孫媛媛 謝 軍 鮑揚(yáng)漪 李玉芝

老年原發(fā)免疫性血小板減少癥患者治療前后T淋巴細(xì)胞亞群的臨床研究

孫媛媛 謝 軍 鮑揚(yáng)漪 李玉芝

目的 檢測(cè)老年原發(fā)免疫性血小板減少癥(ITP)患者治療前后T淋巴細(xì)胞亞群的動(dòng)態(tài)變化，探討其在ITP發(fā)生發(fā)展中的作用。方法采用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定ITP患者治療前后及正常對(duì)照組外周血T淋巴細(xì)胞亞群的水平。結(jié)果ITP患者治療前后T淋巴細(xì)胞絕對(duì)值、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD25+T淋巴細(xì)胞比例及CD4+/CD8+比值分別為(0.83±0.16)vs(1.74±0.36)、(71.71±1.07)%vs(72.69±1.35)%、(41.78±0.71)%vs(42.46±1.20)%、(29.67±0.97)%vs(28.56±1.75)%、(8.76±0.56)%vs(9.39±1.26)%、(1.42±0.07)vs(1.49±0.13)，CD8+T淋巴細(xì)胞比例治療后顯著降低，其余均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論T淋巴細(xì)胞亞群的異常改變，破壞自身免疫，與病情相關(guān)，可指導(dǎo)臨床治療，并作為評(píng)估預(yù)后的參考指標(biāo)。

免疫性血小板減少癥；T淋巴細(xì)胞亞群；調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞

原發(fā)免疫性血小板減少癥(immune thrombocytopenia,ITP)是一種獲得性自身免疫性出血性疾病，多發(fā)于兒童和育齡期婦女，但60歲以上老年人是繼上述人群之后的又一高發(fā)人群[1]。該病主要由體液和細(xì)胞免疫介導(dǎo)的血小板過(guò)度破壞和血小板生成不足所致。為探討老年ITP患者T淋巴細(xì)胞免疫功能的變化，本文檢測(cè)36例老年ITP患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群在病程中的變化，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2012年1月至2014年10月我科初診的36 例ITP患者(ITP組)，男女各18例，年齡60～85歲，平均73.24歲，治療前血小板計(jì)數(shù)為(2～27)×109/L?；颊咴\斷及療效判斷參照美國(guó)成人免疫性血小板減少癥實(shí)踐指南及中國(guó)專家共識(shí)[2]。ITP組中，32例均為經(jīng)地塞米松(40 mg/次，1次/d，連用4 d)沖擊治療有效者，剩余4例為激素治療無(wú)效者。對(duì)照組30例隨機(jī)選自同期健康體檢人群，男女各15 例，年齡60～83歲，平均71.56歲，血小板計(jì)數(shù)均≥100×109/L。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 試劑與儀器 流式細(xì)胞分析儀FACSCalibur型購(gòu)自美國(guó)BD公司，T淋巴細(xì)胞亞群試劑即鼠抗人單克隆抗體CD3-FITC/CD45-Percp/CD4-APC/CD8-PE/CD25-PE由美國(guó)BD公司提供。

1.2.2 T淋巴細(xì)胞亞群測(cè)定 采集ITP組患者治療前及治療后5～7天時(shí)晨起空腹靜脈血2 mL，EDTA抗凝，相同方法采集對(duì)照組外周血2 mL。取50 μL外周血分別加入鼠抗人單克隆抗體CD3-FITC、CD45-Percp、CD4-APC、CD8-PE、CD25-PE 20 μL，室溫避光孵育20 min，再加入溶血素450 μL，室溫避光孵育10 min，用PBS洗滌2次，重懸細(xì)胞上FACSCalibur流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 兩組治療前外周血T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)比較 ITP組治療前T淋巴細(xì)胞絕對(duì)值及CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞比例分別為(0.83±0.16)×109/L、(71.71±1.07)%、(41.78±0.71)%、(29.67±0.97)%，CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值為(1.42±0.07)；相應(yīng)地，對(duì)照組外周血T淋巴細(xì)胞亞群分別為(1.61±0.27)×109/L、(72.63±1.61)%、(42.73±1.75)%、(28.93±1.70)%、(1.48±0.13)。治療前，ITP組T淋巴細(xì)胞絕對(duì)值、CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞比例低于對(duì)照組，CD8+T淋巴細(xì)胞比例高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組治療前外周血T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)

2.2 ITP患者治療前后外周血T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)比較 ITP患者經(jīng)地塞米松沖擊治療后，T淋巴細(xì)胞絕對(duì)值、CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞比例分別為(1.74±0.36)×109/L、(72.69±1.35)%、(42.46±1.20)%、(28.56±1.75)%，CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值為(1.49±0.13)，治療后T淋巴細(xì)胞絕對(duì)值、CD3+T淋巴細(xì)胞、CD4+T淋巴細(xì)胞均明顯升高，CD8+T淋巴細(xì)胞明顯降低，CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 ITP患者治療前后外周血T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)

2.3 ITP患者治療前后CD4+CD25+T淋巴細(xì)胞數(shù)量比較 對(duì)照組患者CD4+CD25+T淋巴細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例為(9.52±1.02)%，而ITP患者為(8.76±0.56)%，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。經(jīng)過(guò)地塞米松治療后，ITP組患者CD4+CD25+T細(xì)胞比例增加至(9.39±1.26)%，較治療前顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.4 ITP 患者治療前后血小板數(shù)比較 ITP患者治療前血小板計(jì)數(shù)為為(10.58±8.79)×109/L，治療后為(70.43±22.38)×109/L，治療前后血小板計(jì)數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=17.41，P<0.05)。治療有效的32例患者中，T淋巴細(xì)胞亞群恢復(fù)接近正常，而治療無(wú)效4例的患者T淋巴細(xì)胞亞群無(wú)變化。

3 討論

ITP是以外周血血小板數(shù)目減少、壽命縮短、骨髓巨核細(xì)胞代償性增多合并成熟障礙為表現(xiàn)的自身免疫性疾病。ITP的發(fā)生不僅存在B淋巴細(xì)胞異常, 也存在T淋巴細(xì)胞的異常[3]，T、B淋巴細(xì)胞共同參與了ITP的發(fā)病。ITP是一種免疫介導(dǎo)的血小板減少綜合征，發(fā)病機(jī)制不明，主要與T淋巴細(xì)胞及B淋巴細(xì)胞異常、巨核細(xì)胞成熟障礙及血小板破壞加速等方面有關(guān)[4]。T 淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)參與了ITP的發(fā)病，機(jī)體免疫功能紊亂是ITP發(fā)病的主要原因[5]。

ITP患者體內(nèi)存在著多種異常T淋巴細(xì)胞，其中包括CD4+T淋巴細(xì)胞降低，并促進(jìn)自身反應(yīng)性B淋巴細(xì)胞增殖，產(chǎn)生抗血小板抗體，進(jìn)而破壞血小板。大多數(shù)ITP患者血清中血小板表面包被抗體增加，CD8+T淋巴細(xì)胞可通過(guò)細(xì)胞毒性作用將其破壞。因此，T淋巴細(xì)胞是體液與細(xì)胞免疫的重要環(huán)節(jié)，CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值的動(dòng)態(tài)平衡是維持免疫環(huán)境穩(wěn)定的中心環(huán)節(jié)，王厚才等[6]認(rèn)為T 淋巴細(xì)胞異常導(dǎo)致B淋巴細(xì)胞激活可能是ITP真正的發(fā)病機(jī)制。

本研究顯示ITP患者的確存在著T淋巴細(xì)胞亞群的異常改變，與ITP患者治療前相比正常組的T淋巴細(xì)胞絕對(duì)值、CD3+、CD4+、CD4+CD25+T淋巴細(xì)胞亞群比例及CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值均有不同程度下降，而CD8+T淋巴細(xì)胞比例顯著增高，充分說(shuō)明了T淋巴細(xì)胞亞群功能和比例失衡，T淋巴細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)機(jī)制的紊亂，在ITP的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起重要作用[7]。地塞米松治療有效的患者出現(xiàn)T淋巴細(xì)胞絕對(duì)值、CD3+、CD4+、CD4+CD25+T淋巴細(xì)胞數(shù)量及CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值升高及CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)量下降，提示地塞米松抑制了T淋巴細(xì)胞抗原的表達(dá)，對(duì)CD8+T淋巴細(xì)胞的抑制更為明顯。隨著免疫功能紊亂的糾正，T淋巴細(xì)胞絕對(duì)值、CD3+、CD4+、CD4+CD25+、CD8+T淋巴細(xì)胞水平恢復(fù)正常，血小板水平亦逐漸恢復(fù)，與相關(guān)研究一致[8]。由此得出，糾正異常的T淋巴細(xì)胞功能，對(duì)ITP的治療可能有幫助。

因此，通過(guò)檢測(cè)患者的外周血淋巴細(xì)胞亞群變化，可以對(duì)治療ITP疾病的療效觀察和預(yù)后發(fā)展趨勢(shì)做出相應(yīng)的判斷[9]。T淋巴細(xì)胞亞群的水平可作為評(píng)估患者病情、指導(dǎo)治療、判斷預(yù)后的指標(biāo)，有助于明確發(fā)病機(jī)制，對(duì)患者治療方案的選擇具有指導(dǎo)意義[10]。老年ITP患者有其特殊性，基礎(chǔ)疾病多，臟器功能差，對(duì)常規(guī)治療的反應(yīng)差。隨著對(duì)ITP免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制研究的深入，通過(guò)檢測(cè)患者的外周血淋巴細(xì)胞亞群變化，對(duì)治療ITP疾病的療效觀察和預(yù)后發(fā)展趨勢(shì)做出相應(yīng)的判斷，更好地運(yùn)用免疫手段來(lái)治療疾病，調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞亞群平衡可能成為治療ITP的新途徑。

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(2015-01-26收稿 2015-03-29修回)

The clinical study on T lymphocyte subsets before and after treatment in elderly patients with primary immune thrombocytopenia

SunYuanyuan,XieJun,BaoYangyi,etal

DepartmentofHematology,theFirstPeople'sHospitalofHefei,Hefei230061,China

Objective To detect the dynamic changes of T lymphocyte subsets before and after the treatment in elderly patients with primary immune thrombocytopenia, and to explore its role in the occurrence and development of ITP.MethodsThe levels of peripheral blood T lymphocyte subsets were measured before and after treatment in patients with ITP and normal control group by flow cytometry.ResultsBefore and after treatment in patients with ITP, the absolute value of T lymphocytes, CD3+, CD4+, CD8+, CD4+CD25+T lymphocyte ratio and the ratio of CD4+/CD8+was (0.83±0.16)vs(1.74±0.36), (71.71±1.07)%vs(72.69±1.35)%,(41.78±0.71)%vs(42.46±1.20)%, (29.67±0.97)%vs(28.56±1.75)%, (8.76±0.56)%vs(9.39±1.26)%, (1.42±0.07)vs(1.49±0.13), respectively; the proportion of CD8+T lymphocyte decreased significantly after the treatment; the rest were significantly increased, and the differences were statistically significant (P<0.05).ConclusionThe changes of T cell subsets and the breakdown of immune are related to the course of disease, which may guide the clinical treatment and serve as a reference index to evaluate the prognosis.

Immune thrombocytopenia;T lymphocyte subsets;Regulatory T cell

230061 安徽省合肥市第一人民醫(yī)院血液科

鮑揚(yáng)漪,ahmuxj@sina.com

10.3969/j.issn.1000-0399.2015.06.015