楊　黎， 戴　敏， 陳　鵬

(安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院　省部共建新安醫(yī)學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥　230012)

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丹皮酚對脂多糖誘導(dǎo)的大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞VCAM-1、TNF-α釋放及TLR4/NF-κB信號通路的影響

楊黎， 戴敏， 陳鵬

(安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院省部共建新安醫(yī)學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥230012)

[摘要]目的觀察丹皮酚(Paeonol，Pae)對脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)誘導(dǎo)的大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞(vascular endothelial cells，VECs)釋放血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附因子-1(vascular endothelial cell adhesion molecule-1，VCAM-1)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)及Toll樣受體-4(toll-like receptor，TLR4)/核因子κB(nuclear factor-kappa B，NF-κB)信號通路的影響，以闡明Pae抑制VECs黏附功能的分子機(jī)制。方法組織塊預(yù)消化貼壁法分離培養(yǎng)VECs，采用LPS誘導(dǎo)VECs炎性損傷；健康大鼠灌胃給予Pae制備含藥血清，反相高效液相色譜法測定血清Pae的含量；RT-PCR法檢測TLR4 mRNA的表達(dá)；凝膠遷移試驗(yàn)檢測NF-κB蛋白的表達(dá)；免疫組織化學(xué)檢測VCAM-1的表達(dá)；放射免疫法檢測TNF-α的表達(dá)。結(jié)果Pae含藥血清(2.5，5，10 μg/mL)作用于LPS誘導(dǎo)的VECs 24 h，可抑制VECs中TLR4 mRNA和NF-κB蛋白表達(dá)，以及VCAM-1和TNF-α分泌，呈現(xiàn)一定的劑量依賴性，其中Pae 10 μg/mL的抑制作用均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論P(yáng)ae降低TNF-α的釋放和VCAM-1水平，可能是通過下調(diào)LPS誘導(dǎo)的TLR4/NF-κB信號通路的活化而實(shí)現(xiàn)的。

[關(guān)鍵詞]丹皮酚；血管內(nèi)皮細(xì)胞；脂多糖；TLR4/NF-κB信號通路；VCAM-1；TNF-α

炎性反應(yīng)貫穿于動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)發(fā)生發(fā)展的全過程[1-2]，血管內(nèi)皮細(xì)胞(vascular endothelial cells，VECs)因炎性損傷而引起與單核細(xì)胞的黏附在其中扮演著重要的角色[3-4]。微生物感染作為AS的一種誘發(fā)因素受到了越來越多的重視，脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)是革蘭陰性菌外膜成分之一，是一種強(qiáng)烈的炎癥啟動因子，能與血漿中LPS結(jié)合蛋白結(jié)合成復(fù)合物，運(yùn)載至靶細(xì)胞，與靶細(xì)胞膜上的跨膜受體Toll樣受體4(toll-like receptor，TLR4)結(jié)合，繼而活化核因子κB(nuclear factor-kappa B，NF-κB),可導(dǎo)致一系列細(xì)胞因子和黏附分子的釋放，引起VECs的炎性損傷并促進(jìn)與單核細(xì)胞的黏附，引發(fā)AS的病理生理改變[5]。

丹皮酚(Paeonol，Pae)是毛茛科植物牡丹PaeoniaSuffruticoasAndr.的干燥根皮及蘿摩科植物徐長卿Cynanchumpaniculatum(Bge.)Kitag.的干燥根及根莖中的有效成分之一。本課題組前期研究[6]發(fā)現(xiàn)，Pae含藥血清具有顯著抗炎作用及抑制VECs的黏附功能，然而Pae對LPS誘導(dǎo)的黏附功能改變是否與對TLR4的表達(dá)有關(guān)？從而影響了LPS誘導(dǎo)VECs的NF-κB信號通路？調(diào)控腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)的內(nèi)源性釋放和黏附分子的表達(dá)？通過對以上問題的分析有助于進(jìn)一步確認(rèn)Pae對LPS誘導(dǎo)的VECs炎性反應(yīng)的調(diào)節(jié)位點(diǎn)，為Pae抗AS作用的炎癥機(jī)制提供依據(jù)。

1材料

1.1實(shí)驗(yàn)動物健康Sprague-Dawley(SD)大鼠，清潔級，雄性，體質(zhì)量(160±10)g，安徽醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供，生產(chǎn)許可證號：SCXK(皖)2011-0015。

1.2藥物及試劑Pae：安徽省宣城百草植物工貿(mào)有限公司，純度99%，批號 050321，用β-環(huán)糊精(中國醫(yī)藥集團(tuán)上海試劑公司)包合為Pae β-環(huán)糊精包合物，用0.5%羧甲基纖維素鈉(sodium carboxymethyl cellulose，CMC-Na)配制成混懸液灌胃用；特級胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)：天津市灝洋生物制品科技責(zé)任有限公司，批號 080705c199；LPS：美國Sigma公司，批號 080214；肝素鈉：江蘇萬邦生化醫(yī)藥股份有限公司，批號 0802114；核蛋白提取試劑盒、凝膠遷移試驗(yàn)(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)試劑盒、超敏感底物發(fā)光試劑盒：美國Pierce公司；鏈霉親合素-過氧化酶(streptavidin peroxidase, SP)免疫組織化學(xué)試劑盒、二氨基聯(lián)苯胺(diaminobenzidine， DAB)顯色試劑盒：北京中杉生物技術(shù)有限公司；TNF-α放射免疫分析試劑盒：北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司；血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附因子-1(vascular endothelial cell adhesion molecule-1，VCAM-1)單克隆抗體：武漢博士德生物工程有限公司；乙二胺四乙酸(ethylenediamine tetraacetic acid, EDTA)、NaCl、KCl、Na2HPO4·12H2O、KH2PO4、Tween-20、乙酸、鹽酸和甲醇均為分析純：上海試劑一廠和上海試劑四廠。

1.3主要儀器CO2培養(yǎng)箱：日本Sanyo公司；潔凈工作臺：蘇凈集團(tuán)安泰公司；Hoefer電泳儀：Amersham Biosciences公司；PCR儀：Biometra TGRADIENT公司；低溫高速離心機(jī)：德國EPPENDORF公司；凝膠成像系統(tǒng)：意大利Bio-Rad公司；DYY-10 ECP 3000電泳儀：北京六一儀器廠；EL301 strip reader：美國Bio-Tek公司；GSM凝膠圖像分析管理系統(tǒng)：黑馬儀器公司。

2方法

2.1Pae含藥血清的制備[7-8]SD大鼠6只，隨機(jī)分成空白血清組3只與Pae β-環(huán)糊精包合物給藥組(400 mg/kg)3只。灌胃給藥，每日2次，連續(xù)3 d，空白組給予相同容積的溶劑(0.5% CMC-Na)。末次給藥后30 min(末次給藥前禁食不禁水12 h)，采用3.5%水合氯醛麻醉，從腹主動脈取血。室溫靜置2 h，3 500 r/min離心10 min，無菌條件下分離血清，同種條件血清混勻，56 ℃水浴滅活30 min，0.22 μm微孔濾膜過濾除菌后分裝，-20 ℃避光保存?zhèn)溆?。RP-HPLC測定含藥血清中Pae含量。方法參見課題組前期研究[5]進(jìn)行。

2.2大鼠主動脈VECs的分離、培養(yǎng)與鑒定

2.2.1鼠尾膠原的制備及培養(yǎng)瓶包被取大鼠1只，全尾剪下并置于75%乙醇溶液中浸泡30 min，無菌條件下抽出尾腱，滅菌三蒸水洗3次，剪碎尾腱，放入100 mL 0.1%乙酸溶液中，置4 ℃冰箱中，不時搖晃，48 h后無菌條件下移入滅菌離心管中，4 000 r/min離心30 min，吸取無色透明膠狀上清液，分裝，-20 ℃冷凍保存。取培養(yǎng)瓶，無菌條件下加入鼠尾膠原溶液2 mL使其覆蓋于培養(yǎng)瓶底部，置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1 h，吸棄多余液體，磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline，PBS)輕洗3次，再用2 mL含有20% FBS和105U/L肝素鈉的達(dá)爾伯克氏改良伊格爾培養(yǎng)基(Dulbecco’s modified Eagle’s medium, DMEM)漂洗1次即可。

2.2.2大鼠主動脈VECs的分離、培養(yǎng)與鑒定[9]大鼠頸椎脫臼處死，無菌條件下取出胸主動脈，剝離干凈血管外結(jié)締組織及脂肪組織，外翻血管，暴露內(nèi)膜，用滅菌線扎緊血管兩端，放入裝有0.2% Ⅰ型膠原酶的離心管中，37 ℃、5% CO2消化培養(yǎng)1 h，含20% FBS的DMEM漂洗2次，剪去封口的兩端，余下主動脈血管剪成約2 mm×2 mm小塊，內(nèi)膜朝下貼入鼠尾膠原包被的培養(yǎng)瓶中，并加入1 mL含20% FBS的DMEM，37 ℃、5% CO2培養(yǎng)。當(dāng)原代細(xì)胞爬出并生長融合形成致密的單層細(xì)胞時即可傳代。免疫細(xì)胞化學(xué)SP法鑒定血管內(nèi)皮細(xì)胞。

2.3LPS誘導(dǎo)大鼠VECs損傷模型分組取3～5代VECs接種于6孔板中，待其融合至80%左右，換入含0.5% FBS的培養(yǎng)液同步化24 h，繼而加入含不同濃度(2.5、5、10 μg/mL)Pae含藥血清的培養(yǎng)液(20% FBS)培養(yǎng)24 h。另設(shè)空白組和單加LPS組，相同處理。

2.4RT-PCR檢測TLR4 mRNA表達(dá)將VECs經(jīng)“2.3”項(xiàng)分組處理后，再加入LPS(終濃度為10 ng/mL)培養(yǎng)5 h后，除去舊培養(yǎng)基，用PBS漂洗后，加入TRIzol試劑完全裂解細(xì)胞，收集細(xì)胞裂解液至無RNA酶的EP管中，用氯仿抽提，異丙醇沉淀，離心靜置，回收總RNA于-80 ℃儲存?zhèn)溆?。紫外分光光度計鑒定濃度和純度(測定A260/A280比值)。cDNA合成條件：50 ℃下30 min，99 ℃下5 min，-20 ℃保存?zhèn)溆谩LR4引物序列(508 bp)：上游為5′-TGGATACGTTTCCTTATAAG-3′，下游為5′-GAAATGGAGGCACCCCTTC-3′；內(nèi)參β-actin引物序列(318 bp)：上游為5′-ATCATGTTTGAGACCTTCAACA-3′，下游為5′-CATCTCTTGCTCGAAGTCCA-3′。PCR反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性5 min，94 ℃變性30 s，54 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，30個循環(huán)；72 ℃延伸10 min，4 ℃保存。2%瓊脂糖凝膠電泳，于凝膠成像系統(tǒng)下觀察分析。

2.5ESMA檢測NF-κB的表達(dá)將VECs經(jīng)“2.3”項(xiàng)分組處理后，再加入LPS(終濃度為10 ng/mL)培養(yǎng)1 h后，除去舊培養(yǎng)基，PBS漂洗3次，按核蛋白抽提試劑說明書抽提核蛋白，抽提后的核蛋白保存在-80 ℃下備用。Lowry法蛋白定量后，將蛋白質(zhì)濃度調(diào)整為一致。利用EMSA法進(jìn)行NF-κB的檢測，并通過GSM凝膠圖像分析管理系統(tǒng)分析結(jié)果。

2.6免疫組化檢測VCAM-1的表達(dá)將洗凈滅菌的蓋玻片置于6孔板中，調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1×105/mL，加入含不同濃度(2.5，5，10 μg/mL)Pae含藥血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)24 h，再加入LPS(終濃度為10 ng/mL)繼續(xù)培養(yǎng)5 h，另設(shè)空白組和單加LPS組，相同處理。免疫組織化學(xué)鑒定VECs胞漿內(nèi)VCAM-1的表達(dá)，對照組用PBS代替一抗。結(jié)果判定：以細(xì)胞核呈黃色或棕黃色者為VCAM-1表達(dá)陽性細(xì)胞，在100倍鏡下隨機(jī)選取10個視野，分別計算每個視野VCAM-1表達(dá)陽性細(xì)胞百分率(I)并予賦值：0表示無陽性或非常弱陽性，1表示I<25%，2表示25%≤I<50%，3表示50%≤I<75%，4表示75%≤I<100%，以10個視野的平均賦值作為該樣本的檢測值。

2.7放射免疫法檢測血清TNF-α的含量將VECs經(jīng)“2.3”項(xiàng)分組處理后，再加入LPS(終濃度為10 ng/mL)培養(yǎng)5 h后，吸取細(xì)胞上清液，按照放射免疫法試劑盒說明書操作，定量檢測細(xì)胞上清液中TNF-α。用TNF-α抗血清及125I-TNF-α加在一起進(jìn)行競爭性結(jié)合反應(yīng)，采用自動放射免疫儀測定并計算TNF-α濃度。

3結(jié)果

3.1大鼠血清中Pae的含量本實(shí)驗(yàn)所用含藥血清與課題組前期所用含藥血清為同一批次，參見課題組前期研究[6]方法測得血清中Pae含量10.37 mg/L。

3.2VECs形態(tài)學(xué)觀察及鑒定原代培養(yǎng)的VECs呈多角形單層鋪路石樣，排列緊密，細(xì)胞邊緣光滑，胞核清晰(見圖1A)。免疫細(xì)胞化學(xué)SP法檢查Ⅷ因子相關(guān)抗原，鏡下細(xì)胞胞漿呈棕黃色，即呈陽性反應(yīng)，證明所培養(yǎng)細(xì)胞為內(nèi)皮細(xì)胞(見圖1B)。

圖1VECs原代形態(tài)學(xué)觀察及免疫組化鑒定結(jié)果

3.3Pae對LPS誘導(dǎo)的VECs表達(dá)TLR4 mRNA的影響LPS顯著上調(diào)了VECs中TLR4 mRNA的表達(dá)(P<0.05)；Pae作用VECs后，下調(diào)了由LPS誘導(dǎo)的TLR4 mRNA表達(dá)水平，尤以10 μg/mL Pae組作用最為顯著(P<0.05)。見圖2、圖3。

3.4Pae對LPS誘導(dǎo)的VECs表達(dá)NF-κB的影響LPS顯著上調(diào)VECs中NF-κB的表達(dá)水平(P<0.05)；Pae作用VECs后，下調(diào)了由LPS誘導(dǎo)的NF-κB表達(dá)水平，尤以10 μg/mL Pae組的作用最為顯著(P<0.05)。見圖4、圖5。

注:M：Marker；1.空白組；2. 10 ng/mL LPS組；3. LPS+2.5 μg/mL Pae組；4. LPS+5 μg/mL Pae組；5. LPS+10 μg/mL Pae組。

圖2Pae對LPS誘導(dǎo)的VECs

表達(dá)TLR4 mRNA的影響(RT-PCR法)

注:含有相同右上標(biāo)符號的組別相比較，P>0.05；不含相同右上標(biāo)符號的組別相比較，P<0.05。

圖3Pae對LPS誘導(dǎo)的VECs

表達(dá)TLR4 mRNA的影響(n=5)

注：1. 空白組；2. 10 ng/mL LPS組；3. LPS+2.5 μg/mL Pae組；4. LPS+5 μg/mL Pae組；5. LPS+10 μg/mL Pae組。

圖4Pae對LPS誘導(dǎo)的VECs

表達(dá)NF-κB的影響(EMSA法)

3.5Pae對LPS誘導(dǎo)的VECs表達(dá)VCAM-1的影響經(jīng)DAB免疫組織化學(xué)染色，可見陽性細(xì)胞胞核呈淡棕色、細(xì)胞核內(nèi)有棕黃色顆粒，VCAM-1陽性率隨Pae含藥血清濃度的升高而下降，而且核染色呈棕黃色的細(xì)胞數(shù)也明顯減少。表明LPS可以使VECs表達(dá)VCAM-1的陽性細(xì)胞數(shù)增加，而Pae含藥血清可以抑制VCAM-1陽性細(xì)胞數(shù)的增加。見圖6、圖7。

3.6Pae對LPS誘導(dǎo)的VECs分泌TNF-α的影響LPS顯著上調(diào)TNF-α的表達(dá)(P<0.05)；Pae作用VECs后，顯著下調(diào)了由LPS誘導(dǎo)的TNF-α表達(dá)，尤以10 μg/mL Pae組的作用最為顯著(P<0.05)。見圖8。

注:含有相同右上標(biāo)符號的組別相比較，P>0.05；不含相同右上標(biāo)符號的組別相比較，P<0.05。

圖5　Pae對LPS誘導(dǎo)的VECs表達(dá)NF-κB的影響(n=5)

圖6Pae對LPS誘導(dǎo)的VECs

表達(dá)VCAM-1的影響(DAB染色，10×10倍)

4討論

VECs內(nèi)襯于血管內(nèi)壁，發(fā)揮著屏障保護(hù)作用，也是機(jī)體內(nèi)最大的內(nèi)分泌腺，能夠分泌各種細(xì)胞炎性因子、黏附分子等血管活性物質(zhì)，是多種血管性疾病的關(guān)鍵參與者，VECs的損傷及功能障礙被認(rèn)為是AS形成的始動因素[10]。當(dāng)刺激因子作用于VECs導(dǎo)致?lián)p傷，VECs出現(xiàn)黏附功能障礙，單核細(xì)胞向VECs聚集和黏附是AS炎性反應(yīng)的早期表現(xiàn)之一。正常情況下的單核細(xì)胞難以與VECs黏附，當(dāng)某些刺激因素介導(dǎo)損傷時才易發(fā)生。LPS與VECs上受體結(jié)合，誘導(dǎo)細(xì)胞黏附因子、炎性因子等在VECs細(xì)胞表面表達(dá)上升，引起間接損傷，促使單核細(xì)胞的黏附及炎癥的發(fā)生、發(fā)展。

注:含有相同右上標(biāo)符號的組別相比較，P>0.05；不含相同右上標(biāo)符號的組別相比較，P<0.05。

圖7Pae對LPS誘導(dǎo)的VECs

表達(dá)VCAM-1的影響(n=5)

注:含有相同右上標(biāo)符號的組別相比較，P>0.05；不含相同右上標(biāo)符號的組別相比較，P<0.05。

圖8Pae對LPS誘導(dǎo)的VECs分泌TNF-α的影響(n=5)

研究表明，LPS作為炎性刺激因子，可與髓樣分化蛋白-2(myeloid differential protein-2, MD-2)蛋白結(jié)合形成緊密復(fù)合物，使得TLR4激活。TLR4受體是介導(dǎo)炎性反應(yīng)的跨膜受體，是介導(dǎo)LPS的門戶蛋白，當(dāng)TLR4與相應(yīng)配體結(jié)合，發(fā)出相關(guān)傳遞信號，會激活NF-κB信號通路傳導(dǎo)級聯(lián)。NF-κB是細(xì)胞炎性反應(yīng)中許多基因轉(zhuǎn)錄活化的必需因子，在炎性反應(yīng)中具有關(guān)鍵和核心的調(diào)控作用，能促進(jìn)相應(yīng)細(xì)胞因子基因表達(dá)上調(diào)，如TNF-α、VCAM-1[11]。VCAM-1大量表達(dá)會促進(jìn)單核細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞黏附、遷移，在進(jìn)展期促進(jìn)已遷入病灶的單核細(xì)胞滾動、T淋巴細(xì)胞的激活，并增加其他細(xì)胞與細(xì)胞間的相互作用，促進(jìn)AS的發(fā)生發(fā)展。TNF-α可刺激VECs上調(diào)表達(dá)VCAM-1和細(xì)胞間黏附分子-1(ntercellular adhesion molecule 1，ICAM-1)，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞和白細(xì)胞黏附，白細(xì)胞遷移、粒細(xì)胞脫顆粒和毛細(xì)血管通透性增強(qiáng)，并遷移至炎癥部位，引起VECs損傷并誘導(dǎo)IL-1、IL-6、IL-8等細(xì)胞因子釋放，使中性粒細(xì)胞趨化，細(xì)胞變形，促進(jìn)炎性反應(yīng)，造成VECs損傷。

本研究以LPS作為刺激因子誘導(dǎo)VECs損傷，發(fā)現(xiàn)LPS可上調(diào)TLR4 mRNA的表達(dá)，并活化NF-κB信號通路，引起TNF-α和VCAM-1的釋放；而Pae可以下調(diào)LPS誘導(dǎo)TLR4 mRNA的過表達(dá)，降低NF-κB信號通路的活化、降低TNF-α和VCAM-1的釋放。該結(jié)果提示，Pae可能通過部分抑制TLR4與LPS在細(xì)胞膜上的結(jié)合，減少LPS進(jìn)入胞漿內(nèi)誘導(dǎo)信號的傳遞，降低NF-κB的活化，從“外層”保護(hù)VECs。Pae對TNF-α的釋放和VCAM-1基因的轉(zhuǎn)錄的抑制表明，Pae下調(diào)TLR4/NF-κB信號通路可引起下游細(xì)胞因子和黏附分子釋放減少；而TNF-α和VCAM-1水平的降低是影響VECs損傷及其與單核細(xì)胞黏附功能的重要因素。因此，Pae可以抑制單核細(xì)胞向VECs的黏附，保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞，達(dá)到抗AS的作用。

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·實(shí)驗(yàn)研究·

Effects of Paeonol on Lipopolysaccharide-Induced Release of Vascular Endothelial Cell Adhesion Molecule-1 and Tumor Necrosis Factor-Alpha and TLR4/NF-κB Signaling Pathway in Rat Vascular Endothelial Cells

YANGLi,DAIMin,CHENPeng

(KeyLaboratoryofXin’anMedicineJointlySupportedbyMinistryofEducationandAnhuiProvince&SchoolofPharmacy,AnhuiUniversityofChineseMedicine,AnhuiHefei230012,China)

[Abstract]ObjectiveTo observe the effects of paeonol (Pae) on lipopolysaccharide (LPS)-induced release of vascular endothelial cell adhesion molecule-1 (VCAM-1) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) and toll-like receptor-4 (TLR4)/nuclear factor-kappa B (NF-κB) signaling pathway in rat vascular endothelial cells (VECs) and to reveal the molecular mechanism for inhibition of VECs adhesion by Pae. MethodsRat VECs were isolated by means of tissue predigested adherent method and LPS was used to induce inflammatory injury in VECs. Serum containing Pae was obtained from healthy rats which were given Pae by intragastric administration. Serum level of Pae was determined by reversed-phase high-performance liquid chromatography. The expression of TLR4 mRNA was measured by RT-PCR. The expression of NF-κB was determined by electrophoresis mobility shift assay. The expression of VCAM-1 was determined by immunohistochemistry and the expression of TNF-α was determined by radioimmunoassay. ResultsAfter 24 hours of treatment with Pae-containing serum (2.5 μg/ml, 5 μg/ml, and 10 μg/ml), the expression of NF-κB and TLR4 mRNA and the secretion of VCAM-1 and TNF-α in LPS-treated VECs were inhibited in a dose-dependent manner. Particularly, serum containing 10 μg/ml Pae had a significant inhibitory effect (P<0.05). ConclusionPae reduces the release of VCAM-1 and TNF-α probably through down-regulating the LPS-induced activation of TLR4/NF-κB signaling pathway.

[Key words]paeonol; vascular endothelial cell; lipopolysaccharide; TLR4/NF-κB signaling pathway; vascular endothelial cell adhesion molecule-1; tumor necrosis factor-alpha

收稿日期：(2014-11-10；編輯：曹健)

通信作者：戴敏，daiminliao@163.com

作者簡介：楊黎(1990-)，男，碩士研究生

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81473386，81274134)

[中圖分類號]R285.5[DOI]10.3969/j.issn.2095-7246.2015.01.016