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常規(guī)石蠟切片技術(shù)在高職醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)病理實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革中的應(yīng)用

李佩琴1，陳旭圣2，楊少芬1△

(1.廣州醫(yī)科大學(xué)衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院病理教研室，廣東廣州 510925；

2.南方醫(yī)科大學(xué)第五附屬醫(yī)院病理科，廣東廣州 510925)

病理學(xué)是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)一門重要的基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)課程，同時(shí)又是臨床診斷疾病和手術(shù)檢驗(yàn)的重要內(nèi)容。掌握常見疾病的病理檢驗(yàn)技術(shù)對醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)的學(xué)生來說很重要，高職醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)十分重視技能操作，培養(yǎng)技能型人才[1]。病理學(xué)實(shí)驗(yàn)課是病理學(xué)教學(xué)中必不可少的重要環(huán)節(jié)，長期以來病理學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)未能滿足注重實(shí)際操作能力培養(yǎng)的需求，總是停留在傳統(tǒng)的大體標(biāo)本肉眼觀察及HE染色切片顯微鏡下觀察，對病理學(xué)技術(shù)一無所知。常規(guī)石蠟切片技術(shù)是病理學(xué)、組織學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中最基本、使用最廣泛的技術(shù)方法之一，同時(shí)也是臨床手術(shù)必不可少的診斷方法。將常規(guī)石蠟切片技術(shù)應(yīng)用于高職醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)的病理實(shí)驗(yàn)教學(xué)中，使學(xué)生掌握切片的制作過程和切片質(zhì)量好壞的判斷，從而讓學(xué)生明白在觀察切片時(shí)有很多假象并非病理現(xiàn)象。同時(shí)通過學(xué)生自己動(dòng)手制作切片和閱片有利于調(diào)動(dòng)學(xué)生的積極性、培養(yǎng)動(dòng)手能力，并拓寬就業(yè)途徑，增強(qiáng)工作競爭力[2]。

1石蠟切片技術(shù)教學(xué)模式

1.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^石蠟切片技術(shù)實(shí)施在病理學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中，使學(xué)生能夠熟悉切片的制作過程，知道影響切片質(zhì)量的因素，提高學(xué)生學(xué)習(xí)的積極性、培養(yǎng)動(dòng)手能力，并拓寬就業(yè)途徑，增強(qiáng)工作競爭力。

1.2實(shí)驗(yàn)儀器、材料和試劑實(shí)驗(yàn)儀器包括萊卡輪轉(zhuǎn)切片機(jī)(德國)、烤箱、包埋機(jī)、水浴箱。試劑和材料有95%乙醇、75%乙醇、10%甲醛水溶液、二甲苯、無水乙醇、中性樹膠，石蠟(熔點(diǎn)56 ℃~58 ℃)，載玻片，蓋玻片、小白鼠正常腎組織標(biāo)本。

1.3實(shí)驗(yàn)過程常規(guī)石蠟切片包括取材、固定、洗滌和脫水、透明、浸蠟、包埋、切片與粘片、脫蠟、染色、脫水、透明、封片等步驟[3]。(1)教師講授石蠟切片制作詳細(xì)操作流程和原理；(2)放電教給學(xué)生觀看整個(gè)操作步驟及判斷切片質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)；(3)分小組到醫(yī)院病理科觀摩切片制作；(4)學(xué)生利用課后業(yè)余時(shí)間在實(shí)驗(yàn)室自己動(dòng)手操作制作一張切片并由老師現(xiàn)場進(jìn)行指導(dǎo)，并作為平時(shí)成績計(jì)入期末總評(píng)成績。

1.4實(shí)驗(yàn)步驟(1)取材：正常小鼠的腎組織，組織大小均約2.0 cm～0.3 cm厚塊。(2)固定：腎組織用10%福爾馬林固定。(3)脫水→透明→浸蠟與包埋(80%乙醇2 h、95%乙醇Ⅰ 2 h、95%乙醇Ⅱ 2 h、無水乙醇Ⅰ 30 min、無水乙醇Ⅱ 30 min、二甲苯透明30 min、石蠟Ⅰ 60 min、石蠟Ⅱ 60 min、石蠟Ⅲ 60 min、浸蠟溫度設(shè)置58 ℃，包埋石蠟與石蠟Ⅲ熔點(diǎn)相同。)(4)切片→貼片與烤片→切片脫蠟及水化。(5) HE染色(二甲苯Ⅰ 15min、二甲苯Ⅱ15 min、無水乙醇Ⅰ 2 min、無水乙醇Ⅱ 2 min、95%乙醇Ⅰ min、80%乙醇Ⅰ 1 min、自來水沖洗1 min、蒸餾水洗、蘇木素15 min、蒸餾水洗、1%鹽酸乙醇分化、自來水沖洗、1%稀氨水返藍(lán)、自來水流水沖洗、蒸餾水洗、0．5%伊紅2 min、自來水沖洗80%乙醇20 s、95%乙醇30 s、無水乙醇Ⅰ 1 min、無水乙醇Ⅱ 1 min、二甲苯Ⅰ 5 min、二甲苯Ⅱ 3 min，中性樹膠封片。

2結(jié)果

實(shí)驗(yàn)開展順利，取得預(yù)想的成績。通過老師講授，觀看電教，醫(yī)院病理科觀摩，學(xué)生自己動(dòng)手操作，大部分學(xué)生可獨(dú)立完成石蠟切片制作。通過制片和閱片大大的提高了學(xué)生對病理學(xué)實(shí)驗(yàn)課的學(xué)習(xí)興趣，該技術(shù)具有操作簡便、實(shí)用性強(qiáng)的特點(diǎn)，該技術(shù)的理論和實(shí)際操作內(nèi)容應(yīng)該拓展到臨床專業(yè)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中。

3討論

病理學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)多屬驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)，通常都是以教師為主導(dǎo)地位的填鴨式教學(xué)，傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)教學(xué)學(xué)生只是在顯微鏡下觀察經(jīng)HE染色好的組織切片和肉眼觀察制作好的大體標(biāo)本為主要內(nèi)容，學(xué)生感到枯燥乏味，尤其對于高職醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)學(xué)生而言，傳統(tǒng)的教學(xué)模式并沒有體現(xiàn)出高職實(shí)驗(yàn)教學(xué)注重實(shí)際操作能力的培養(yǎng)和崗位需求的特點(diǎn)。如何體現(xiàn)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)的人才培養(yǎng)特點(diǎn)，是目前檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)教育值得研究的問題[4]。

傳統(tǒng)的病理實(shí)驗(yàn)教學(xué)方法僅限于理論課的基本病變的觀察，忽略了病理學(xué)技術(shù)。病理學(xué)技術(shù)是組織學(xué)、病理學(xué)等學(xué)科用于觀察和研究組織與細(xì)胞的正常形態(tài)及病理變化的常用方法[5]。石蠟切片技術(shù)是病理學(xué)技術(shù)中最常用，最基本的技術(shù)之一，實(shí)驗(yàn)教學(xué)切片絕大多都是石蠟切片和HE染色的。將石蠟切片制作技術(shù)拓展到高職醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)的病理學(xué)實(shí)驗(yàn)中，極大調(diào)動(dòng)了學(xué)生學(xué)習(xí)的興趣，學(xué)生可以親自動(dòng)手制作組織制片和HE染色技術(shù)，在整個(gè)動(dòng)手實(shí)驗(yàn)過程中，可以利用所學(xué)的知識(shí)自己發(fā)現(xiàn)問題解決問題，讓學(xué)生懂得判斷切片質(zhì)量的好差，加強(qiáng)了學(xué)生對病理組織制片假象造成臨床診斷的影響，讓學(xué)生認(rèn)識(shí)到石蠟切片制作在實(shí)驗(yàn)教學(xué)、臨床診斷的重要性，同時(shí)也能使學(xué)生認(rèn)識(shí)到組織切片來之不易，學(xué)生會(huì)更加懂得珍惜切片。從而鍛煉了學(xué)生的動(dòng)手能力和臨床思維分析能力，增強(qiáng)了學(xué)生參與意識(shí)及團(tuán)隊(duì)合作精神，從而逐步培養(yǎng)學(xué)生創(chuàng)造的能力[6]。這對提高病理學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的質(zhì)量起到了很好的推動(dòng)作用。

病理技術(shù)工作非常強(qiáng)調(diào)動(dòng)手能力，目前沒有高職院校在開設(shè)該專業(yè)，畢業(yè)后醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)的學(xué)生主要從事的是技術(shù)性工作。醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)人才將成為從事病理技術(shù)工作的最強(qiáng)有力的競爭者，學(xué)生在學(xué)校就接觸到病理技術(shù)相關(guān)知識(shí)及技能，有利于擴(kuò)大該專業(yè)的就業(yè)途徑及工作競爭力。

綜上所述，在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)病理實(shí)驗(yàn)中開展常規(guī)石蠟切片制作實(shí)驗(yàn)受到學(xué)生一致認(rèn)可，具有可行性和必要性。高職教育是一種職業(yè)特征鮮明的高層次職業(yè)技術(shù)教育類型，在病理實(shí)驗(yàn)教學(xué)中，要注重培養(yǎng)實(shí)際操作技能，才能真正體現(xiàn)高職醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)病理實(shí)驗(yàn)教學(xué)的特色[7]。

參考文獻(xiàn)

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新興獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因子 提高心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估水平

日前，在南京舉行的中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十一次全國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議上，中國人民解放軍總醫(yī)院盛莉副教授分享了心血管病(CVD)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估現(xiàn)狀，并深入探討動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病(ASCVD)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估檢測進(jìn)程，進(jìn)一步闡釋了新興獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因子脂蛋白(a)[Lp(a)]、同型半胱氨酸(Hcy)和高敏C-反應(yīng)蛋白(hs-CRP)的臨床應(yīng)用價(jià)值。

血漿Lp(a)水平升高是冠心病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，研究表明，Lp(a)是除心肌梗死(MI)病史外的最強(qiáng)急性冠脈綜合征(ACS)預(yù)示因子，也是非-ST段升高ACS患者預(yù)后的重要指標(biāo)之一。由于 Lp(a)結(jié)構(gòu)復(fù)雜性、不同臨床研究、試劑檢測結(jié)果差異較大、不同標(biāo)準(zhǔn)化水平等因素影響，Lp(a)還未被廣泛認(rèn)為是冠心病獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素，亟需建立正確試驗(yàn)。

因缺少成熟商業(yè)化試劑供應(yīng)，近十年來Lp(a)臨床應(yīng)用研究受到限制。羅氏診斷Tina-quant Lp(a) 二代試劑率先遵循EAS指南、采用nmol/L標(biāo)準(zhǔn)化單位，可溯源至IFCC/WHO SRM2B及參考ELISA方法，采用乳膠增強(qiáng)免疫比濁法，可得出不受apo(a)多態(tài)性影響的準(zhǔn)確檢測結(jié)果。

作為冠心病的獨(dú)立危險(xiǎn)因子，當(dāng)HCY上升時(shí)，冠心病及MI發(fā)病率明顯升高。HCY在診斷缺血性腦卒中有較高應(yīng)用價(jià)值。研究顯示，HCY升高與糖尿病聯(lián)合，將導(dǎo)致死亡危險(xiǎn)性呈指數(shù)上升，高HCY與高血壓聯(lián)合可導(dǎo)致H型高血壓患者心血管風(fēng)險(xiǎn)大幅增高。美國谷物化學(xué)家協(xié)會(huì)(AACC)明確建議了三類需檢測HCY的臨床情況。羅氏診斷同型半胱氨酸(HCY)檢測針對孕婦、兒童、成人、老人進(jìn)行人群分組，并針對不同人群建立總HCY參考值，特異性高，檢測結(jié)果更為科學(xué)準(zhǔn)確。

高敏CRP(hsCRP)可很好檢測出0.1~10 mg/L低濃度的CRP變化，且該濃度CRP與新生兒感染、CVD發(fā)生關(guān)系密切。根據(jù)美國FDA關(guān)于CRP/hsCRP試劑評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)指南，hsCRP可用作個(gè)體CVD風(fēng)險(xiǎn)判定及分層，當(dāng)與傳統(tǒng)ACS實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，可用作CVD復(fù)發(fā)事件的獨(dú)立預(yù)示因子。羅氏診斷C-反應(yīng)蛋白(hsCRP)檢測，采用專利DuREL?技術(shù)，分析靈敏度高，檢測范圍寬，CV值不超過10%，利用標(biāo)準(zhǔn)化CRM470參考材料，符合FDA指導(dǎo)文件和AHA/ACC心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估指南中對hsCRP檢測定義的性能要求和使用建議。

·醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)教育·

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收稿日期：(2015-07-08)

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2015.24.071B

文章編號(hào)：1673-4130(2015)24-3656-02