，同時也會導致相應靶器官的損害和心血管系統(tǒng)結(jié)構(gòu)功能的重構(gòu)。在原發(fā)性高血壓患者中，非杓型約占20%～40%，將非杓型高血壓轉(zhuǎn)變?yōu)殍夹透哐獕嚎擅黠@降低其心腦血管的靶器官損害［8］。目前，血壓晝夜改變的機制尚未闡明，是否GRK4變異體A142V與高血壓患者血壓晝夜節(jié)律變化有關(guān)，尚不清楚。本研究發(fā)現(xiàn)，GRK4變異體A142V與高血壓患者血壓晝夜節(jié)律變化有關(guān)，非杓型組AG＋AA 2種基因型的分布顯著高于杓型組，這提示A等位基因與非杓型高血壓相關(guān)，提示AG和AA基因型的高血壓患者可能更容易發(fā)生靶器官的損害。

GRK4變異體A142V基因分布影響血壓晝夜節(jié)律變化的機制，可能涉及血漿中腎素及血管緊張素Ⅱ的水平變化。體液因素包括腎素 －血管緊張素 －醛固酮系統(tǒng)（RAAS）的激活，在血壓晝夜節(jié)律中發(fā)揮著重要作用［9］。在非杓型高血壓患者體內(nèi)，夜間腎素及血管緊張素Ⅱ水平顯著高于杓型高血壓患者，降低其夜間激素水平，可明顯改善血壓的晝夜節(jié)律。有研究證實，GRK4變異體A142V基因中，AA型人群血漿中腎素及血管緊張素Ⅱ的水平顯著高于GG型，特別是在睡眠狀態(tài)下，上述激素分泌增多，進而可促進夜間血壓水平顯著增高，從而造成血壓晝夜節(jié)律的消失［10］。

綜上所述，GRK4變異體A142V基因與高血壓患者晝夜血壓節(jié)律變化密切相關(guān)，其中A等位基因與高血壓患者夜間血壓的升高有關(guān)，攜帶AG和AA 2種基因型的高血壓患者可能更易造成其相應靶器官損害。通過研究上述兩者之間的關(guān)系可進一步了解高血壓的發(fā)病機制，為高血壓的時間治療學和基因治療學提供依據(jù)，有助于更好地防治高血壓及其引起的相關(guān)并發(fā)癥。

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Relationship between GRK4 Mutant A142V and Circadian Rhythm of Blood Pressure in Patients with Essential Hypertension

Tang Hui1，2，Cai Yue1，2，Zhang Miao1，2，Tang Yimei3，Zeng Chunyu1，2，Zhou Lin1，2
（1.Department of Cardiology，Daping Hospital，Research Institute of Field Surgery，Third Military Medical University，Chongqing，China 400042；
2.Chongqing Research InstituteofCardiology，Chongqing，China 400042； 3.DepartmentofCardiology，ShuangqiaoDistrictPeople′sHospital，Chongqing，China 400090）

ObjectiveTo investigate the relationship between G protein－coupled receptor kinase 4（GRK4）mutant A142V gene with circadian rhythm of blood pressure in the patients with essential hypertension.Methods110 patients with essential hypertension were divided into the dipper group and the non-dipper group according to the circadian rhythm change by the ambulatory blood pressure monitoring.The distribution of GRK4 mutant A142V genotypes in the two groups was analyzed.ResultsThe distribution of the GRK4 mutant A142V genotypes had statistically significant difference between the dipper group and non-dipper group；the genotype distribution of the dipper group was mainly the wild type GG，however，the distribution of mutant genotype AG＋AA in the non-dipper group was higher that in the dipper group（P＜0.05）.ConclusionThe GRK4 mutant A142V gene is related with the circadian rhythm of blood pressure in the patients of essential hypertension.The patients carrying mutant A142V are more likely to have blood pressure elevation at night.

GRK4 gene；hypertension；rhythm of blood pressure

R363.2；R544.1

A

1006－4931（2015）02－0016－03

唐輝，在讀碩士研究生，主要研究方向為高血壓，（電話）023－43333962；周林，博士研究生，教授，主要從事心血管內(nèi)科工作，本文通訊作者，（電子信箱）linzhou65＠hotmail.com。

2014－10－27）

*國家自然科學基金重點項目，項目編號：31130029。