張傳利等

摘要：在咖啡殼中添加不同比例的刨花或棉籽殼進行虎奶菇的制種試驗，以探討咖啡殼制備虎奶菇菌種的可能性。以菌絲生長情況及菌種使用效果為評價指標，篩選以咖啡殼為主要原料生產(chǎn)虎奶菇菌種的培養(yǎng)基。綜合評價萌發(fā)時間、滿袋時間、菌絲日生長速度、密度、長勢及菌種產(chǎn)量等各項指標，篩選出配方Ⅱ（咖啡殼50%、刨花30%、麩皮18%、石膏1%、石灰1%）培養(yǎng)基為較優(yōu)培養(yǎng)基。方差分析結(jié)果表明，與生產(chǎn)中最常用的棉籽殼麩皮對照培養(yǎng)基相比，配方Ⅱ培養(yǎng)基生產(chǎn)的菌種在萌發(fā)定植時間、菌絲密度、色澤長勢、抗老化、滿袋時間方面差異不顯著，且其感染率降低20～25百分點?？梢姡?jīng)過合理設(shè)計，咖啡殼混合其他原料可以作為制備虎奶菇菌種的良好材料。

關(guān)鍵詞：咖啡殼；培養(yǎng)基；虎奶菇；菌種

中圖分類號：S646.04文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2015）02-0249-03

收稿日期：2014-09-08

基金項目：云南省教育廳項目（編號：2012Z131C）；云南農(nóng)業(yè)大學(xué)熱帶作物學(xué)院科研項目（編號：2014KY011）。

作者簡介：張傳利（1981—），男，山東曲阜人，碩士，講師，主要從事生物技術(shù)方面的教學(xué)與科研工作。E-mail：zhchuanli00@163.com?；⒛坦絒Pleurotus tuber-regium（Fr.）Sing]別稱菌核側(cè)耳、虎奶菌、核耳菇、茯苓側(cè)耳、南洋茯苓，是熱帶和亞熱帶地區(qū)一種名貴的藥食兼用真菌，隸屬擔(dān)子菌亞門（Basidiomycotina）層菌綱（Hymenomycetes）傘菌目（Agaricales）側(cè)耳科（Pleurotaceae）側(cè)耳屬（Pleurotus），為具菌核真菌，與茯苓（子實體不可食）、豬苓（菌核不可食）不同，其子實體與菌核皆能食用[1]?；⒛坦礁缓鞍踪|(zhì)、人體所必需的氨基酸、支鏈氨基酸、兒童氨基酸、甜味氨基酸、脂肪酸、微量元素以及多糖蛋白復(fù)合體，可以治療胃病、便秘、發(fā)燒、感冒、水腫、胸痛、痔瘡、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、天花、哮喘、糖尿病、冠心病、高血壓等疾病和營養(yǎng)失調(diào)的嬰孩[1-2]。在當今國內(nèi)外掀起“天然、保健食品”熱潮之際，虎奶菇已引起人們的重視，市場前景廣闊。

咖啡殼是咖啡初加工過程中產(chǎn)生的副產(chǎn)品，據(jù)報道，2012年在云南熱區(qū)年產(chǎn)咖啡殼約2.3萬t，目前其資源開發(fā)利用很低，除少部分用作生產(chǎn)木炭燃料外，絕大部分被當作廢棄物處理；咖啡殼含有一定量的蛋白質(zhì)、多種纖維素和礦物質(zhì)元素，木纖維化程度高于稻草，經(jīng)加工后可作為食用菌和藥用菌的培養(yǎng)料，替代一部分木屑和棉籽殼[3-4]，這不僅有效合理利用了資源，起到降低成本和保護森林資源的作用，還為咖啡副產(chǎn)品的開發(fā)利用探索出一條新的途徑，是一種經(jīng)濟的資源節(jié)約型、環(huán)境友好型的生產(chǎn)方式，應(yīng)大力提倡和發(fā)展。

近年來，在食用菌產(chǎn)業(yè)中，作為生產(chǎn)主料的棉籽殼、木屑、麩皮等原料價格不斷上漲和“菌林矛盾”的不斷突出，為了降低生產(chǎn)成本和獲得充足的生產(chǎn)原料，企業(yè)急需找尋和開發(fā)利用一些生產(chǎn)成本相對廉價的新原料作為栽培基料。因此，筆者結(jié)合云南熱區(qū)產(chǎn)業(yè)實際情況，將咖啡副產(chǎn)品資源作為食用菌的主料進行有效的開發(fā)利用，并在彩云菇、姬松茸、白參菌等珍稀食用菌栽培上取得成功[4-5]。但是，在國內(nèi)外還未有利用咖啡殼制作菌核側(cè)耳栽培種和生產(chǎn)栽培料的報道。試驗利用咖啡殼為主料進行菌核側(cè)耳栽培種制作，旨在篩選該珍稀藥食兼用菌的最適培養(yǎng)配方，為拓寬咖啡殼這一資源在食用菌生產(chǎn)中的利用提供理論依據(jù)并為廣大食用菌生產(chǎn)者提供一定參考。

1材料與方法

1.1試驗材料

供試菌株為虎奶菇1號，引自江西撫州金山食用菌研究所。供試原料包括咖啡殼（購于云南省普洱市咖啡加工廠），刨花（購于為普洱市木材加工廠），棉籽殼、麩皮、石灰、石膏（均購自普洱市五一市場）等。母種培養(yǎng)基采用馬鈴薯麩皮綜合培養(yǎng)基[5]；原種培養(yǎng)基采用刨花木屑麩皮培養(yǎng)基[4]。

1.2試驗方法

1.2.1栽培種培養(yǎng)基配方設(shè)計根據(jù)咖啡殼、刨花和棉籽殼的理化性質(zhì)和營養(yǎng)成分，以普遍采用的生產(chǎn)虎奶菇菌種的棉籽殼麩皮培養(yǎng)基為對照，主要按單一咖啡殼、咖啡殼與刨花、咖啡殼與棉籽殼設(shè)計3種培養(yǎng)基配方，具體配方見表1。

1.2.2栽培種培養(yǎng)基的篩選根據(jù)各配方比例分別稱取各種原料，采用12.00 cm×24.00 cm×0.04 cm的聚乙烯塑料袋，裝干料0.20 kg/袋左右，每個配方重復(fù)8袋。常規(guī)方法拌料、裝袋，含水量控制在65%左右，pH值7.5左右。在 0.135 MPa 下滅菌2.5 h，冷卻后接種，于（31±1） ℃培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)。

1.2.34種菌種配方栽培效果試驗按“棉籽殼64%、木屑20%、麩皮12%、石灰2%、石膏2%、含水量60%～65%、pH值7.5左右”配方配制栽培袋，按常規(guī)方法拌料、裝袋，裝入14.00 cm×28.00 cm×0.05 cm的聚丙烯塑料袋中，裝干料0.33 kg/袋左右，在0.135 MPa下滅菌3 h，滅菌冷卻后接入各配方咖啡殼菌種，（31±1） ℃避光培養(yǎng)，觀察比較各菌種菌絲生長情況以及不同菌種培養(yǎng)基在相同培養(yǎng)料中出菇產(chǎn)量。

1.2.4觀測項目及方法每個重復(fù)隨機選取無污染的3袋觀察并記錄各培養(yǎng)基配方虎奶菇菌絲的生長情況，測量菌絲生長速度[菌絲日均生長速率（mm/d）=菌絲生長量（mm）/培養(yǎng)時間（d）]及菌絲生長勢（分別將不同處理的菌絲生長情況相互比較，用“+”號表示菌絲密度）、每袋產(chǎn)量、每個重復(fù)的平均產(chǎn)量及其平均轉(zhuǎn)化率。采用新復(fù)極差法檢查各配方之間是否存在顯著差異，以此說明試驗的可靠性。

2結(jié)果與分析

2.1虎奶菇菌絲在不同培養(yǎng)基中的生長情況

設(shè)計的3種培養(yǎng)基配方中均含有相同含量的麩皮作為主要的氮源原料提供者。除配方Ⅰ主要由單一咖啡殼作為碳源原料的提供者以外，配方Ⅱ、Ⅲ主要有咖啡殼混合刨花或棉籽殼作為碳源原料的提供者，3種配方中的咖啡殼含量分別為80%、50%、50%?？Х葰じ缓w維素、木質(zhì)素以及其他營養(yǎng)物質(zhì)，其中含有粗纖維21.49%、蛋白質(zhì)2.44%、總糖1.19%、維生素0.2 mg/g、灰分0.54%[3]。所以，采用咖啡殼作為主要培養(yǎng)基也能為虎奶菇菌絲生長提供一定的碳氮源。3種培養(yǎng)基中菌絲生長情況見表2。由表2可知，虎奶菇菌絲在3種培養(yǎng)基內(nèi)均可生長，但在萌發(fā)定植時間、菌絲生長勢、污染率、物理狀態(tài)和老化情況方面存在差異。3種培養(yǎng)基配方的萌發(fā)定植時間與對照差異不明顯；污染程度從高到低依次為CK>配方Ⅰ=配方Ⅲ>配方Ⅱ，由單一棉籽殼作為主要碳源原料提供者的對照明顯高于單一咖啡殼及咖啡殼與刨花或棉籽殼混合原料配方；從物理狀態(tài)、老化情況和菌絲長勢進行綜合評價，效果從好到差依次為CK>配方Ⅱ=配方Ⅲ>配方Ⅰ，這至少說明單一咖啡殼作為主要的碳源提供者效果不是很理想，須要和其他原料混合搭配才能更好地為虎奶菌菌絲的生長發(fā)育提供碳源的供給。表2不同培養(yǎng)配方虎奶菇菌絲生長情況endprint

配方編號萌發(fā)定植時間

（d）污染率

（%）物理狀態(tài)老化情況生長勢密度色澤、長勢Ⅰ3.512.5較松，彈性較差退菌明顯，老化明顯+淺白色、生長較弱Ⅱ3.50較緊實，有彈性均勻一致，無老化現(xiàn)象+++白、粗壯、較旺Ⅲ3.012.5較緊實，有彈性均勻一致，無老化現(xiàn)象+++白、粗壯、較旺CK3.020.0緊實，有彈性均勻一致，無老化現(xiàn)象++++潔白、粗壯、旺盛注：“+”表示菌絲濃密程度，“+”越多，表示菌絲越濃密。表4同。

2.2不同培養(yǎng)基配方對虎奶菇菌絲生長速度的影響

由表3可知，在設(shè)計的3種培養(yǎng)基中，虎奶菇菌絲在配方Ⅱ中生長最快，生長速度為3.08 mm/d，在配方Ⅲ中生長最慢，生長速度為3.02 mm/d。菌絲宏觀生長速度從快到慢依次為CK>配方Ⅱ>配方Ⅰ>配方Ⅲ。由表2可知，與對照相比，配方Ⅱ、配方Ⅲ中虎奶菇菌絲的密度、色澤、長勢基本上一致，與對照差異不明顯，但配方Ⅰ的虎奶菇生長勢與對照、配方Ⅱ、配方Ⅲ差異較大。對試驗數(shù)據(jù)進行方差分析，結(jié)果（表3）表明，配方Ⅱ與對照、配方Ⅰ、配方Ⅲ差異均不顯著，但對照與配方Ⅰ、配方Ⅲ差異均顯著（P<0.05）。

2.3虎奶菇菌絲不同配方菌種生長情況

由表4可知，虎奶菇菌絲在3種配方培養(yǎng)基中均可生長，但在萌發(fā)定植時間、菌絲生長勢、污染率、滿袋時間以及老化情況方面存在差異。

2.4不同配方菌種對虎奶菇菌絲生長速度的影響

由表5可知，菌種在配方Ⅱ中生長較快，生長速度為 4.57 mm/d，在配方 Ⅰ 中生長最慢，生長速度為3.94 mm/d。各菌種在培養(yǎng)料中菌絲宏觀生長速度從快到慢依次為CK>配方Ⅱ>配方Ⅲ>配方Ⅰ。由表4可知，配方Ⅱ菌種與配方Ⅲ的菌絲密度、色澤、長勢基本上一致，與對照無明顯差異，但配方Ⅰ菌種的菌絲生長勢與對照及配方Ⅱ、Ⅲ差異較大，與不同配方培養(yǎng)基中虎奶菇菌絲生長勢基本一致。對試驗數(shù)據(jù)進行方差分析，結(jié)果（表5）表明，配方Ⅱ與對照差異顯著（P>005），與配方Ⅰ菌種差異極顯著（P>0.01），但與配方Ⅲ菌種差異不顯著（P>0.01）；配方Ⅲ、配方Ⅰ與對照差異極顯著（P>0.01），且兩者之間也差異極顯著（P>0.01）。

2.5不同配方菌種培養(yǎng)基對虎奶菇產(chǎn)量的影響

由表6可知，3種培養(yǎng)基中菌種的平均產(chǎn)量和生物學(xué)轉(zhuǎn)化率均低于對照，其中配方Ⅰ的平均產(chǎn)量最低，為 144.3 g/袋，對應(yīng)的生物學(xué)轉(zhuǎn)化率也最低，為43%；配方Ⅲ的平均產(chǎn)量最高，為224.0 g/袋，對應(yīng)的轉(zhuǎn)化率也最高，為67%。方差分析結(jié)果（表6）表明，配方Ⅰ、配方Ⅱ、配方Ⅲ的虎奶菇產(chǎn)量和生物學(xué)轉(zhuǎn)化率均與對照差異極顯著，配方Ⅱ、配方Ⅲ的虎奶菇產(chǎn)量和生物學(xué)轉(zhuǎn)化率均與配方Ⅰ差異極顯著，但配方Ⅱ和配方Ⅲ之間的虎奶菇產(chǎn)量和生物學(xué)轉(zhuǎn)化率差異不顯著。

3結(jié)論與討論

本試驗以生產(chǎn)上采用的棉籽殼麩皮培養(yǎng)基為對照，精心設(shè)計3種配方培養(yǎng)基，綜合虎奶菇在含咖啡殼原料的各配方培養(yǎng)基和各配方菌種在栽培料上的菌絲生長情況、菌絲生長速度以及各配方培養(yǎng)基對虎奶菇產(chǎn)量的表現(xiàn)等因素，結(jié)合與對照的方差分析結(jié)果初步篩選出配方Ⅱ（咖啡殼50%、刨花30%、麩皮18%、石膏1%、石灰1%）培養(yǎng)基為本試驗條件下的最優(yōu)培養(yǎng)基。方差分析結(jié)果表明，雖然配方Ⅱ產(chǎn)量極顯著低于對照，但考慮到棉籽殼和咖啡殼成本相差數(shù)倍（目前，云南棉籽殼的平均價格為2600元/t，咖啡殼的平均價格為 150元/t，換算到配方中棉籽殼麩皮對照培養(yǎng)基的平均成本比配方Ⅱ培養(yǎng)基高0.653元/袋，而對照培養(yǎng)基的平均收益比配方Ⅱ培養(yǎng)基高0.612元/袋，可見對照培養(yǎng)基的投入產(chǎn)出比高于配方Ⅱ），且配方Ⅱ感染率比對照低20～25百分點，二者在萌發(fā)時間、菌絲密度、色澤長勢、抗老化、滿袋時間等方面差異不顯著。因此，在食用菌生產(chǎn)中使用的常規(guī)原料價格上漲的局面下，選擇云南熱區(qū)特色咖啡產(chǎn)業(yè)生產(chǎn)的副產(chǎn)品咖啡殼作為食用菌栽培的一部分原料的配方，可降低生產(chǎn)成本。

試驗結(jié)果還表明，在配方Ⅱ培養(yǎng)基所展現(xiàn)的優(yōu)勢和良好特性方面，配方Ⅰ培養(yǎng)基與對照差異均極顯著，這至少說明單一咖啡殼作為主要的碳源提供者效果不是很理想，須要和其他原料混合搭配才能更好地為虎奶菌菌絲的生長發(fā)育提供營養(yǎng)物質(zhì)。同時，本試驗在添加相同比例氮源（麩皮）的情況下，只進行了單一咖啡殼、咖啡殼與刨花、咖啡殼與棉籽殼的3種配方培養(yǎng)基與棉籽殼麩皮培養(yǎng)基的對比研究，純咖啡殼、多種不同比例混合配方以及同時含有一定比例咖啡殼、刨花、棉籽殼3種物質(zhì)的配方是否可行、培養(yǎng)基配方是否更好，尚待進一步試驗。

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