崔雯雯, 金 鑫, 張彥芬, 王宏濤,2, 秘 堯, 何奇龍

(1. 黑龍江中醫(yī)藥大學藥學院, 黑龍江 哈爾濱 150040; 2. 河北以嶺醫(yī)藥研究院, 河北 石家莊 050035;3. 河北省絡病重點實驗室, 河北 石家莊 050035; 4. 國家中醫(yī)藥管理局心腦血管絡病重點研究室,河北 石家莊 050035)

連花清瘟膠囊對脂多糖致急性肺損傷小鼠炎癥因子和連接蛋白表達的影響

崔雯雯1, 金 鑫1, 張彥芬2,3, 王宏濤1,2, 秘 堯2,4, 何奇龍2,4

(1. 黑龍江中醫(yī)藥大學藥學院, 黑龍江 哈爾濱 150040; 2. 河北以嶺醫(yī)藥研究院, 河北 石家莊 050035;3. 河北省絡病重點實驗室, 河北 石家莊 050035; 4. 國家中醫(yī)藥管理局心腦血管絡病重點研究室,河北 石家莊 050035)

目的 研究連花清瘟膠囊(LHQW)對脂多糖(LPS)致急性肺損傷小鼠肺組織連接蛋白表達的影響。方法 雄性KM小鼠隨機分為6組，正常對照組、模型組、模型+地塞米松5 mg·kg-1組、模型+LHQW 2, 4和8 g·kg-1組，每組20只。地塞米松和LHQW均ig給藥，每天1次，共7 d。末次給藥24 h后，除正常對照組外其余5組氣管內滴注LPS溶液，制備小鼠急性肺損傷模型。造模24 h后，處死小鼠。光鏡下觀察肺組織病理形態(tài)變化，透射電鏡下觀察肺泡上皮超微結構，流式細胞術檢測外周血T細胞中腫瘤壞死因子α(TNF-α)陽性表達細胞百分率，免疫組化法檢測肺組織間隙連接蛋白43(Cx43)、閉鎖蛋白和閉鎖小帶蛋白(ZO-1)的表達。結果 光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，模型組小鼠肺內出現(xiàn)大量炎癥細胞浸潤，肺泡壁增厚；模型+地塞米松組、模型+LHQW 2, 4和8 g·kg-1組較模型組炎癥細胞浸潤減少，肺泡壁增厚減輕。電鏡下可見，模型組肺泡上皮細胞出現(xiàn)損傷，模型+地塞米松組、模型+LHQW 2, 4和8 g·kg-1組較模型組均不同程度減輕。正常對照組、模型組、模型+地塞米松組、模型+ LHQW 2, 4和8 g·kg-1組外周血T細胞中TNF-α陽性表達細胞百分率分別為(3.6±0.9)%，(6.4±0.8)%，(2.8±0.7)%，(4.7±1.6)%，(4.0±1.5)%和(3.6±1.2)%，模型組明顯高于正常對照組(P<0.01)，其余各組均低于模型組(P<0.05,P<0.01)。模型組肺組織中Cx43、閉鎖蛋白和ZO-1表達均低于正常對照組(P<0.01)，模型+地塞米松、模型+LHQW 4和8 g·kg-1組3種蛋白表達均高于模型組(P<0.05)。結論 LHQW可能通過抑制炎癥細胞浸潤，改善肺泡上皮細胞和肺血管內皮細胞連接蛋白的表達，緩解LPS導致的急性肺損傷。

連花清瘟膠囊; 脂多糖; 急性肺損傷; 連接蛋白

急性肺損傷(acute lung injury, ALI)是由肺內外多種致病因素引起全身失控性炎癥反應導致的急性、進行性呼吸衰竭[1]，臨床表現(xiàn)為呼吸困難、肺水腫和低氧血癥等[2]，其主要病理特征表現(xiàn)為肺泡上皮細胞和肺毛細血管內皮細胞發(fā)生損傷、通透性增加和細胞間隙增寬等[3]。已有研究表明，脂多糖(lipopolysaccharides，LPS)可以引起肺泡上皮細胞和毛細血管內皮細胞發(fā)生損傷，改變細胞間隙和通透性，引發(fā)肺水腫[1,4]。緊密連接廣泛存在于肺泡上皮細胞和肺毛細血管內皮細胞間，對維持肺泡組織機械屏障的完整性和通透性起著重要作用[5]。閉鎖蛋白(occludin)和閉鎖小帶蛋白-1(zonula occludens protein-1，ZO-1)是肺泡上皮和血管內皮緊密連接的重要成分[6]。縫隙連接介導的細胞間信號傳遞對維持細胞內穩(wěn)態(tài)有重要意義，縫隙連接蛋白43(connexin 43，Cx43)在肺泡上皮細胞和肺毛細血管內皮細胞均有表達，對肺部炎癥反應有重要的調控作用[7-8]。連花清瘟膠囊(Lianhuaqingwencapsules，LHQW)是具有廣譜抗病毒、天然抗菌和抗炎等作用的中藥復方制劑，能夠明顯抑制肺炎鏈球菌并減輕肺組織炎癥反應[9]。本研究采用氣管內滴注LPS導致小鼠ALI，以探討LHQW對ALI小鼠連接蛋白的表達影響。

1 材料與方法

1.1 藥物、試劑和儀器LHQW，石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司提供，批號120434；地塞米松片，天津天藥藥業(yè)股份有限公司，批號130211；LPS，德國Sigma公司；兔抗小鼠Cx43多克隆抗體，美國SAB公司；兔抗小鼠閉鎖蛋白多克隆抗體，美國Abcam公司；兔抗小鼠ZO-1多克隆抗體，美國Abcam公司；SP檢測試劑盒和DAB顯色劑盒，中國中杉金橋生物技術有限公司；FITC標記抗小鼠CD3、PE標記抗小鼠腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)單抗，美國Promega 公司。Leica RM2015切片機，德國Leica公司；Olympus IX71熒光倒置顯微鏡，日本Olympus公司；ABI 7300流式細胞儀，美國Beckman Coulter公司；H-7500型透射電鏡，日本日立公司。

1.2 動物、動物分組和給藥120只SPF級雄性KM小鼠，6周齡，體質量18～20 g，由中國食品藥品檢定研究所提供，合格證號：SCXK(京)2009-0017。實驗前適應性喂養(yǎng)4 d后，隨機分成6組，正常對照組，模型組，模型+地塞米松組，模型+LHQW 2, 4和8 g·kg-1組，每組20只。LHQW和地塞米松片采用0.5%羧甲纖維素鈉配制成混懸液，模型+地塞米松組ig給予地塞米松5 mg·kg-1，模型+LHQW 2, 4和8 g·kg-1組分別ig給予LHQW 2, 4和8 g·kg-1，正常對照組和模型組ig給予等劑量的0.5%羧甲纖維素鈉，每天1次，連續(xù)7 d。末次給藥24 h后，除正常對照組外，其他各組小鼠用10%水合氯醛3.5 mg·kg-1腹腔麻醉后，將小鼠仰臥位固定在手術板上，頸部消毒，縱向切開頸部皮膚，剝離皮下組織，暴露氣管，用1 mL注射器吸取LPS生理鹽水溶液(5 mg·kg-1)，從氣管兩氣管環(huán)間快速刺入注射，2 mg·kg-1，滴入后立即直立小鼠，上下輕度晃動數(shù)次，使藥物均勻分布于肺部，縫合傷口，讓小鼠自然清醒。

1.3 光鏡下觀察肺組織病理變化氣管滴注LPS溶液24 h后，將小鼠采用眼球取血的方式處死，開胸取肺。取左肺上葉組織塊，放入4%甲醛溶液固定48 h，石蠟包埋，切片(片厚5 μm)，每組中隨機抽取3張切片，HE染色，光鏡下觀察肺組織病理變化。

1.4 透射電鏡觀察肺泡上皮超微結構每組中隨機3只小鼠，取左肺下葉組織塊(2 mm×2 mm×2 mm)，放入2.5%戊二醛溶液中固定48 h，二甲砷酸緩沖液沖洗2遍，四氧化鋨固定再經緩沖液沖洗，逐級丙酮脫水，環(huán)氧樹脂浸透包埋，超薄切片，醋酸鈾-枸櫞酸鉛染色，透射電鏡觀察肺組織超微結構的變化。

1.5 流式細胞術法檢測外周血T細胞中TNF-α表達陽性細胞率取出小鼠全血，用肝素抗凝，分離外周血單個核細胞，調整細胞密度。然后采用佛波酯和離子霉素刺激淋巴細胞，收集單個核細胞，紅細胞裂解液裂解，對照管加入同型對照，TNF管加入FITC-抗CD3單抗 3.5 μL，室溫避光孵育30 min，加入破膜劑1號和2號，放置5 min，加入PE標記的抗TNF-α單抗2 μL，放置30 min，離心，洗去未結合抗體，應用流式細胞儀檢測細胞。Exp32軟件獲取分析細胞，每個檢測獲取10 000個細胞，采用前向角和側向角散射光散點圖設門區(qū)分淋巴細胞，分析胞內TNF-α表達，計算TNF-α表達陽性細胞百分率。

1.6 免疫組化法檢測肺組織中Cx43、閉鎖蛋白和ZO-1的表達取左肺上葉組織塊，放入4%甲醛溶液固定48 h，石蠟包埋，切片(片厚5 μm)，于切片中任意抽取其中3片，脫蠟, 水化，PBS沖洗，加入一抗(兔抗小鼠Cx43，閉鎖蛋白和ZO-1多克隆抗體)，4℃過夜，PBS沖洗；滴加生物素標記的羊抗兔IgG二抗，37℃孵育30 min，PBS沖洗；滴加辣根酶鏈霉卵白素工作液，37℃孵育30 min，PBS沖洗；DAB顯色，蒸餾水洗，復染(蘇木素染色，1%鹽酸乙醇分化，自來水洗)，脫水，透明，封片，光鏡(×400)下觀察。在相同放大倍數(shù)下，每張切片取3個不同的視野采集圖像，經過Image Pro Plus 6.0圖像分析系統(tǒng)進行半定量分析。

2 結果

2.1 LHQW對LPS致ALI小鼠肺組織病理損傷的影響正常對照組小鼠肺泡結構完整，肺泡壁無增厚，無炎癥細胞浸潤，無充血，未見明顯病理改變(圖1A)。模型組肺泡腔內可見大量中性粒細胞、少量淋巴細胞和巨噬細胞的滲出物，大量紅細胞滲出，肺泡壁薄厚不均，肺泡間質增生、肺泡壁水腫(圖1B)；模型+地塞米松組較模型組，中性粒細胞等炎癥細胞明顯減少，紅細胞滲出減少，肺泡間質增生及肺泡壁水腫明顯減輕(圖1C)。與模型組比較，模型+ LHQW 3個劑量組肺組織病理形態(tài)損傷均有改善，模型+LHQW 2 g·kg-1組雖仍可見大量中性粒細胞、巨噬細胞和紅細胞等滲出，肺泡壁薄厚不均，但較模型組減輕(圖1D)；模型+LHQW 4 g·kg-1組可見肺內炎癥細胞浸潤、紅細胞滲出和間質增生等現(xiàn)象均有減輕(圖1E)；模型+LHQW 8 g·kg-1組可見少量中性粒細胞和紅細胞等滲出物，肺泡壁水腫和肺泡間質增生等現(xiàn)象明顯改善(圖1F)。

Fig.1 Effect of Lianhuaqingwen capsules (LHQW) on lung pathological damage of acute lung injury (ALI) mice induced by lipopolysaccharides(LPS) (HE staining). LHQW and dexamethasone were ig given once a day for 7 d, and LPS 5 mg·kg-1was intratracheally given 24 h after the final administration of drugs. 24 h later, the mice were sacrificed and lung pathological damage was observed. A:normal control; B: model; C：model+dexamethasone 5 mg·kg-1; D, E and F: model+LHQW 2, 4 and 8 g·kg-1, respectively. The red arrows show inflammatory cell aggregation，and the green arrows show alveolar wall of uneven thickness.

2.2 LHQW對LPS致ALI小鼠肺組織超微結構變化的影響正常對照組肺組織結構基本正常，肺泡Ⅱ型上皮細胞微絨毛排列整齊，胞漿內有大量板層小體和線粒體，板層小體結構清晰，基膜完整(圖2A)；模型組Ⅱ型上皮細胞損傷，纖毛輕微斷裂、融合，板層小體空泡化，嗜鋨性板層小體排空(圖2B)；模型+地塞米松組和模型+LHQW 8 g·kg-1組病變明顯減輕，可見大量板層小體和線粒體，板層小體結構輕微混亂(圖2C，F(xiàn))；模型+LHQW 2 g·kg-1組可見線粒體和板層小體均空泡化，Ⅱ型上皮細胞損傷(圖2D)；模型+LHQW 4 g·kg-1組線粒體出現(xiàn)空泡化，板層小體輕微空泡化(圖2E)。

Fig.2 Effect of LHQW on lung ultrastructure changes of ALI mice induced by LPS (transmission electron microscope, ×20 000 ). See Fig.1 for the mouse treatment. A: normal control; B: model; C：model+dexamethasone 5 mg·kg-1; D, E and F: model+LHQW 2, 4 and 8 g·kg-1, respectively. The red arrows show lamellar body structure confusion or vacuolization, and the green arrows show cilia or mitochondrial fracture.

2.3 LHQW膠囊對LPS致ALI小鼠外周血中TNF-α陽性表達細胞百分率的影響與正常對照組比，模型組全血中TNF-α陽性表達細胞百分率明顯升高(P<0.01)，提示LPS造模后炎癥因子表達升高；與模型組相比，模型+LHQW 2，4和8 g·kg-1組均明顯下降(P<0.05，P<0.01)，說明LHQW能夠不同程度降低炎癥因子的表達(表1)。

Tab.1 Effect of LHQW on cell percentage of tumor necrosis factor-α (TNF-α) positive expression in peripheral blood of ALI mice induced by LPS

GroupDose/g·kg-1TNF?αpositiveexpressioncell/%Normalcontrol3．6±0．9Model6．4±0．9??Model+dexamethasone2．8±0．7##Model+LHQW24．7±1．6#44．0±1．5##83．6±1．2##

2.4 LHQW對LPS致ALI小鼠肺組織Cx43、閉鎖蛋白、ZO-1表達的影響免疫組化染色結果(圖3, 4和5，表2)表明，正常對照組小鼠肺組織Cx43(圖3A)和ZO-1(圖5A)在肺泡上皮細胞和血管內皮細胞胞漿內有大量陽性表達，呈棕褐色顆粒狀，閉鎖蛋白(圖4A)在肺泡上皮細胞和血管內皮細胞的胞膜和胞漿均有陽性表達；與正常對照組相比，模型組小鼠肺內Cx43(圖3B)、閉鎖蛋白(圖4B)和ZO-1(圖5B)的表達均明顯減少(P<0.01)；與模型組相比，模型+地塞米松組小鼠肺內Cx43(圖3C)、閉鎖蛋白(圖4C)、ZO-1(圖5C)的表達明顯增多(P<0.01)，模型+LHQW 4和8 g·kg-1組Cx43、閉鎖蛋白和ZO-1表達亦明顯增加(P<0.05，P<0.01)；模型+LHQW 2 g·kg-1組3個蛋白的表達均無明顯變化。

Fig.3 Effect of LHQW on expression of connexin 43 (Cx43) in lung tissue of ALI mice induced by LPS (immunohistochemistry). See Fig.1 for the mouse treatment. A:normal control group; B: model group; C：model+dexamethasone 5 mg·kg-1group; D, E and F: model+LHQW 2, 4 and 8 g·kg-1, respectively.

Fig.4 Effect of LHQW on expression of occludin in lung tissue of ALI mice induced by LPS (immunohistochemistry). See Fig.1 for the mouse treatment. A: normal control group; B: model group; C：model+dexamethasone 5 mg·kg-1group; D, E and F: model+LHQW 2, 4 and 8 g·kg-1, respectively.

Fig.5 Effect of LHQW on expression of zonula occludens protein-1 (ZO-1) in lung tissue of ALI mice induced by LPS (immunohistochemistry). See Fig.1 for the mouse treatment. A: normal control group; B: model group; C：model+dexamethasone 5 mg·kg-1group; D, E and F: model+LHQW 2, 4 and 8 g·kg-1, respectively.

Tab.2 Effect of LHQW on Cx43, occludin and ZO-1 expression in lung tissue of ALI mice induced by LPS

GroupDose/g·kg-1Proteinexpression(Integratedabsorbance)Cx43OccludinZO?1Normalcontrol0．37±0．060．27±0．070．21±0．06Model0．23±0．06??0．18±0．04??0．12±0．03??Model+dexamethasone0．35±0．07##0．25±0．05##0．21±0．06##Model+LHQW20．28±0．070．20±0．040．15±0．0540．31±0．08#0．23±0．03#0．18±0．06#80．35±0．10##0．25±0．05##0．19±0．09##

3 討論

本研究觀察肺組織病理改變和超微結構發(fā)現(xiàn)，氣管內滴注LPS能夠引起肺泡上皮和內皮的損傷，使細胞間隙增寬，通透性增加，進而致大量的炎癥細胞浸潤在肺泡腔內，引發(fā)肺水腫。這與Zemans等[1]和楊茂憲等[10]的研究結果一致。ALI小鼠外周血中TNF-α陽性表達細胞百分率的增加，進一步說明LPS進入肺內損傷肺泡上皮細胞，激活炎癥細胞釋放炎癥因子，由于血管通透性的改變和肺毛細血管內皮的損傷，大量的炎癥因子進入血管內，導致血液內炎癥因子的含量增加。Matute-Bello等[11]也認為，制備動物ALI模型時，應該復制出肺泡上皮細胞和肺血管內皮細胞的病理損傷變化和炎癥反應，才更符合臨床ALI的病理特征。緊密連接和縫隙連接是肺泡上皮細胞和肺毛細血管內皮細胞間的2種重要連接方式。它們的存在對調節(jié)細胞通透性、維持細胞膜極性起到很大的作用，充分保持肺組織血氣屏障的完整性[6，12]。緊密連接作為細胞之間的“屏障”，主要存在于上皮細胞、內皮細胞間的連接復合體中，保證機體內環(huán)境的相對穩(wěn)定[13]。緊密連接蛋白主要是由3種完整的跨膜蛋白閉鎖蛋白、封閉蛋白、連接黏附分子和3種閉鎖小帶蛋白ZO-1，ZO-2和ZO-3組成的。其中，閉鎖蛋白和ZO-1是構成緊密連接屏障功能的調節(jié)蛋白，閉鎖蛋白是跨膜整合蛋白，形成了連接在細胞間的緊密結合點；ZO-1屬于細胞內蛋白，與閉鎖蛋白的胞質結合，將閉鎖蛋白定位于細胞骨架，充分保證了緊密連接的完整性[14]。因而，這兩種緊密連接蛋白在肺泡上皮細胞和肺血管內皮細胞中的表達，對維持肺泡上皮屏障結構和血管通透性的穩(wěn)定起到了重要作用。縫隙連接是由縫隙連接蛋白組合而成的，參與細胞間的物質交換和信號傳導。Haefliger等[15]研究發(fā)現(xiàn)，Cx43是一種重要的細胞縫隙連接蛋白，它在肺泡上皮細胞和血管內皮細胞均有表達，也是肺組織細胞表達最主要的縫隙連接蛋白，能夠調控對ALI至關重要的 Ca2+信號通路，與肺泡-毛細血管通透性也息息相關，是肺部炎癥反應的基礎[16]。LHQW是具有清瘟解毒、宣肺泄熱作用的廣譜抑菌、抗炎的中藥復方制劑。研究發(fā)現(xiàn)，它對肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、甲型和乙型溶血性鏈球菌等具有明顯的抑制作用，能降低流感病毒感染肺組織炎性因子TNF-α, 白細胞介素1b和白細胞介素6含量，對急性放射性肺損傷大鼠的炎癥反應具有緩解作用[17-19]。綜合本研究結果，即LPS組小鼠肺組織病理變化、肺部超微結構變化和全血中TNF-α陽性表達細胞百分率升高，表明已成功復制ALI模型。LHQW能不同程度地提高閉鎖蛋白、ZO-1和Cx43的表達，表明LPS進入肺部后可能破壞了肺泡上皮細胞和血管內皮細胞間緊密連接蛋白構成的保護結構，增加血管通透性，影響了細胞間的信號傳遞和物質交換，從而致使炎癥反應蔓延導致ALI；LHQW可以改善上述變化，抑制炎癥反應的發(fā)展，緩解LPS造成的ALI。綜上所述，LHQW對LPS導致的ALI肺組織緊密連接蛋白和縫隙連接蛋白的表達均有影響，提示LHQW可通過增加這兩類連接蛋白在肺組織的表達、改善肺組織血氣屏障和細胞通透性，但對肺泡上皮細胞和肺毛細血管內皮細胞的具體保護作用機制尚不清楚，需進一步研究。

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(本文編輯: 齊春會)

Effect of Lianhuaqingwen capsules on inflammatory cytokinesand junction protein expression in mice with acutelung injury induced by lipopolysaccharides

CUI Wen-wen1, JIN Xin1, ZHANG Yan-Fen2,3, WANG Hong-tao1,2, MI Yao2,4, HE Qi-long2,4

〔1.CollegeofPharmacy，HeilongjiangUniversityofChineseMedicine,Harbin150040,China;2.YilingMedicalResearchInstituteofHebeiProvince,Shijiazhuang050035,China; 3.KeyLaboratoryofNetworkDiseaseofHebeiProvince,Shijiazhuang050035,China; 4.KeyLaboratoryofStateAdministrationofTraditionalChineseMedicine, (Cardio-CerebralVascularNetworkDisease),Shijiazhuang050035,China〕

OBJECTIVE To explore the effect ofLianhuaqingwencapsules (LHQW) on junction protein expression in mouse lung tissue of lipopolysaccharide (LPS)-induced acute lung injury (ALI). METHODS 120 male mice were randomly divided into six groups: normal control, model, model+dexamethasone 5 mg·kg-1, model+LHQW 2, 4 and 8 g·kg-1groups. Dexamethasone and LHQW were administered orally, once daily, for 7 d. 24 h after the last administration, LPS solution was instilled into the tracheas of mice except the normal control group to prepare the mouse model of ALI. 24 h after the establishment of the ALI model, the mice were sacrificed and the pathological changes in the mouse lung tissue were observed by optical microscopy and ultrastructure of alveolar epithelium was observed by transmission electron microscopy. The cell percentage of positive expression of tumor necrosis factor-α (TNF-α) in the peripheral blood T lymphocytes was detected by flow cytometry. The expressions of connexin 43 (Cx43), occludin and zonula occludens protein-1 (ZO-1) in lung tissues were detected by immunohistochemistry. RESULTS Under the light microscope, the mouse lung of model group showed a large amount of inflammatory cell infiltration and alveolar wall thickening. Compared with model group, inflammatory cell infiltration was reduced in model+dexamethasone, model+LHQW 2,4 and 8 mg·kg-1groups. Under the electron microscope, the mouse alveolar epithelial cells of model group showed injury. Compared with model group, the damage was reduced in model+dexamethasone, and model+LHQW 2, 4 and 8 mg·kg-1groups. The cell percentage of TNF-α positive expression in peripheral blood T lymphocytes in normal control, model, model+dexamethasone, model+LHQW 2,4 and 8 mg·kg-1groups was (3.6±0.9)%, (6.4±0.8)%, (2.8±0.7)%, (4.7±1.6)%, (4.0±1.5)% and (3.6±1.2)%, respectively. The percentage in model group was obviously higher than that in normal control group(P<0.01), but was lower in the four drug treatment groups than in model group(P<0.05,P<0.01). The expression of Cx43, occludin and ZO-1 in lung tissue of model group was lower than that of normal control group(P<0.01), but higher in model+dexamethasone, model + LHQW 4 and 8 mg·kg-1groups than in model group(P<0.05). CONCLUSION LHQW may alleviate ALI induced by LPS and play a protective role by inhibiting inflammatory cell infiltration and improving protein connection expression in alveolar epithelial cells and pulmonary vascular endothelial cells.Key words:Lianhuaqingwencapsules; lipopolysaccharides; acute lung injury; junction protein

WANG Hong-tao，E-mail: wanghongtao@yiling.cn, Tel: (0311)85901553

國家科技重大專項(2011ZX09201-201-27); 河北省中醫(yī)藥管理局科研計劃(2014227)

崔雯雯(1991-)，女，中藥學碩士，主要從事中藥藥理學與呼吸藥理學研究，Tel: (0311)85901553, E-mail: reaishenghuo0506@163.com

王宏濤，E-mail: wanghongtao@yiling.cn, Tel: (0311)85901553

Foundation item: The project supported by National Science and Technology Major Project of Original New Drug Research of China(2011ZX09201-201-27)；and Scientific Research Program of Hebei Province Administration of Traditional Chinese Medicine(2014227)

2014-09-23 接受日期: 2015-03-11)

R285.5,R974

A

1000-3002(2015)02-0213-07

10.3867/j.issn.1000-3002.2015.02.005

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