吉林省朝鮮族人群Diego血型系統(tǒng)抗原頻率調查

焦立新1,陳琳1,韓瑜1,楊帆1,林乾飛1,金成日1,劉鐵梅2*

(1.吉林省血液中心，吉林 長春130033；2.吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院，吉林 長春130033)

目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了30個人類血型系統(tǒng)，除了ABO和Rh外，還有其他一些血型系統(tǒng)，例如MNS、Diego、Duffy、Kidd等。這些血型系統(tǒng)抗原在吉林地區(qū)人群中的分布特征還不清楚，而臨床輸血實踐中遇到的疑難問題又常與這些血型系統(tǒng)有關，掌握除ABO系統(tǒng)以外的其他抗原分布情況，有利于相配合供者的尋找及新生兒溶血病的預防。由于Dia主要分布于蒙古族人種中，因此Diego血型系統(tǒng)除了具有上述臨床意義外,還具有重要的人類學意義，本文調查了本地區(qū)朝鮮族人群Diego血型系統(tǒng)Dia、Dib抗原分布情況。

1資料與方法

1.1對象隨機抽取2013年1月-2014年12月無血緣關系的吉林省延吉市朝鮮族體檢健康人1000名，包括男性542人，女性458人，ABO血型分布為A型286人，B型321人，O型281人，AB型112人。采取每位待檢者靜脈血5 ml,EDTA抗凝，置于4℃保存。

1.2序列特異性引物PCR(sequence-specific primer polymerase chain reaction,PCR-SSP)篩選Diego血型系統(tǒng)基因型采用天津秀鵬生物技術有限公司生產(chǎn)的特異性引物(引物包被在擴增板上，批號 201501011)。該試劑盒根據(jù)Genebank公布的Dia、Dib基因特異性序列設計；參照試劑盒說明書加入反應混合液和模板DNA；啟動PCR循環(huán)程序，在Bio-Rad iCycler DNA擴增儀96℃2 min 1Cycle， 96℃20 s、68℃60 s 5Cycles，96℃20 s、65℃45 s、72℃30 s 10Cycles，96℃ 20 s、62℃45 s、72℃30 s 15Cycles，72℃3 min，4℃min～；擴增產(chǎn)物采用2.0%瓊脂糖凝膠140-150 V,電泳15-20 min。

1.3血清學實驗獻血者紅細胞用生理鹽水洗滌3次，配成3%-5%紅細胞懸液。采用間接抗球蛋白法進行Dia、Dib抗原檢測，抗-Dia和-Dib血清為美國Bio-Rad公司試劑(批號 2216050)。

1.4數(shù)據(jù)分析計數(shù)資料采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1吉林省朝鮮族人Diego血型抗原分布

在1000例朝鮮族人樣本中，經(jīng)統(tǒng)計Dia抗原頻率為0.112，Dib抗原頻率1.0；Di(a+b+)112例，Di(a-b+)888例，未檢測到Di(a+b-)和Di(a-b-)樣本。經(jīng)Hardy-Weinberg平衡檢驗，吉林省朝鮮族的Diego血型抗原分布符合Hardy-Weinberg平衡檢驗(表1)。Dia和Dib基因分型結果見圖1。

圖1　Diego血型抗原基因的電泳結果

2.2吉林地區(qū)朝鮮族人與其他人種的Dia基因頻率比較

經(jīng)與下表中各人種進行兩組之間率的比較[1]，χ2檢驗P<0.05，均有顯著性差異(見表2)。Dia頻率在南美洲人群中較高(委內瑞拉、巴西)，而在歐洲、非洲、澳洲血統(tǒng)人群中較罕見，吉林地區(qū)朝鮮族中的頻率高于大多數(shù)東南亞人群。

表1　吉林地區(qū)朝鮮族人群Diego血型抗原分布情況

表2　不同地區(qū)Dia頻率研究結果

3討論

編碼人類紅細胞Diego血型系統(tǒng)抗原的基因位于17號染色體17q12-q21上，名為SLC4K1。該基因編碼的22個抗原都位于帶3蛋白上，它是主要的細胞膜糖蛋白，在HCO3-和Cl-快速交換及CO2轉運中起重要作用，Dia和Dib是Diego血型系統(tǒng)的兩個常見表型。是由帶3蛋白的第854位氨基酸替換形成，Dia為Leu854而Dib為Pro854。

1965年Layriss 和Arends首次在發(fā)生新生兒溶血病的委內瑞拉家庭中檢出Dia抗原，1967年Thompson等檢出了Dib，Dia和Dib兩個抗原均為顯性遺傳[2]，Dia和Dib能引起新生兒溶血病和溶血性輸血反應。由于Dia存在于東南亞人群中，因此東方人應特別注意抗-Dia抗體的存在。

Dia的頻率在不同人種分布差異較大，在南美的委內瑞拉和巴西人群中分別為35.54%和54.16%，在北美的加拿大因紐特人中很罕見，而在白人和澳洲土著人中極為罕見，Dia似乎不存在于澳洲原住民及許多大西洋人群中，在非洲人群中不存在或極少存在，Dia在東南亞人群中頻率2%-12%不等。至今未發(fā)現(xiàn)Di(a-b-)紅細胞。中國漢族人的Dia抗原頻率(antigen frequency)為5%左右，本文調查說明吉林地區(qū)朝鮮族人群中Dia頻率(11.2%)高于漢族人，Dib頻率則是100%。由于Dia在歐洲人群中罕見，進口譜細胞中經(jīng)常不含有Di(a+)的細胞，是我們在臨床輸血工作中應該注意的，吉林地區(qū)朝鮮族是 Dia抗原頻率較高的人群，應防止抗-Dia的漏檢；本調查沒有檢測到Di(b-)細胞，抗-Dib抗體又沒有天然產(chǎn)生的報道，因此抗-Dib在朝鮮族人中引起輸血反應和新生兒溶血病的幾率極低。吉林地區(qū)朝鮮族人群的Diego血型系統(tǒng)抗原分布有其自身特點，這部分人群輸血治療遇到的問題需要考慮其血型抗原分布特征，因此有必要繼續(xù)篩查其他主要血型系統(tǒng)抗原分布，以便指導臨床輸血。

由于基因分型方法穩(wěn)定可靠且費用較低，適合大樣本篩查，可以鑒定血清學方法無法檢測的血型系統(tǒng)；另外作為紅細胞其他血型系統(tǒng)的一項輔助技術，也有助于提高譜紅細胞定型的準確性。

參考文獻：

[1]Daniel J.人類血型[M].北京：科學出版社,2007:119-120.

[2]胡麗華.臨床輸血檢驗[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2004:80-82.

(收稿日期：2015-07-14)

文章編號：1007-4287(2015)12-2129-02

*通訊作者

基金項目：吉林省衛(wèi)生科研計劃課題，項目編號“2013Z029”，“2012ZC028”