許丹妮，楊海玲，甘靜玉，林 婕，黃文男

(1.廣西民族師范學(xué)院，廣西崇左 532200；2.廣西高校桂西南特色植物資源化學(xué)重點實驗室培育基地，廣西崇左 532200；3.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西南寧 530001；4.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川成都 610072)

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姜黃酒炙前后多糖含量比較研究

許丹妮1，2，楊海玲3，4*，甘靜玉3，林 婕3，黃文男3

(1.廣西民族師范學(xué)院，廣西崇左 532200；2.廣西高校桂西南特色植物資源化學(xué)重點實驗室培育基地，廣西崇左 532200；3.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西南寧 530001；4.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川成都 610072)

[目的]比較姜黃酒炙前后多糖含量。[方法]采用苯酚-硫酸法測定姜黃酒炙前后多糖含量。[結(jié)果]葡萄糖質(zhì)量濃度在10～70 μg/ml時呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，平均回收率99.67%，RSD為1.33%；姜黃多糖的含量為酒炙品(1.38%)>生品(0.68%)。[結(jié)論]該方法簡便、可行，可用于姜黃多糖成分的提取及含量測定。

姜黃；酒炙；多糖；含量；苯酚-硫酸法

姜黃(CurcumalongaL.)為姜科植物姜黃的根莖，具有行氣破瘀、通經(jīng)止痛的功效。近年來，多糖成分研究在中藥、天然藥物中已成為了研究的熱點?，F(xiàn)代藥理研究表明，多糖具有免疫調(diào)節(jié)[1]、抗腫瘤[2]、抗氧化[3]、降血糖[4]、降血脂[5]、鎮(zhèn)痛[6]等廣泛的藥理作用。姜黃中含有多糖類成分[7]，但有關(guān)姜黃酒炙前后多糖含量的測定尚未見報道。因此筆者采用苯酚-硫酸法[8]對姜黃生品、酒炙品中多糖含量進(jìn)行初步研究，以期為姜黃飲片炮制、臨床應(yīng)用、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定等提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1研究對象。姜黃購于玉林藥材市場，經(jīng)廣西中醫(yī)學(xué)院韋松基教授鑒定為姜科植物姜黃(CurcumalongaL.)的干燥根莖。

1.1.2試劑。 黃酒(浙江古泉釀酒有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號20140119)，米醋(山西水塔醋業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號20140320)。苯酚(廣東省化學(xué)試劑工程技術(shù)研究開發(fā)中心，生產(chǎn)批號20140317)，硫酸(廣東汕頭市西隴化工廠，生產(chǎn)批號20120309)，葡萄糖(天津市大茂化學(xué)試劑廠，生產(chǎn)批號20131219)，均為分析純。

1.1.3儀器。 pl203型電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)，UV-1800型紫外分光光度計(島津企業(yè)管理中國有限公司)。

1.2 方法

1.2.1姜黃炮制品的制備。

1.2.1.1生品。取原藥材，浸泡30 min，悶潤8 h，切成2 mm厚的薄片，干燥，篩去碎屑作為生品。

1.2.1.2酒炙品。取生品(飲片)，取定量黃酒，用適量蒸餾水稀釋混勻后，加入飲片中拌勻,稍悶潤，待酒被吸盡后，置預(yù)熱電熱爐內(nèi)，用文火(600 W)，加熱翻炒(5 min)，炒至亮黃色略帶焦斑時，取出，放涼，稱重，收率為98%。姜黃每100 kg，用米醋 10 kg。

1.2.2姜黃不同炮制品多糖溶液的制備。稱取各飲片5.0 g于50 ml水中浸泡30 min后加熱，30 min后收集提取液，藥渣中加50 ml水，繼續(xù)加熱，30 min后收集提取液，如此操作反復(fù)2次，合并提取液，濃縮后放冷，于25 ml容量瓶中定容，備用。

1.2.3葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制。稱取無水葡萄糖0.10 g，精密稱定，置于100 ml容量瓶中，加水溶解并定容，配制成濃度1 mg/ml的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，備用。

1.2.4姜黃多糖顯色條件單因素試驗。

1.2.4.1顯色時間的選擇。吸取2.0 ml姜黃生品多糖樣品溶液7份，分別置于不同編號的試管中，加入苯酚(濃度為5 %)1.0 ml、濃硫酸5.0 ml迅速振蕩搖勻，于常溫下分別顯色5、10、15、20、25、30、35 min。以2.0 ml蒸餾水按同樣顯色操作為空白，在波長490 nm處測定吸光度值，以評價顯色時間對多糖含量測定的影響。

1.2.4.2苯酚用量的選擇。吸取2.0 ml姜黃生品多糖樣品溶液5份，分別置于不同編號的試管中，依次加入苯酚0.2、0.6、1.0、1.4、1.8 ml和濃硫酸5 ml，迅速振蕩搖勻，于常溫下顯色30 min。在波長490 nm處測定吸光度值，以評價苯酚用量對多糖含量測定的影響。

1.2.4.3濃硫酸用量的選擇。吸取2.0 ml姜黃生品多糖樣品溶液5份，分別置于不同編號的試管中，加入苯酚0.6 ml，再依次加入濃硫酸4.0、5.0、6.0、7.0、8.0 ml迅速振蕩搖勻，于常溫下顯色30 min。在波長490 nm處測定吸光度值，以評價濃硫酸用量對多糖含量測定的影響。

1.2.5方法學(xué)考察。

1.2.5.1線性關(guān)系的考察。精密吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲備液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0和3.5 ml分別置于50 ml容量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻，即得10、20、30、40、50、60、70 μg/ml標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液，在最佳顯色條件顯色。以2.0 ml蒸餾水按同樣方法顯色后作為空白，在波長490 nm處測定各標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.5.2精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性試驗。精密吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液(濃度為40 μg/ml)6份，測定吸光度。取生品 6份，每份約 5.0 g，精密稱定，按多糖供試品的制備方法制備供試液,分別精密吸取2 ml，按照“1.2.5.1”項下操作,測定吸光度。精密吸取姜黃生品多糖樣品溶液，在顯色后的0、10、20、30、40、90 min測得吸光度。

1.2.5.3加樣回收率試驗。分別精密量取姜黃醋炙品每份2.5 g,共6份，分別加入葡萄糖對照品34.5 mg,按照“1.2.2”項制備成多糖溶液，在最佳顯色條件顯色，測定吸光度，計算回收率。

1.2.6姜黃酒炙前后多糖含量測定。分別精密吸取各樣品溶液2.0 ml，在最佳顯色條件顯色，平行試驗3份。測定吸光度，計算其含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 姜黃多糖顯色條件單因素試驗

2.1.1顯色時間的選擇。由圖1可見，顯色時間5～10 min吸光度呈現(xiàn)下降趨勢，10～15 min開始增大，15～25 min又開始下降，25～30 min又開始上升，30 min時吸光度最大，之后又開始下降，35 min時吸光度最低，故選擇最佳顯色時間為30 min。

2.1.2苯酚用量的選擇。從圖2可以看出，苯酚用量在0.2～0.6 ml，吸光度呈現(xiàn)上升趨勢，0.6～1.8 ml則隨著用量的增加反而下降，在0.6 ml時吸光度最大，故該試驗選擇苯酚最佳用量為0.6 ml。

2.1.3濃硫酸用量的選擇。由圖3可見，濃硫酸加入量4.0～5.0 ml時吸光度逐漸增大，5.0～8.0 ml時吸光度又逐漸下降，濃硫酸加入量為5.0 ml時吸光度最大，故該試驗中顯色濃硫酸最佳用量為5.0 ml。

2.2 方法學(xué)考察

2.2.1線性關(guān)系的考察。以吸光度值(Y)對葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(X)進(jìn)行線性回歸(圖4)，得回歸方程為Y=0.012 9X+0.016 1(r=0.998 5)，表明葡萄糖在10～70 μg/ml時與吸光度值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.2.2精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性試驗。精密度試驗結(jié)果RSD為1.56%，表明儀器精密度較好。重復(fù)性試驗結(jié)果RSD為1.71%,表明該儀器的重現(xiàn)性良好。穩(wěn)定性試驗中，吸光度在0～90 min內(nèi)變化不大，RSD為1.14%，表明姜黃生品多糖樣品溶液在90 min內(nèi)顯色反應(yīng)的穩(wěn)定性較好。

2.2.3加樣回收率試驗。按照“1.2.5.3”項操作得出多糖平均回收率為99.67%，RSD為1.33%(表1)。

2.3 姜黃酒炙前后多糖含量測定在最佳顯色條件下測定姜黃、酒炙姜黃樣品的吸光度，計算其姜黃酒炙前后其含量分別為生品0.68%、酒炙品1.38%(表2)。

表1 姜黃多糖加樣回收率試驗(n=6)

表2 姜黃酒炙前后多糖含量測定(n=3)

3 結(jié)論與討論

采用苯酚-硫酸法分析姜黃生品、酒炙品中多糖含量，得出姜黃酒炙炮制前后多糖的含量高低為酒炙品(1.38%)>生品(0.68%)，進(jìn)一步比較發(fā)現(xiàn)，姜黃經(jīng)加入黃酒炮制后多糖含量與生品比較，約提高1倍。酒炙品明顯高于生品，可能是酒炙提高了多糖含量的溶出，這提示輔料酒可能對姜黃多糖類成分含量有一定影響，其酒炙方法及工藝還有待進(jìn)一步結(jié)合藥理藥效作用進(jìn)行研究。

該試驗采用熱水提法提取姜黃多糖，運(yùn)用苯酚-硫酸法測定其含量，該方法簡便、可行，可用于姜黃多糖成分的提取及含量測定。

[1] 陳璋輝，陳云龍，吳濤，等．細(xì)莖石斛多糖 DMP4a-1的結(jié)構(gòu)特性及免疫活性研究[J]．中國藥學(xué)雜志，2005，40(23):1781．

[2] 何鐵光,楊麗濤，李揚(yáng)瑞，等．鐵皮石斛原球莖多糖 DCPP1a-1的理化性質(zhì)及抗腫瘤活性[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2007，19(4):578．

[3] 鮑素華，査學(xué)強(qiáng)，郝杰，等．不同分子量鐵皮石斛多糖體外抗氧化活性研究[J].食品科學(xué)，2009，30(21):123．

[4] ZHAO Y P，SON Y O，KIM S S，et al．Anti hyperglycemic activity of poly-saccharides from Dendrobium chtysotoxum Lindl[J].Biochemistry and Molecular Biology，2007，40(5):670．

[5] 孔慶勝, 王彥英，蔣瀅.南瓜多糖的分離、純化及其降血脂作用[J].中國生化藥物雜志,2000,21(3):130.

[6] 李偉平，何良艷，馬哲龍,等.土牛膝多糖抗炎鎮(zhèn)痛作用的研究[J] .中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2012,30(4):747.

[7] 韓 婷, 宓鶴鳴.姜黃的化學(xué)成分及藥理活性研究進(jìn)展[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報,2001,17(2):95.

[8] 徐晶， 姜瑞平， 夏光輝，等.苯酚-硫酸法測定金頂側(cè)耳中多糖含量[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,39(5):2649.

Study on the Contents of Polysaccharide inCurcumalongaL. before and after Wine Sauteed

XU Dan-ni1，2，YANG Hai-ling3,4*,GAN Jing-yu3et al

(1.Guangxi Normal University for Nationalities, Congzuo, Guangxi 532200;2.Guangxi Colleges and Universities Key Laboratory Breeding Base of Chemistry of Guangxi Southwest Plant Resources,Congzuo, Guangxi 532200;3.Guangxi Traditional Chinese Medical University, Nanning, Guangxi 530001;4. Chengdu University of TCM,Chengdu,Sichuan 610072)

[Objective] The research aimed to compare the contents of polysaccharide inCurcumalongaL. before and after wine sauteed. [Method]The contents of polysaccharide inCurcumalongaL. before and after wine sauteed were determined by phenol-sulfuric acid method.[Result]The concentrations of glucose between 10-70 μg/ml were good in linear relationship. The average recovery was 99.67% withRSD1.33%,and the contents of polysaccharide inCurcumalongaL. before and after wine sauteed were as follows:wine sauteed (1.38%) > raw products (0.68%).[Conclusion]This method was simple,convenient and quit stable,so it can be used for the extraction and detection of polysaccharide inCurcumalongaL..

CurcumalongaL.;Wine sauteed;Polysaccharide;Content;Phenol-sulfuric acid method

廣西高等學(xué)?？茖W(xué)技術(shù)研究項目(LX2014170)； 廣西中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)博士點建設(shè)工程開放課題(201410-14)；廣西民族師范學(xué)院校級項目(2014YB001)。

許丹妮(1983-)，女，壯族，廣西崇左人，講師，碩士，從事中草藥的研究及新藥開發(fā)工作。*通訊作者，講師，在讀博士，從事中藥炮制機(jī)理及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

2014-12-02

S 567

A

0517-6611(2015)02-094-03