張志斌,朱 艷,席俊峰

(陜西省榆林市第一醫(yī)院,陜西 榆林 719000)

CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞對食管癌浸潤及預(yù)后的影響

張志斌,朱 艷,席俊峰

(陜西省榆林市第一醫(yī)院,陜西 榆林 719000)

目的 探討CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞對食管癌浸潤及預(yù)后的影響。方法 收集手術(shù)切除的食管癌組織標(biāo)本84例、食管癌旁組織標(biāo)本49例，采用免疫組化法檢測組織標(biāo)本中CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度，并對患者預(yù)后進(jìn)行分析。結(jié)果 食管癌組織中CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度每視野(35.69±14.50)個和(29.78±12.36)個，中位數(shù)分別為32.8個和27.1個；癌旁正常組織中CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度每視野(4.26±2.30)個和(2.33±1.71)個，中位數(shù)分別為3.4個和2.2個。 食管癌組織中CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度明顯高于癌旁正常組織(P均<0.05)。 TNMⅢ期者、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者、低分化程度者CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度明顯高于TNM Ⅰ～Ⅱ期者、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者、高中分化程度者(P均<0.05)；患者術(shù)后1年、3年、5年生存率分別為83%，67%，46%，中位生存時間為44.21個月。Spearman相關(guān)分析顯示，CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度與患者生存時間呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)性(P<0.05)；多因素Cox回歸分析TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度是影響患者預(yù)后的獨(dú)立危險因素(P均<0.05)。結(jié)論 食管癌患者局部病灶組織中CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度明顯增高，CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度增高是影響患者預(yù)后的獨(dú)立因素。

食管癌；CD68+巨噬細(xì)胞；CD163+巨噬細(xì)胞；浸潤；預(yù)后

在腫瘤組織及其周圍浸潤的巨噬細(xì)胞被稱為腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(tumor-associated macrophages，TAMs)，此類巨噬細(xì)胞的浸潤多少與胃癌等腫瘤的預(yù)后關(guān)系密切[1-2]，可能是通過影響淋巴管生成及血管生成等環(huán)節(jié)影響腫瘤的預(yù)后[3]。目前研究顯示CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞在胃癌、乳腺癌、平滑肌肉瘤等惡性腫瘤中浸潤密度對患者預(yù)后存在一定影響，可作為預(yù)測以上惡性腫瘤疾病進(jìn)展、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)的預(yù)測因子[4-5]，但是關(guān)于CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞對食管癌浸潤及預(yù)后影響的研究相對較少。為探討CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞對食管癌浸潤及預(yù)后的影響，筆者對我院近年來收治的食管癌手術(shù)患者腫瘤組織標(biāo)本及癌旁組織標(biāo)本中CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞的浸潤情況進(jìn)行了檢測，并對患者預(yù)后進(jìn)行了追蹤隨訪，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 臨床資料

1.1一般資料 收集我院2008年1月—2011年12月手術(shù)切除的食管癌組織標(biāo)本84例，食管癌旁組織標(biāo)本49例?；颊呔±碜C實(shí)為原發(fā)性食管癌，在術(shù)前未接受過任何化療、放療等治療，未合并有甲狀腺功能亢進(jìn)、類風(fēng)濕、糖尿病等疾病，有隨訪條件且依從性較好。排除妊娠期及哺乳期婦女。入選食管癌組織標(biāo)本病例中男53例，女31例；年齡42～91(63.49±8.33)歲；TNM分期Ⅰ期6例，Ⅱ期54例,Ⅲ期24例；鱗癌82例,腺癌2例；高分化20例,中分化25例,低分化39例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移36例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移48例。

1.2所用試劑 檢測試劑包括DAB顯色試劑盒、PV-9000試劑盒、鼠抗人CD68單克隆抗體、鼠抗人CD163單克隆抗體，均購自北京中杉金橋生物技術(shù)公司。

1.3實(shí)驗(yàn)方法 在術(shù)中取得食管癌病灶組織標(biāo)本、癌旁組織標(biāo)本，立即采用10%甲醛溶液進(jìn)行固定，送病理實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋，切片機(jī)連續(xù)切片，切片厚度為4 μm。CD68+、CD163+表達(dá)檢測方法采用免疫組化染色法，檢測操作流程嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行，所用陽性對照為已知的食管癌陽性組織切片，PBS取代一抗作為陰性對照。

1.4結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn) 由2位主治醫(yī)生資格病理醫(yī)生進(jìn)行讀片，在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)黃褐色或棕褐色顆粒即為CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞浸潤，對5個不重疊的間質(zhì)及癌巢在高倍視野下進(jìn)行觀察，并對陽性細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)。

1.5隨訪 從患者術(shù)后出院起開始隨訪，主要采用為門診及電話隨訪，隨訪截止時間為2013年12月或死亡，生存時間為患者手術(shù)之日起到最后隨訪時間或死亡時間，死亡不包括意外死亡者。

1.6統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，計量資料采用t檢驗(yàn)，進(jìn)行Spearman相關(guān)分析及多因素Cox回歸分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度 食管癌組織中CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度明顯高于癌旁正常組織中浸潤密度，食管癌組織中CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度每視野為(35.69±14.50)個和(29.78±12.36)個，中位數(shù)分別為32.8個和27.1個；癌旁正常組織中CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度每視野為(4.26±2.30)個和(2.33±1.71)個，中位數(shù)分別為3.4個和2.2個。食管癌組織中CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度明顯高于癌旁正常組織中浸潤密度(t=15.04，t=15.44，P均<0.05)。

2.2不同臨床病理特征時CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度 TNM Ⅲ期者、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者、低分化程度者CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度明顯高于TNM Ⅰ～Ⅱ期者、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者、高中分化程度者(P均<0.05)，不同性別、年齡、分型、分化程度患者CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。見表1。

表1 不同臨床病理特征時CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度比較±s，個)

2.3患者隨訪時間及生存率 84例患者隨訪時間最長58個月，最短22個月，平均48.23個月?；颊呱鏁r間3～58個月，中位生存時間44.21個月?；颊?年、3年、5年失訪人數(shù)分別為2例、6例、11例，死亡人數(shù)分別為12例、22例、34例;1年、3年、5年生存率分別為83%(70/84)、67%(56/84)和46%(39/84)。

2.4CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度與生存時間的相關(guān)性 Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度與患者生存時間呈負(fù)相關(guān)(r=-0.30，r=-0.35，P均<0.05)。

2.5患者預(yù)后的多因素影響因素分析 以患者TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度及CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度為自變量，以患者死亡為因變量，多因素Cox回歸分析結(jié)果顯示TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度是影響患者預(yù)后的獨(dú)立危險因素(P<0.05)。見表2。

表2 食管癌患者預(yù)后的多因素影響因素分析

3 討 論

腫瘤在發(fā)展過程中有炎細(xì)胞浸潤現(xiàn)象存在，巨噬細(xì)胞是主要浸潤炎性細(xì)胞，腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的浸潤被認(rèn)為與抗腫瘤免疫反應(yīng)有關(guān)，胃癌、口腔癌等惡性腫瘤組織中高水平的巨噬細(xì)胞浸潤均影響到患者預(yù)后[2-3，6]，因而近年來各種腫瘤組織中腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞浸潤的研究成為臨床研究熱點(diǎn)。

巨噬細(xì)胞包括經(jīng)典活化巨噬細(xì)胞與替代性活化巨噬細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn)在不同的微環(huán)境下巨噬細(xì)胞會發(fā)生不同變化，如果微環(huán)境中細(xì)菌產(chǎn)物或腫瘤壞死因子γ等物質(zhì)刺激會誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向經(jīng)典活化巨噬細(xì)胞分化，從而引起白細(xì)胞介素-12等物質(zhì)釋放，參與Th1型免疫應(yīng)答；如果微環(huán)境中白細(xì)胞介素-10、白細(xì)胞介素-4等物質(zhì)刺激會導(dǎo)致巨噬細(xì)胞向替代性活化巨噬細(xì)胞分化，此時會誘導(dǎo)白細(xì)胞介素-10等釋放，參與Th2型免疫應(yīng)答，無論是經(jīng)典活化巨噬細(xì)胞還是替代性活化巨噬細(xì)胞均會影響到腫瘤的浸潤及轉(zhuǎn)移過程[7-10]。CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞分別屬于經(jīng)典活化巨噬細(xì)胞、替代性活化巨噬細(xì)胞，本研究結(jié)果顯示在食管癌組織中CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度均明顯高于癌旁正常組織，證實(shí)食管癌組織中存在腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的浸潤；將患者不同病理特征時CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度進(jìn)行分析，結(jié)果顯示TNM Ⅲ期者、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者、低分化程度者CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度明顯高于TNM Ⅰ～Ⅱ期者、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者、高中分化程度者，并且多因素分析結(jié)果顯示TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度是影響患者預(yù)后的獨(dú)立危險因素，Spearman相關(guān)分析結(jié)果也顯示CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度與患者生存時間呈負(fù)相關(guān)，表明CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度對食管癌患者預(yù)后有影響，與文獻(xiàn)[11-12]研究結(jié)果一致。CD68+巨噬細(xì)胞浸潤密度對患者的預(yù)后的影響尚不能完全肯定，但是臨床大多數(shù)研究認(rèn)為CD68+巨噬細(xì)胞浸潤對實(shí)體腫瘤預(yù)后有影響[13-15]，因而CD68+巨噬細(xì)胞浸潤對預(yù)后的影響尚需要進(jìn)一步研究。

綜上所述，食管癌患者局部病灶組織中CD68+、CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度明顯增高，CD163+巨噬細(xì)胞浸潤密度增高是影響患者預(yù)后的獨(dú)立因素。

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Influence of CD68+and CD163+macrophages on the infiltration of esophageal carcinoma and its prognosis

ZHANG Zhibin, ZHU Yan, XI Junfeng

(The First Hospital of Yulin City, Yulin 719000, Shaanxi, China)

Objective It is to approach the influence of CD68+, CD163+macrophage on the infiltration of esophageal cancer and its prognosis. Methods 84 cases of specimens of esophageal carcinoma in resection operation and 49 cases of esophageal paracancerous tissues were collected, the infiltration density of CD68+, CD163+macrophage in the specimens were detected by immunohistochemistry method, and the prognosis of the patients were analyzed. Results The every field mean density of CD68+, CD163+macrophages infiltrating in esophageal cancer tissue was 35.69±14.50 and 29.78±12.36 respectively, the median was 32.8 and 27.1. The results in paracancerous tissues was 4.26±2.30 and 2.33±1.71, the median was 3.4 and 2.2 respectively, the median was 32.8 and 27.1. The infiltration density of CD68+and CD163+macrophage in esophageal cancer tissue was significantly higher than that in paracancerous tissues (allP<0.05). The infiltration density of CD68+, CD163+macrophage with TNM Ⅲ stages, lymph node metastasis, or low differentiation degree, was significantly higher than that with TNM stage Ⅰ to Ⅱ, without lymph node metastasis, and high differentiation degree (allP<0.05). The survival rates after operation of 1 year, 3 years, 5 years were 83%, 67% and 46%, the median survival time was 44.21 months. Spearman correlation analysis showed that there was negative correlation between the infiltration density of CD68+, CD163+macrophage and the survival time of patients (P<0.05); multivariate Cox regression analysis showed that the TNM stage, lymph node metastasis, differentiation, CD163+macrophage infiltration density affects the prognosis of patients with independent risk factors ( allP<0.05). Conclusion The CD68+, CD163+macrophage infiltration density in local lesion tissue of patients with esophageal cancer are increased significantly, the increase of CD163+macrophages infiltration density is an independent factor to influence the prognostic.

macrophages; infiltration; prognosis; esophageal carcinoma

張志斌，男，主治醫(yī)師，研究方向?yàn)槭彻馨┚C合治療。

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.06.007

R735.1

A

1008-8849(2015)06-0590-03

2013-05-10