吳旻 戴一揚(yáng) 厲朝喜 彭芳 陳凌燕 翁秀妹

浙江醫(yī)院消化內(nèi)科，浙江杭州310013

老年反流性食管炎患者血清Ghrelin和Leptin水平及在胃黏膜中表達(dá)的意義

吳旻 戴一揚(yáng) 厲朝喜 彭芳 陳凌燕 翁秀妹

浙江醫(yī)院消化內(nèi)科，浙江杭州310013

目的探討老年反流性食管炎患者生長激素釋放多肽（Ghrelin）和瘦素（Leptin）血清水平及其在胃黏膜中表達(dá)的意義。方法選取老年反流性食管炎患者30例及正常對照組30例，采用ELISA法檢測血清Ghrelin和Leptin水平，同時(shí)用免疫組化法檢測胃黏膜中Ghrelin及Leptin的表達(dá)。結(jié)果老年反流性食管炎血清Ghrelin水平低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；血清Leptin水平高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；老年反流性食管炎胃黏膜Ghrelin表達(dá)陽性率（47%）顯著低于正常對照組（76%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。胃黏膜Leptin表達(dá)陽性率（83%）顯著高于正常對照組（50%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。老年反流性食管炎患者血清Leptin水平與Ghrelin水平呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論Ghrelin、Leptin水平可能與老年反流性食管炎的發(fā)病有關(guān)，兩者在反流性食管炎的發(fā)病中相互影響，生物學(xué)作用相反。

反流性食管炎；生長激素釋放多肽；瘦素

反流性食管炎是常見的易復(fù)發(fā)的消化動力障礙疾病，國內(nèi)外研究表明反流性食管炎的發(fā)病率隨年齡的增加、飲食習(xí)慣的改變而增加，近年來生長激素釋放多肽（Ghrelin）與瘦素（Leptin）等胃腸類激素在反流性食管炎的發(fā)生與發(fā)展中起到的作用逐漸受到關(guān)注，國內(nèi)外研究證實(shí)Ghrelin和Leptin等在胃酸及胃排空的調(diào)節(jié)中起重要作用[1]。本文通過對老年反流性食管炎患者空腹血清及組織中生長激素釋放多肽（Ghrelin）和瘦素（Leptin）水平的測定，旨在探討Ghrelin和Leptin在老年反流性食管炎發(fā)病機(jī)制中的作用?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年9月～2014年2月間來我院消化科就診及來我院體檢并行胃鏡及病理組織學(xué)檢查、年齡>60歲、快速尿素酶檢測幽門螺旋桿菌（Hp）陰性的老年患者60例，為排除肥胖對Ghrelin及Leptin的影響，患者于胃鏡檢查后測量身高、體質(zhì)量，計(jì)算BMI。根據(jù)中國成年人體重標(biāo)準(zhǔn)：選取體質(zhì)量指數(shù)BMI在18.5～24.0 kg/m2范圍的老年患者入組。分為兩組：老年反流性食管炎組30例，男15例，女15例；年齡（65～88）歲，BMI（21.86～23.54）kg/m2，均經(jīng)內(nèi)窺鏡胃鏡檢查按洛杉磯標(biāo)準(zhǔn)確診為反流性食管炎，即內(nèi)鏡下可見食管遠(yuǎn)端的黏膜破損，并進(jìn)行內(nèi)鏡下分級[2]。老年正常對照組30例，男16例，女14例；年齡（62～86）歲，BMI（21.68～23.78 kg/m2）。兩組的性別、年齡、BMI比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。排除標(biāo)準(zhǔn)：①消化性潰瘍；②食道裂孔疝；③消化道腫瘤或合并全身其他系統(tǒng)及器官惡性腫瘤；④嚴(yán)重肝腎功能不全；⑤有胃鏡檢查禁忌癥；⑥近期口服糖皮質(zhì)激素、抗膽堿、抗抑郁藥、鎮(zhèn)靜藥、鈣拮抗劑等藥物。所有患者均簽署知情同意書。

1.2 血清標(biāo)本采集方法

空腹8～12 h，胃鏡檢查前上午8點(diǎn)采集5 mL全血，4℃下2000 r/min離心15 min，取血清置于-70℃冰箱冷凍保存，集中檢測Ghrelin和Leptin，檢測采用ELISA法，應(yīng)用試劑盒（美國CUSABIO公司），所有樣本均按照試劑盒方法操作。

1.3 免疫組化方法

胃鏡檢查由有經(jīng)驗(yàn)豐富的內(nèi)鏡醫(yī)生操作，老年反流性食管炎組及老年正常對照組均選取胃體組織?；顧z取組織2塊進(jìn)行Ghrelin及Leptin的免疫組織化學(xué)染色，所有標(biāo)本經(jīng)4%甲醛固定，石蠟包埋，5 μm連續(xù)切片，常規(guī)HE染色。免疫組織化學(xué)采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法（SP法），其中Ghrelin的一抗是羊抗人Ghrelin多克隆抗體（1∶150）（美國Phoenix公司），瘦素的一抗是兔抗人瘦素多克隆抗體（1∶150）（北京博奧森生物有限公司），二抗均為HRP聚合體（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）。

1.4 免疫組化結(jié)果判斷

Ghrelin和Leptin在細(xì)胞漿中出現(xiàn)黃色或褐色染色者為陽性。陽性判斷采用半定量標(biāo)準(zhǔn)，即根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度和染色細(xì)胞的百分比之積來判斷。染色強(qiáng)度判定：淡黃色為弱染色，褐色為中等染色，深褐色為強(qiáng)染色。染色強(qiáng)度積分為：無染色0分，弱染色1分，中等染色2分，強(qiáng)染色3分。染色細(xì)胞的百分比分為：無細(xì)胞染色0分，<25%細(xì)胞染色1分，25%～50%細(xì)胞染色2分，>50%細(xì)胞染色3分。若兩者積分之和>2，則為陽性，≤2則為表達(dá)陰性[3]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS11.5軟件進(jìn)行分析，對計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)、計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用pearson檢驗(yàn)，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 老年反流性食管炎組與正常對照組血清Ghrelin和Leptin免疫組化結(jié)果比較

老年反流性食管炎組患者內(nèi)鏡下LA分級，其中A級14例、B級10例，C級6例，無D級病例。老年對照組內(nèi)鏡下所見食管黏膜均正常。

2.2 老年反流性食管炎組與正常對照組血清Ghrelin與Leptin水平比較

老年反流性食管炎患者血清Ghrelin水平低于老年正常對照組（P=0.041），老年反流性食管炎組血清Ghrelin水平根據(jù)洛杉磯分級，A級（14.02±2.11）ng/mL，B級（13.66±1.25）ng/mL，C級（13.21±2.33）ng/mL，三組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。老年反流性食管炎組血清Leptin水平高于老年正常對照組（P=0.014）。反流性食道炎患者血清Leptin水平根據(jù)洛杉磯分級，A級（14.18±1.69）pg/mL，B級（15.25±1.98）pg/mL，C級（14.98±1.93）pg/mL，三組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

表1 老年反流性食管炎組與正常對照組血清Ghrelin和Leptin水平比較（s）

表1 老年反流性食管炎組與正常對照組血清Ghrelin和Leptin水平比較（s）

注：與對照組比較，*t=2.62，*P=0.041；**t=3.57，**P=0.014

組別n血清G h r e l i n水平（n g / m L）血清L e p t i n水平（p g / m L）老年反流性食管炎組老年正常對照組3 0 3 0 1 3 . 7 4 ± 1 . 8 7*1 5 . 2 7 ± 2 . 5 7 1 4 . 6 9 ± 1 . 8 7**1 3 . 1 2 ± 1 . 5 7

2.3 老年反流性食管炎組與正常對照組胃黏膜Ghrelin與Leptin表達(dá)比較

老年反流性食管炎組患者胃黏膜Ghrelin表達(dá)陽性14例，陽性率（47%）低于正常對照組（76%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。而老年反流性食管炎組胃黏膜Leptin表達(dá)陽性率（83%）高于正常對照組（50%），差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），見圖1～2，表2。

2.4 血清Ghrelin與Leptin水平的相互關(guān)系

老年反流性食管炎組患者血清Ghrelin與血清Leptin水平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.337，P<0.05），但正常對照組血清Ghrelin與血清Leptin水平無相關(guān)性（r=0.072，P>0.05）。見圖3~4。

圖1 胃黏膜Ghrelin表達(dá)陽性（×800）

圖2 胃黏膜Leptin表達(dá)陽性（×800）

表2 老年反流性食管炎組與正常對照組胃黏膜Ghrelin和Leptin表達(dá)比較

圖3 老年反流性食管炎組患者血清Ghrelin水平與Leptin相關(guān)性

圖4 正常對照組血清Ghrelin與Leptin水平相關(guān)性

3 討論

近年來隨著生活水平的提高，反流性食管炎的發(fā)病率有逐年增長的趨勢，且隨年齡的增加而增加[4，5]。反流性食管炎發(fā)病機(jī)制目前尚不完全清楚，目前認(rèn)為與食管抗反流機(jī)制減弱、食管壁清除能力降低及胃排空延遲等因素有關(guān)。其中食道抗反流機(jī)制異常，包括一過性食道下端括約肌松弛（TLESR）是導(dǎo)致胃食管反流的主要發(fā)病機(jī)制，而胃排空延遲、胃食管壓力梯度增加，可觸發(fā)食道下端括約肌的松弛。近年來已有報(bào)道反流性食管炎與膽囊收縮素、胃動素、胃泌素、血管活性腸肽等多種胃腸激素有關(guān)，1999年日本科學(xué)家首次發(fā)現(xiàn)了人生長激素釋放多肽（Ghrelin）[6]，研究發(fā)現(xiàn)Ghrelin不僅能夠促進(jìn)生長激素的釋放，而且具有促進(jìn)飲食、促進(jìn)胃腸蠕動[7]、降低血壓、抑制炎性因子釋放等生物學(xué)作用[8]。Ghrelin主要由胃黏膜層的A/X細(xì)胞產(chǎn)生，分布于人體多種組織器官，其中胃底及胃體組織中含量最高，其分子結(jié)構(gòu)和胃動素十分相似[9]，可促進(jìn)胃腸運(yùn)動。國外有資料表明Ghrelin在胃腸功能調(diào)節(jié)上具有重要意義，在清醒的大鼠和小鼠Ghrelin可促進(jìn)胃排空，加快小腸蠕動作用，對人的研究亦發(fā)現(xiàn)Ghrelin能加速正常人胃排空效應(yīng)[10]，外源性Ghrelin可加速胃排空，并可刺激大鼠和人的消化間期胃腸運(yùn)動[11，12]。本研究發(fā)現(xiàn)老年反流性食管炎患者血清Ghrelin水平及胃黏膜Ghrelin表達(dá)陽性率（47%）均低于老年正常對照組（P<0.05），且從不同食道反流炎分級觀察血清Ghrelin水平是逐級降低的，雖然A、B、C三級之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能需加大樣本量觀察，說明Ghrelin的下降對老年反流性食管炎患者的胃排空延遲起一定作用。

瘦素（Leptin）是肥胖相關(guān)基因6編碼的蛋白產(chǎn)物[13]，主要在脂肪組織中生成、分泌，包括胃黏膜和胃底腺等也具有合成和分泌Leptin的功能。作為一種胃腸激素，有研究表明，瘦素可能是通過迷走-膽堿能神經(jīng)及CCK-A受體介導(dǎo)，抑制胃運(yùn)動。本研究發(fā)現(xiàn)老年反流性食管炎患者血清Leptin水平及胃黏膜組織Leptin表達(dá)陽性率（83%）均高于正常對照組（P<0.05），說明老年反流性食管炎患者瘦素水平增高對胃腸動力方面也有影響。雖然反流性食管炎組血清Leptin水平在A、B、C三級之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能與Leptin受體可飽和性有關(guān)。

有資料表明Leptin與Ghrelin兩者之間的作用相反。國內(nèi)有動物實(shí)驗(yàn)表明Leptin可以降低胃運(yùn)動收縮幅度，促進(jìn)空腹饑餓運(yùn)動向餐后飽食轉(zhuǎn)變[14]，從而延緩胃排空。Ghrelin釋放增加通過迷走傳入神經(jīng)把信號傳給孤束核（NTS），再激活下丘腦弓狀核（ARC）網(wǎng)絡(luò)增強(qiáng)攝食和促進(jìn)胃MMCⅢ期運(yùn)動，這條通路受Leptin控制，而Ghrelin通過刺激下丘腦不同的神經(jīng)肽來對抗Leptin。Ghrelin和Leptin是一對生物學(xué)效應(yīng)相對抗的脂肪因子，共同參與調(diào)解機(jī)體的能量代謝，Ghrelin能劑量依賴性地減弱Leptin對攝食的抑制性作用，給予Ghrelin后可以引起Leptin的mRNA表達(dá)增強(qiáng)，并抵消Leptin引起的抑制神經(jīng)肽Y（NPY）mRNA表達(dá)下降[15]。另一方面Leptin也下調(diào)Ghrelin的表達(dá)，并抑制Ghrelin引起的鈣內(nèi)流，進(jìn)而抑制食欲，本研究亦發(fā)現(xiàn)老年反流性食管炎組患者血清Ghrelin、血清Leptin水平的相關(guān)性分析結(jié)果呈負(fù)相關(guān)（r=-0.337，P<0.05），而正常對照組血清Ghrelin、血清Leptin水平則無相關(guān)性（r=0.072，P>0.05）。由此我們推測老年反流性食管炎患者中血清Leptin水平的升高可能導(dǎo)致血清Ghrelin水平下降，進(jìn)而導(dǎo)致胃排空延遲，使胃內(nèi)壓力升高，誘發(fā)TIESR，進(jìn)一步促使老年性反流性食管炎的發(fā)生。

[1]陳瑩，劉文天，方維麗.功能性消化不良患者血清Ghrelin及瘦素水平變化[J].中華消化雜志，2009，29（8）：521-524.

[2]陳灝珠，丁訓(xùn)杰，廖履坦，等.實(shí)用內(nèi)科學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1997：1554.

[3]柯楠，李繼昌.瘦素、瘦素受體和血管內(nèi)皮生長因子在胃癌中的表達(dá)及其浸潤和轉(zhuǎn)移中的作用[J].臨床薈萃，2006，21（4）：234-237.

[4]吳本儼，邵勇，李園.等.北京地區(qū)老年人胃食道反流癥狀流行病學(xué)調(diào)查[J].軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，25（2）：110-112.

[5]Sonnenberg A，Massey BT，Jacobsen SJ.Hospital discharges resulting from esophagitis among Medicare beneficiaries[J]. Dig Dis Sci，1994，39（1）：183-188.

[6]Kojma M，Hosoda H，Data Y，et al.Gherlin is a growthhormone-releasing acylated peptide from stomach[J].Nature，1999，402（6762）：656-660.

[7]Briggs，Dana I，Andrews,et al.Metabolic status regulates ghrelin function on energy homeostasis[J].Neuroendoc-rinology，2011，（1）：48-57.

[8]Murpry G，Kamang F，Dawsey SM，et al.The relationship between serum ghrelin and the risk of gastric and esophagogastric junctional adenocarcinomas[J].J Natl Cancer Inst，2011，103（14）：1123-1129.

[9]Sanger GJ.Ghrelin and motilin receptor agonists；time to introduce bias into drug design[J].Neurogastroenterol Motil，2014，26（2）：149-155.

[10]Dornonville D，Cour C，Lindstrom E，et al.Ghrelin stimulates gastric emptying but is without effect on acid secretion and gastric endocrine cells[J].Regul Peptides，2004，120（1）：23-32.

[11]Sato M，Nakahara K，Goto S，et al.Effectes of Gherlin and desacyl Gherlin on neurogenesis of the rat fetal spinal cord[J].Biophys Res Commun，2006，350（3）：598-603.

[12]Poitras P，Polvino WJ，Rocheleau B，et al.Gastrokinetic effect of Ghrelin analog RC-1139 in the rat.Effect on post-operative and on morphine induced ileus[J].Peptides，2005，26（9）：1598-1601.

[13]Halaas JL，Gajwala KS，Maffei M，et al.Weight-reducing effects of the plasma protein encoded by the obese gene[J]. Science，1995，269（5223）：543-546.

[14]周呂，王禮建，袁勃.下丘腦瘦素對大鼠胃運(yùn)動的作用[J].診斷學(xué)理論與實(shí)踐，2006，5（1）：20-23.

[15]Fujimiya M，Ataka K，Asakawa A，et al.Ghrelin，des-acyl ghrelin and obestatin on the gastrointestinal motility[J]. Peptides，2011，32（11）：2348-2351.

Serum levels and tissue expression of ghrelin and leptin in elderly patients with reflux esophagitis

WU MinDAI YiyangLI ChaoxiPENG FangCHEN LingyanWENG Xiumei
Department of Gastroenterology，Zhejiang Hospital，Hangzhou310013，China

Objective To investgate the serum level of ghrelin and leptin in the elderly patients with reflux esophagItis and gastric mucosal.Methods A total of 30 elderly patients with reflux esophagitis and 30 of healthy control cases were selected，serum ghrelin and leptin were tested by ELISA and expression of ghrelin and leptin were decteted by immunohistochemistry.Results The serum level of ghrelin in the reflux esophagitis group was significantly lower than in the control group，the difference was significant（P<0.05）.The serum level of leptin in reflux esophagitis group was sig nificantly higher than in the control group，the difference was significant（P<0.05）.The expression positive rates of ghrelin in reflux esophagitis group（47%）were significant lower than in the control group（76%），the difference was significant（P<0.05）.The expression positive rates of leptin in reflux esophagitis group（83%）were significant higher than the control group（50%），the difference was significant（P<0.05）.There were negative correlation between the serum level of leptin and the serum level of ghrelin in patients with reflux esophagitis.Conclusion The level of ghrelin and leptin may be related to pathogenesis of reflux esophagitis.It is showed that the ghrelin and leptin may have opposite effect on each other in the pathogenesis of reflux esophagitis.

Reflux esophagitis；Ghrelin；Leptin

R571

A

1673-9701（2015）24-0021-04

2015-04-21）

浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技計(jì)劃項(xiàng)目（2012KYA002）