張旭

摘要：目的 分析測定浙江、安徽、河北不同產(chǎn)地白術(shù)的多糖含量。方法 用乙醇除去干擾物質(zhì)后采用水浸提法提取多糖，以苯酚-硫酸比色法測定多糖的含量。結(jié)果 多糖含量最高的為浙江白術(shù)，其次為安徽白術(shù)，再次為河北白術(shù)。結(jié)論 浙江、安徽、河北三產(chǎn)地白術(shù)原藥材中多糖含量有存在明顯的差異。

關(guān)鍵詞：白術(shù)；多糖；苯酚-硫酸比色法

菊科植物白術(shù)有健脾益氣，燥濕利水，止汗，安胎等功效，常用于治療脾虛食少，腹脹泄瀉，痰飲眩悸，水腫，自汗，胎動(dòng)不安[1]。白術(shù)主要含揮發(fā)油、內(nèi)酯類和多糖類成分[2]。由于多糖具有獨(dú)特療效的物質(zhì)基礎(chǔ)，白術(shù)多糖在抗腫瘤、抗衰老、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、降血糖等方面的均有作用[3～5]。白術(shù)多為人工栽培品，分布廣泛，主產(chǎn)于浙江、安徽、湖南、湖北、江西、河北等地。其中，浙江的于潛、新昌、天臺(tái)等地為傳統(tǒng)的地道產(chǎn)區(qū)。已有研究表明，白術(shù)隨生長期或者生長地不同，藥材中活性成分的含量不同[6]。近年來，國內(nèi)外對(duì)白術(shù)的需求量大增，傳統(tǒng)產(chǎn)地的白術(shù)供不應(yīng)求，因此不同地區(qū)的白術(shù)培植得到了大力發(fā)展。研究不同產(chǎn)地白術(shù)中的活性成分對(duì)于白術(shù)的研究與醫(yī)用具有重要的意義。本文將采用硫酸-苯酚比色法測定產(chǎn)地為浙江、安徽和河北的白術(shù)多糖的含量，為評(píng)判不同產(chǎn)地白術(shù)品質(zhì)及合理用藥提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1儀器與試藥 采用的主要儀器為雙光束紫外-可見分光光度計(jì)IU-1901（日本島津）。使用的藥品試劑包括：80%乙醇、硫酸鋅、氫氧化鋇、硫酸、苯酚（均為分析純）、浙江白術(shù)、安徽白術(shù)、河北白術(shù)（由天津中醫(yī)藥大學(xué)提供）、葡萄糖對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定，批號(hào)：110833-200503）。

1.2方法

1.2.1供試品溶液的制備 稱取浙江、安徽、河北三產(chǎn)地白術(shù)藥材粉末各0.5g，置于平底燒瓶中，分別加入80%乙醇50ml，加熱微沸，計(jì)時(shí)1h停止，放置室溫時(shí)濾過，濾渣中加入80℃水10ml，浸提1h，取出，趁熱濾過，所得濾渣與第一次濾渣合并，加80℃水10ml，繼續(xù)浸提1h，取出趁熱過濾，合并2次所得濾液。將所得濾液轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，加蒸餾水定容。

1.2.2對(duì)照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥12h的無水葡萄糖對(duì)照品50mg，加蒸餾水使溶解，轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，定容，制成每1ml含無水葡萄糖0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

1.3方法學(xué)考察

1.3.1線性關(guān)系考察 精密量取質(zhì)量濃度為0.5mg/ml的對(duì)照品溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml，分別置于具塞試管中，加入蒸餾水于各試管補(bǔ)至2ml溶液，然后精密加入50g/L的苯酚溶液，搖勻，迅速精密加入5ml濃硫酸，振搖，待其反應(yīng)10min，置水浴中保溫20 min，取出冰浴5min，于489nm波長處測定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=73.234X+0.0053，r2=0.998，表明對(duì)照品溶液在濃度范圍為0～8μg/ml內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，見圖1。

1.3.2精密度試驗(yàn) 取河北產(chǎn)地白術(shù)藥材提取多糖供試品溶液，按供試品溶液的制備方法處理并適當(dāng)稀釋，于489nm波長處測定吸光度。6次測量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD值為3.1%，表明儀器精密度良好。

1.3.3重復(fù)性試驗(yàn) 取浙江產(chǎn)地白術(shù)藥材提取多糖供試品溶液，按供試品溶液的制備方法處理并適當(dāng)稀釋，于489nm波長處測定吸光度。RSD為3.5%，表明實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性良好，見圖2。

1.3.4穩(wěn)定性試驗(yàn) 取安徽產(chǎn)地白術(shù)藥材提取多糖供試品溶液，按供試品溶液的制備方法處理并適當(dāng)稀釋，分別在溶液配好并放置0、5、10、20、40、60min后測定多糖的含量，結(jié)果見圖2，RSD為1.3%，表明樣品用硫酸-苯酚法顯色后在1h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。

1.3.5加樣回收率 稱取已知含量的安徽產(chǎn)地白術(shù)藥材粉末6份，0.5000g/份，分別加入葡萄糖對(duì)照品適量，按供試品溶液制備方法制備，于489nm波長處測定吸光度。平均回收率為98.74%，RSD為0.68%。

2 結(jié)果

取浙江、安徽、河北三產(chǎn)地白術(shù)藥材提取多糖供試品溶液，按供試品溶液的制備方法處理并適當(dāng)稀釋，于489nm波長處測定吸光度，計(jì)算出樣品多糖的含量，見表1。

3 討論

我國對(duì)白術(shù)的使用歷史久遠(yuǎn)，不同地域?qū)ζ浞Q謂也有所不同。產(chǎn)于浙江省于潛地區(qū)的白術(shù)又稱為于術(shù)，品質(zhì)最佳為道地藥材[7，8]。于術(shù)又名于潛術(shù)、于白術(shù)、煙術(shù)。浙白術(shù)泛指產(chǎn)于浙江地區(qū)的白術(shù)。種術(shù)則指產(chǎn)于安徽地區(qū)的白術(shù)。平術(shù)指產(chǎn)于湖南平江地區(qū)。徽術(shù)指產(chǎn)于安徽省歙縣即舊時(shí)徽州，品質(zhì)亦優(yōu)。白術(shù)最早記錄于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為上品，但和蒼術(shù)一直通用，延續(xù)至宋代才有所區(qū)分。我國古代大量醫(yī)藥巨著對(duì)不同產(chǎn)地白術(shù)的特點(diǎn)早有記載及區(qū)分。如《本草綱目拾遺》也有記載："于術(shù)亦野生，出于潛，產(chǎn)縣治龍脈土上者……產(chǎn)他處，內(nèi)或無點(diǎn)純白，或有黃點(diǎn)，總不及龍脈上產(chǎn)者為商品。"由此可見，我國古代醫(yī)者對(duì)于不同地域，不同品類白術(shù)屬性的認(rèn)知與區(qū)分十分重視。

多糖類成分在強(qiáng)酸作用下水解生成單糖，并迅速脫水生成糠醛，糠醛與酚性物質(zhì)如苯酚縮合成穩(wěn)定的有色化合物，并且有色物生成量與多糖濃度存在定量關(guān)系，這樣用分光光度法在適當(dāng)波長（489nm） 處可以得到總糖含量，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，簡便易行，應(yīng)注意控制硫酸、苯酚加入時(shí)的速度，速度不同，其顯色的程度也不同[7]。本實(shí)驗(yàn)測定方法的原理是先用80%乙醇提取以除去單糖、低聚糖、苷類及生物堿等干擾性成分，再用水提取其中的多糖類成分。多糖類成分在硫酸作用下，先水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后和苯酚縮合成有色化合物，用紫外-可見分光光度法于適當(dāng)波長處測定其多糖含量。考察了不同產(chǎn)地白術(shù)藥材多糖含量的差異性，為了更全面地認(rèn)識(shí)和利用白術(shù)這一珍貴的植物資源， 同時(shí)也為探討多糖結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系，以期為白術(shù)多糖的進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考。由此實(shí)驗(yàn)可得出結(jié)論浙江、安徽、河北三產(chǎn)地白術(shù)原藥材中多糖含量存在明顯的差異，含量最高的為地道產(chǎn)區(qū)的浙江白術(shù)，符合"一脈相承"、"沿革變遷"的特點(diǎn)[9]。

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編輯/成森