劉秀芬，丁美玲，張朝鳳，張 勉，許翔鴻

中國藥科大學中藥學院生藥學研究室，南京 211198

潮風草中非C21甾體類化學成分研究*

劉秀芬，丁美玲，張朝鳳**，張 勉，許翔鴻

中國藥科大學中藥學院生藥學研究室，南京 211198

目的：研究民間藥用植物潮風草Cynanchum ascyrifolium中非C21甾體類化學成分，闡明其抗炎作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。方法：采用多種柱色譜技術(shù)進行化學成分的分離純化，并根據(jù)理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)鑒定結(jié)構(gòu)。結(jié)果：從本種植物的干燥根莖中分離鑒定了11個化合物，分別鑒定如下：五環(huán)三萜類的華北白前醇（1）；苯乙酮類的對羥基苯乙酮（2），2，4-二羥基苯乙酮（3）和 4-羥基-3-甲氧基苯乙酮（4）；植物甾醇類的6β-羥基-4-烯-3-豆甾烷酮（5），3β，5α，6β-三羥基豆甾烷（6），β-谷甾醇（7）和β-胡蘿卜苷（8）；苯甲酸類的對羥基苯甲酸（9）和3，4-二羥基苯甲酸甲酯（10）；以及神經(jīng)鞘脂苷元（2S，3S，4R，10E）-2-[（2′R）-2'-hydroxytetracosanoyl amino]-10-octadecene-1，3，4-triol（11）。結(jié)論：潮風草的根莖中五環(huán)三萜和苯乙酮類成分含量較高，可能為潮風草發(fā)揮抗炎作用的主要成分類型之一；以上化合物均首次從本種植物中分離得到。

蘿藦科；潮風草；苯乙酮類；植物甾醇類

潮風草Cynanchum ascyrifolium系蘿藦科鵝絨藤屬植物，生于山坡、林緣、雜木林下及稍濕草地。產(chǎn)于吉林、遼寧、山東、河北，朝鮮、日本也有分布。根可藥用，在東北也作“白薇”收購[1]。本品味苦、咸，性寒，具有清熱涼血、利尿通淋、解毒療瘡等功效。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，潮風草的根莖乙醇提取物具有較好的抗炎作用，無顯著細胞毒性。C21甾類為蘿藦科特征性化學成分，具有較好的抗炎活性及免疫抑制作用[2]。

Yeo H等[3-4]從潮風草的根中分離得到5個C21甾體苷（cynascyroside A-E），而潮風草中C21甾體之外的化學成分未見報道。為了進一步探索潮風草中C21甾體以外的活性物質(zhì)，對其根莖的乙醇提取物進行系統(tǒng)的化學成分研究。在此，本文報道所分離鑒定的11個非C21甾體類化合物，分別屬于苯乙酮類、植物甾醇類、簡單有機酸類、五環(huán)三萜及神經(jīng)鞘脂類等。以上所有化合物均為首次從潮風草中分得（結(jié)構(gòu)見圖1）。

圖1 潮風草根莖中分離鑒定的化合物結(jié)構(gòu)

1 儀器與材料

Brucker ACF-300、500型核磁共振儀；Agilent 1100LC-ESI/MS型液-質(zhì)聯(lián)用儀；薄層層析硅膠GF254和柱層析硅膠100～200目和200～300目均為青島海洋化工集團公司生產(chǎn)；羥丙基葡聚糖凝膠（Sephadex LH-20，Pharmacia公司）；MCIgel-CHP-20P分離填料（日本三菱化工）；所用試劑均為分析純。

潮風草的根莖于2012年8月采自吉林省長白山地區(qū)，經(jīng)本文通訊作者張朝鳳鑒定原植物為蘿藦科潮風草Cynanchum ascyrifolium，憑證標本（CFC-201208）存放于中國藥科大學生藥學研究室。

2 提取分離

潮風草干燥根莖（7.2 kg）粉碎，以80%乙醇加熱回流提取3次，每次2 h，回收乙醇溶劑，濃縮得到總浸膏1.67 kg。將總浸膏混懸在水里，用乙酸乙酯進行萃取，減壓回收溶劑后得到浸膏285.8 g。取乙酸乙酯萃取物250 g用硅膠柱色譜法進行分離，用二氯甲烷-甲醇（100∶0～0∶1）梯度洗脫收集得到6個流分（Fr.）A～F和化合物1的粗品，粗品經(jīng)重結(jié)晶純化得到化合物1（1.035 g）；Fr.B經(jīng)硅膠柱色譜，采用石油醚-乙酸乙酯（5∶1～3∶1）梯度洗脫得到化合物2（698 mg）、3（604 mg）、7（94 mg），石油醚-丙酮（3∶1）洗脫得到化合物4（25 mg）、5（5 mg）；Fr.C經(jīng)MCI-gel（80%甲醇-水）色譜柱后，石油醚-乙酸乙酯（3∶1～1∶1）梯度洗脫得到化合物10（77 mg）；用二氯甲烷-甲醇（20∶1～5∶1）洗脫，得到化合物6（14 mg）和8（189 mg）；二氯甲烷-甲醇（20∶1～8∶1）梯度洗脫，再經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜，二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫得化合物9（13 mg）和11（22 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1無色針晶 （石油醚-乙酸乙酯）；mp：222℃～225℃。1H-NMR（CDCl3，500 MHz）δ：3.48（1H，brd，J=6.0 Hz，H-3），5.55（1H，brd，J=6.0 Hz，H-6），1.04（3H，s，H-23），1.13（3H，s，H-24），0.89（3H，s，H-25），0.81（3H，s，H-26），1.25（3H，s，H-27），0.94（3H，s，H-28），0.88（3H，d，J=6.5 Hz，H-29），0.91（3H，d，J=6.0 Hz，H-30）；13C-NMR（CDCl3，125 MHz）δ：20.8（C-1），28.8（C-2），76.5（C-3），41.3（C-4），140.7（C-5），121.4（C-6），22.6（C-7），44.6（C-8），34.5（C-9），37.2（C-10），30.6（C-11），30.7（C-12），39.3（C-13），39.6（C-14），29.4（C-15），32.7（C-16），39.9（C-17），54.5（C-18），48.2（C-19），35.9（C-20），27.8（C-21），42.5（C-22），27.2（C-23），25.4（C-24），28.8（C-25），15.4（C-26），16.8（C-27），33.3（C-28），21.2（C-29），23.4（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻[5]基本一致，故鑒定化合物1為華北白前醇。

化合物2白色片狀結(jié)晶（石油醚-乙酸乙酯）；mp：109℃～110℃。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.88（2H，d，J=8.0 Hz），6.84（2H，d，J=9.0 Hz），2.51（3H，s）。以上數(shù)據(jù)與文獻[6]基本一致，故鑒定為對羥基苯乙酮。

化合物3白色片狀結(jié)晶（石油醚-乙酸乙酯）；mp：142℃～143℃。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：6.24（1H，d，J=2.0 Hz），6.35（1H，dd，J=8.5，2.0 Hz），7.70（1H，d，J=8.5 Hz），2.51（3H，s）。以上數(shù)據(jù)與文獻[6]基本一致，故鑒定為2，4-二羥基苯乙酮。

化合物4無色針晶（石油醚-丙酮）；mp：113℃～115℃。1H-NMR（CDCl3，500 MHz）δ：7.53～7.54（2H，m），6.95（1H，d，J=8.5 Hz），6.15（1H，s），3.95（3H，s），2.55（3H，s）。以上數(shù)據(jù)與文獻[6]基本一致，故鑒定為4-羥基-3-甲氧基苯乙酮。

化合物5無色鱗片狀晶體 （石油醚-丙酮）；ESI-MS m/z 429.5[M+H]+，ESI-MS m/z 463.5[M+Cl]-。1HNMR（CDCl3，300 MHz）δ：0.74（3H，s，H-18），0.80（3H，s，H-26），0.82（3H，s，H-27），0.84（3H，s，H-29），0.92（3H，d，J=6.3 Hz，H-21），1.37（3H，s，H-19），4.34（1H，brs，H-6）and 5.81（1H，s，H-4）；13C-NMR（CDCl3，75 MHz）δ：37.1（C-1），34.2（C-2），200.2（C-3），126.2（C-4），168.3（C-5），73.2（C-6），38.6（C-7），29.7（C-8），53.6（C-9），38.6（C-10），20.9（C-11），39.6（C-12），42.5（C-13），55.9（C-14），24.1（C-15），28.1（C-16），56.0（C-17），12.0（C-18），19.4（C-19），36.1（C-20），18.7（C-21），33.9（C-22），26.1（C-23），45.8（C-24），29.2（C-25），19.7（C-26），19.0（C-27），23.1（C-28），11.9（C-29）。以上數(shù)據(jù)與文獻[7]基本一致，故鑒定為6β-羥基-4-烯-3-豆甾烷酮。

化合物6無色針晶（二氯甲烷-甲醇）；mp：248℃～252℃。1H-NMR（C5D5N，500 MHz）δ：5.15（1H，s，H-3），4.15（1H，s，H-6），2.95（1H，t，J=12.5 Hz，H-4a），2.08（1H，m，overlap，H-4b），0.75（3H，s，H-18），0.82（3H，t，J=7.5 Hz，H-29），0.87（6H，d，J=7.0 Hz，H-26，27），0.99（3H，m，H-21），1.65（3H，s，H-19）；13C-NMR（C5D5N，125 MHz）δ：32.5（C-1），33.3（C-2），67.4（C-3），42.9（C-4），75.9（C-5），76.3（C-6），35.7（C-7），31.2（C-8），45.9（C-9），39.1（C-10），21.8（C-11），40.7（C-12），43.1（C-13），56.6（C-14），24.6（C-15），28.6（C-16），56.6（C-17），12.1（C-18），17.2（C-19），36.5（C-20），19.0（C-21），34.3（C-22），26.5（C-23），46.1（C-24），29.5（C-25），19.2（C-26），19.9（C-27），23.4（C-28），12.4（C-29）。以上數(shù)據(jù)與文獻[8]基本一致，故鑒定為3β，5α，6β-三羥基豆甾烷。

化合物7無色針狀結(jié)晶 （丙酮）；mp：138℃～140℃。紫外燈下無熒光無暗斑，5%香草醛-濃硫酸加熱顯紫紅色，與β-谷甾醇標準品共薄層，三個溶劑系統(tǒng)，Rf值及斑點顏色均一致。故確定該化合物為β-谷甾醇。

化合物8白色粉末（甲醇）；mp：296℃～298℃。5%香草醛-濃硫酸加熱顯紫紅色，與β-胡蘿卜苷標準品共薄層，三個溶劑系統(tǒng)，Rf值及斑點顏色均一致。故確定該化合物為β-胡蘿卜苷。

化合物9無色針晶 （石油醚-乙酸乙酯）；mp：214℃～216℃。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.87（2H，d，J=8.5 Hz，H-2，6），6.81（2H，d，J=8.4 Hz，H-3，5）；13CNMR（CD3OD，125 MHz）δ：170.5（C=O），163.8（C-4），133.4（C-2，6），123.2（C-1），116.5（C-3，5）。以上數(shù)據(jù)與文獻[9]基本一致，故鑒定為對羥基苯甲酸。

化合物10白色粉末 （二氯甲烷-甲醇）；ESIMS m/z 166.8[M-H]+。1H-NMR（C5D5N，300 MHz）δ：8.17（1H，dd，J=8.1，1.8 Hz，H-6），8.08（1H，d，J=1.8 Hz，H-2），7.30（1H，d，J=8.1 Hz，H-5），3.74（3H，s，-OCH3）；13C-NMR（C5D5N，75 MHz）δ：169.1（C=O），123.1（C-1），115.8（C-2），149.0（C-3），152.4（C-4），113.6（C-5），124.6（C-6），55.6（-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻[10]基本一致，故鑒定為3，4-二羥基苯甲酸甲酯。

化合物11白色粉末 （二氯甲烷-丙酮）；mp：138℃～139℃。1H-NMR（C5D5N，500 MHz）δ：8.60（1H，m，N-H），5.52（lH，m，H-2），4.63（1H，m，H-3），4.52（1H，m，H-4），4.44（1H，m，H-2′），4.37（1H，m，H-la），4.30（1H，m，H-lb），0.86（6H，m，H-18 and 24′），1.25-1.30（48H，m，H-13～17 and H-5′～23′）；13C-NMR（C5D5N，125 MHz）δ：62.0（C-1），52.9（C-2），76.7（C-3），72.9（C-4），34.1（C-5），26.6（C-6），32.1（C-7），26.7（C-8），32.9（C-9），130.6（C-10），130.8（C-11），33.3（C-12），29.5～30.3（C-13～16），22.9（C-17），14.2（C-18），175.1（C-1′），72.4（C-2′），35.7（C-3′），25.8（C-4′），29.5～30.3（C-5′～22′），22.9（C-23′），14.2（C-24′）。以上數(shù)據(jù)與文獻[11]基本一致，故鑒定為 （2S，3S，4R，10E）-2-[（2′R）-2′-hy-droxytetracosanoyl amino]-10-octadecene-1，3，4-triol。

4 討 論

潮風草為民間藥用植物，功效與傳統(tǒng)中藥白薇類似。C21甾體類化合物為白薇的主要活性成分，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、退熱和抗腫瘤等藥理活性[12]。已有文獻報道，潮風草含有C21甾體類化合物，但未見到相關(guān)文獻報道其他類化學成分。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)潮風草的根莖乙醇提取物具有較好的抗炎作用，為了闡明其抗炎作用的基礎(chǔ)，本課題對潮風草的化學成分進行系統(tǒng)的研究，從其乙酸乙酯部位分離得到植物甾醇類、苯乙酮類、簡單有機酸類、五環(huán)三萜及神經(jīng)鞘脂類等各種不同類型的化合物。根據(jù)文獻報道，植物甾醇作為一種藥食同源的甾體類化合物具有明顯的免疫調(diào)節(jié)及抗炎作用[13-14]，能夠調(diào)節(jié)輔助T細胞的免疫應答[15]；與華北白前醇相同結(jié)構(gòu)類型的羽扇豆醇型三萜能夠明顯的抑制前列腺炎癥[16]；苯乙酮類及簡單有機酸類化合物能夠抑制LPS誘導巨噬細胞中TNF-α因子的表達，并呈現(xiàn)出較好的劑量依賴性[17-18]；表明潮風草抗炎活性可能與其所含以上多種成分有關(guān)。本研究對潮風草發(fā)揮抗炎作用的物質(zhì)基礎(chǔ)進行了探討，為其合理的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

[1] 中國科學院植物研究所.中國高等植物圖鑒 （第三冊）[M].北京：科學出版社，1983：478.

[2] 孫得峰，孫敬勇，范惠霞，等.蘿藦科植物的C21甾體苷類成分研究進展[J].中草藥，2014，45（10）：1491-5.

[3] Yeo H,Kim KW,Kim J,et al.Steroidal glycosides of the 14,15-seco-18-nor-pregnane seriesfrom Cy-nanchum ascyrifolium[J].Phytochemistry,1998,49(4): 1129-33.

[4] Yeo H,Choi YH,Kim J.New pregnane glycosides from Cynanchum ascyrifolium [J].Chem Pharm Bull (Tokyo),2002,50(6):847-9.

[5] Lou HX,Li X,Onda M,et al.Stereochemistry of nov-el triterpenes from Cynanchum hancokianum[J].Chem Pharm Bull(Tokyo),1991,39(9):2271-6.

[6] 陳 艷，徐必學，梁光義，等.隔山消化學成分的研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2008，20（6）：1012-3，1021.

[7] Kan SQ,Chen GY,Han CR,et al.Chemical con-stituents from the roots of Xanthium sibiricum[J].Nat Prod Res,2011,25(13):1243-9.

[8] 張 偉，宋啟示.貴州大方林下栽培天麻的化學成分研究[J].中草藥，2010，41（11）：1782-5.

[9] 王暐，楊崇仁，張穎君.草果果實中的酚性成分[J].云南植物研究，2009，31（3）：284-8.

[10] Bruno R,Marta M,Barbara B,et al.Structure-prop-erty-activity relationship of phenolic acids and deriva-tives.Protocatechuic acid alkyl esters[J].J Agric Food Chem,2010,58(11):6986-93.

[11] Zhan ZJ,Sun HD,Wu HM,et al.Chemical compo-nents from the fungus Engleromyces goetzei[J].Acta Bot Sin,2003,45(2):248-52.

[12] 鄭兆廣，柳潤輝，張 川，等.蔓生白薇中的C21甾苷類成分[J].中國天然藥物，2006，4（5）：338-43.

[13] 程麗艷，鄭曉亮，屠凌嵐，等.植物甾醇對非細菌性前列腺炎治療作用的實驗研究 [J].中國臨床藥理學與治療學，2010，15（9）：991-6.

[14] Gabay O,Sanchez C,Salvat C.Stigmasterol:a phy-tosterol with potential anti-osteoarthritic properties[J]. Osteoarthritis Cartilage,2010,18(1):106-16.

[15] Laura CB,Joan CE,Sonia B,et al.Dietary phytos-terols modulate T-helper immune response but do not induce apparent anti-inflammatory effects in a mouse model of acute,aseptic inflammation [J].Life Sci, 2007,80(21):1951-6.

[16] 黃 馳，Tunon H，Bohlin L.睡菜中的抗炎成分[J].藥學學報，1995，30（8）：621-6.

[17] Wu P,Ye DY,Zhang DJ,et al.Dual effect of 3,4-dihydroxyacetophenone on LPS-induced apoptosis in RAW 264.7 cells by modulating the production of TNF-α[J].華中科技大學學報[醫(yī)學（英德文）版]，2005，25（2）：131-4.

[18] 黃 洋，邵慧凱，李 康，等.小葉榕葉抗炎成分分析及活性評價[J].中成藥，2014，36（6）：1227-33.

Non-C21Steroidal Constituents from the Roots of Cynanchum ascyrifolium*

LIU Xiu-fen,DING Mei-ling,ZHANG Chao-feng**,ZHANG Mian,XU Xiang-hong
Research Department of Pharmacognosy,China Pharmaceutical University,Nanjing 211198

Objective:To study the non-C21steroidal constituents of Cynanchum ascyrifolium(Asclepi-adaceae)and clarify the material basis of anti-inflammatory effects.Methods:Various column chromato-graphic techniques were used to isolate and purify the chemical constituents,their physico-chemical prop-erties and spectral data were employed to elucidate their structures.Results:Eleven known compounds were isolated from the roots of C.ascyrifolium and identified as:hancockinol (1),4-hydroxyacetophenone (2),2,4-dihydroxyacetophenone(3),4-hydroxy-3-methoxy acetophenone(4),stigmast-4-en-6β-ol-3-one(5), 3β,5α,6β-trihydroxylated sterols(6),β-sitosterol (7),β-daucosterin(8),4-hydroxybenzoic acid(9)methyl 3,4-dihydroxy benzoate(10)and(2S,3S,4R,10E)-2-[(2′R)-2′-hydroxytetracosanoyl amino)-10-octadecene-1,3,4-triol(11).Conclusion:The contents of pentacyclic triterpenes and acetophenons are higher,they may be the anti-inflammatory constituents,and all these substance are isolated firstly from this species.

Asclepiadaceae;Cynanchum ascyrifolium;Acetophenones;Phytosterols

R284.2

A

1673-7806（2015）02-123-04

國家新藥創(chuàng)新重大項目中藥化學成分庫建設(shè)（No.2011ZX09307-002-02）

劉秀芬，女，碩士 E-mail:lxf3897@126.com

* *通訊作者張朝鳳，女，副研究員 E-mail:njchaofeng@126.com

2015-01-14

2015-01-28?