羅悅，李建利,，陳梓賢，王利潔

·炮制制劑·

香蘞痔瘡栓質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

羅悅1，李建利1,2，陳梓賢1，王利潔1

目的：建立香蘞痔瘡栓的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜法對(duì)方中黃連、五倍子、冰片進(jìn)行定性鑒別；采用高效液相色譜法對(duì)鹽酸小檗堿進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果：薄層鑒別斑點(diǎn)清晰，陰性無(wú)干擾；含量測(cè)定中鹽酸小檗堿在0.18272μg～1.8272μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。結(jié)論：所建立方法可作為該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層；高效液相色譜法；鹽酸小檗堿

香蘞痔瘡栓為四川省中醫(yī)藥科學(xué)院中醫(yī)研究所研制的栓劑，由黃連，五倍子，冰片等多味中藥組成，具有清熱止血、消炎止痛的功效，臨床上用于治療內(nèi)痔、混合痔發(fā)炎引起的大便出血，肛周分泌物，肛門墜脹、疼痛等癥，療效顯著。為確保該制劑的質(zhì)量，對(duì)黃連、冰片、五倍子進(jìn)行薄層鑒別，采用高效液相色譜法對(duì)黃連中的鹽酸小檗堿進(jìn)行含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-20AT型高效液相色譜儀（儀器包括：LC-20AT色譜工作站、SD-20AT紫外檢查器，日本島津公司)； FA1104N型電子天平（上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司）； DHG-9140A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海齊欣科學(xué)儀器有限公司）；KQ5200型數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；DZKW-4型電子恒溫水浴鍋（北京中興偉業(yè)儀器有限公司）。

1.2 試藥

黃連對(duì)照藥材（四川省中藥飲片有限責(zé)任公司，產(chǎn)地：四川；批號(hào)130723）；冰片對(duì)照藥材（四川省中藥飲片有限責(zé)任公司，產(chǎn)地：四川；批號(hào)130913）；鹽酸小檗堿對(duì)照品（購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110713-201212）；沒食子酸對(duì)照品（購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110831-200803），甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 薄層鑒別

2.1 冰片薄層鑒別

取本品4粒（批號(hào)040808），切碎，加無(wú)水乙醇50mL，水浴（40±2℃）溫浸15分鐘，-5℃放置30分鐘，濾過，濾液濃縮至1mL，作為供試品溶液[1]；取冰片對(duì)照藥材10mg，加無(wú)水乙醇10mL，超聲處理5分鐘，制成每mL含1mg的溶液作為對(duì)照藥材溶液。取缺冰片的陰性對(duì)照品4粒，照供試品制備方法制成

陰性溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述 3種溶液各6μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚-丙酮-環(huán)己烷（9:1:2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛濃硫酸溶液，在105℃下加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的斑點(diǎn)；陰性無(wú)干擾。結(jié)果見圖1。

2.2 五倍子薄層鑒別

取本品2粒（批號(hào)040808），加水40mL，加熱使溶解，冰浴中冷卻，濾過，濾液用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1～2，用乙醚提取2次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。取缺五倍子的陰性樣品，同法制成陰性溶液。另取沒食子酸對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述 3種溶液各6μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-丙酮-冰醋酸(5:5:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵試液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的斑點(diǎn)；陰性無(wú)干擾。結(jié)果見圖2。

圖1 冰片的薄層鑒別

圖2 五倍子的薄層鑒別

2.3 黃連薄層鑒別

取本品4粒，切碎，取約0.75g，精密稱定，置100mL量瓶中，加甲醇-鹽酸(100∶1)混合溶液100mL，溫浸30分鐘，超聲處理1小時(shí)，冷卻至室溫，加甲醇-鹽酸(100∶1)混合溶液稀釋至刻度，搖勻，于-18℃冷藏過夜，取出后迅速濾過，濾液放至室溫，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液[2]。另取缺黃連陰性樣品，同法制成陰性溶液；取黃連對(duì)照藥材50mg，加甲醇5mL，超聲處理15分鐘，濾過，取濾液作為對(duì)照藥材溶液。另取鹽酸小檗堿對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述4種溶液各4 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（7:1:2）為展開劑，展開，取出，晾干，在紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材，對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的熒光斑點(diǎn)；陰性無(wú)干擾。結(jié)果見圖3。

圖3 黃連的薄層鑒別

3 含量測(cè)定

3.1 供試品溶液的制備

照“2.3”項(xiàng)下黃連薄層鑒別中供試品溶液制備方法制備，作為供試品溶液。

3.2 對(duì)照品溶液的制備

精密吸取鹽酸小檗堿對(duì)照品5.71mg用甲醇定容至25 mL容量瓶，移取4mL至10mL容量瓶，甲醇定容至刻度，制得91.36μg．mL-1的對(duì)照品溶液備用。

3.3 陰性樣品溶液的制備

照“2.3”項(xiàng)下黃連薄層鑒別中陰性溶液制備方法制備，作為陰性樣品溶液。

3.4 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

3.4.1 色譜條件 色譜柱：Global Chromatography SP-120-5-C18-BI0（4.6×150 mm，5μm）；流動(dòng)相：0.05mol．L-1磷酸二氫鉀-乙腈（6：4）pH=4的混合溶液每100毫升加入0.04g十二烷基硫酸鈉以97:3水的比例作為流動(dòng)相；流速：1mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：345nm；理論塔板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算不低于2000。

3.4.2 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 分別吸取供試品溶液，陰性溶液，對(duì)照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定。結(jié)果鹽酸小檗堿與其他組分分離，分離度大于

1.5；陰性樣品在與對(duì)照色譜峰相同保留時(shí)間位置處無(wú)對(duì)應(yīng)色譜峰出現(xiàn)，表明樣品中其他成分對(duì)鹽酸小檗堿測(cè)定無(wú)干擾，見圖4。

圖 4 對(duì)照品、供試品、陰性樣品溶液HPLC色譜圖

3.5 線性關(guān)系試驗(yàn)

精密吸取“3.3”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液2、4、6、8、10、20μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積。以對(duì)照品進(jìn)樣量X(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積值Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：Y=190785.55X-179137，r=0.9995。結(jié)果表明鹽酸小檗堿進(jìn)樣量在0.18272μg～1.8272μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

3.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取本品6份，精密稱定，照“3.1”項(xiàng)下方法，制備供試品溶液，依法測(cè)定，結(jié)果鹽酸小檗堿峰面積RSD為1.26%（n=6），表明該方法重復(fù)性良好。

3.7 加樣回收率試驗(yàn)

取“3.1”項(xiàng)下已知濃度的供試品溶液，共6份，按《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄XVⅢA項(xiàng)下方法，加入鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)行試驗(yàn)，計(jì)算鹽酸小檗堿的回收率。結(jié)果平均回收率為100.91%，RSD為1.70%（n=6）。

3.8 樣品測(cè)定

取中試樣品三批（批號(hào)：040807、040808、040809），按含量測(cè)定方法測(cè)定測(cè)得含量分別為17.89mg/粒、18.14 mg/粒、19.03mg/粒。

4 討論

4.1 含量測(cè)定流動(dòng)相的選擇，參考中國(guó)藥典2010年版一部黃連項(xiàng)下含量測(cè)定方法，采用以乙腈-0.05mol／L磷酸二氫鉀溶液(50：50)(每100mL中加十二烷基硫酸鈉0.4g，再以磷酸調(diào)節(jié)pH值為4.0)為流動(dòng)相[3]，但測(cè)定結(jié)果鹽酸小檗堿峰并不能和其他峰有效的分離。調(diào)整乙腈與磷酸二氫鉀溶液的比例為（6:4），分離效果有一定的改善，但是并不能完全的分離，最終參照文獻(xiàn)[4]，加入水后調(diào)整比例，按照新流動(dòng)相條件進(jìn)行試驗(yàn)，得到了較好的分離效果。

4.2 冰片的薄層鑒別中，樣品處理分別采用了萃取法[5]，超聲法[6]，都未把冰片從基質(zhì)中分離，采用溫浸法處理樣品，得到較好的效果。

[1] 郭春秋.宮?？邓ǖ闹苽浼百|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的初步研究[D].黑龍江:黑龍江中醫(yī)藥大學(xué),2010.

[2] 趙斌,李娜.白蘞痔瘡栓的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中成藥,2008,30 (10) :1474.

[3] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010: 285.

[4] 劉峰,張振秋.HPLC 法測(cè)定黃連及炮制品中 4 種生物堿的含量[J].中成藥,2010,11(32):1925.

[5] 劉友龍,陳清燕,湯盈爽.復(fù)方苦黃噴霧劑的TLC鑒定研究[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2012,12(18):82.

[6] 聶黎行,劉燕.活血止痛制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國(guó)藥學(xué)雜志,2012,47(12):989.

（責(zé)任編輯：胡慧玲）

Study on quality standard of Xianglian haemorrhoids suppository/

LUO Yue1,LI Jian-li1,2, CHEN Zi-xian1, WANG Li-jie1// (1.Pharmacy College, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 611137, Sichuan; 2.Institute of Traditional Chinese Medicine, Sichuan Academy of Chinese Medicine Sciences, Chengdu 610031, Sichuan)

Objective:To establish the quality standard of Xianglian haemorrhoids suppository.Method:Huanglian, gallnut and borneol were qualitatively identified using TLC method. HPLC method was used to determine the content of berberine hydrochloride.Result:The TLC spots were clear without interference of negative control. The content of berberine hydrochloride showed a linear relationship with peak area in the range from 0.18272 μg to 1.8272μg.Conclusion:The method can be used as the quality standard of this preparation.

Quality standard; TLC; HPLC; berberine hydrochloride.

R 283

A

1674-926X(2015)02-011-03

四川省科技廳項(xiàng)目（2014-2-12）

1.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院, 四川 成都 611137；

2.四川省中醫(yī)藥科學(xué)院中醫(yī)研究所, 四川 成都 610031

羅悅（1990-），女，在讀碩士研究生

Tel:13808236834 Email:jjlyfutoubang@163.com

李建利（1957-），男，碩士研究生導(dǎo)師，主任藥師；研究方向：中藥新制劑、新劑型與新技術(shù)研究 Email:menguan1005@163.com

2014-07-21