劉利檬

哈藥集團生物工程有限公司

紫杉醇注射液含量測定方法建立

劉利檬

哈藥集團生物工程有限公司

目的采用高效液相色譜法測定紫杉醇注射液含量。方法采用高效液相色譜法，色譜柱為Ultimate柱（250mm★4.6mm, 5um），以乙腈：水（44：56）為流動相，柱溫45℃，流速為1.0ml/min，檢測波長為230nm。結果輔料對含量測定無干擾，耐用性試驗表明色譜條件微小變化不影響含量測定，溶液溶度在0.1mg/ml～1mg/ml范圍內線性關系良好，準確度試驗的平均回收率為99.7%，RSD為1.1%，重復性及中間精密度符合規(guī)定，溶液在8小時內穩(wěn)定。結論方法學試驗各項指標符合規(guī)定，可用于本品含量測定。

紫杉醇；方法學；含量測定

紫杉醇是紅豆杉屬植物中的一種復雜的次生代謝產物,也是目前所了解的惟一一種可以促進微管聚合和穩(wěn)定已聚合微管的藥物。同位素示蹤表明,紫杉醇只結合到聚合的微管上,不與未聚合的微管蛋白二聚體反應。細胞接觸紫杉醇后會在細胞內積累大量的微管，這些微管的積累干擾了細胞的各種功能,特別是使細胞分裂停止于有絲分裂期，阻斷了細胞的正常分裂[1]。我們采用高效液相色譜法測定紫杉醇注射液含量，建立本品含量測定方法[2]。

1.儀器與試藥

日本島津高效液相色譜儀LC-20A（DAD檢測器），色譜柱Ultimate AQ-C18 5μm 4.6×250mm

紫杉醇對照品（含量：99.4%），紫杉醇注射液由哈藥集團生物工程公司提供，乙腈為色譜純，其它試劑均為分析純。

2.方法與結果

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈：水（35：65）為流動相，檢測波長為230nm。理論塔板數不低于5000。對照品重復進樣5次，RSD不得過1.5%。

測定法取本品，精密稱定，用流動相稀釋制成每1ml含0.4mg的溶液，精密量取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，另精密稱取紫杉醇對照品，同法測定。按外標法以峰面積計算，即得。

2.1 專屬性試驗

紫杉醇、空白輔料、起始物料及中間體，加流動相溶解，按照擬定方法進樣，結果紫杉醇與其它物質可有效分離，紫杉醇峰純度符合規(guī)定，輔料、中間體及起始物料不干擾含量測定。

2.2 系統(tǒng)適用性試驗

取紫杉醇對照品，加流動相使溶解，制成0.4mg/ml的溶液，取對照品溶液，按照擬定含量測定方法進樣，結果重復進樣的RSD為0.6%，偏差符合規(guī)定。

2.3 耐用性試驗

改變流動相比例（乙腈變化±5%）、柱溫（30℃、35℃、45℃）、色譜柱（相同品牌不同批號的3根色譜柱）及流速（0.8ml/min、1.0ml/ min、1.2ml/min），評價各項指標改變對含量測定結果的影響，同時評價各色譜條件下系統(tǒng)適用性，結果表明各項指標變化對含量測定結果無明顯影響，耐用性試驗符合規(guī)定。在各種色譜條件下對稱因子在0.9至1.1之間，塔板數均大于10000。在各種條件下系統(tǒng)適用性偏差均小于1.0%。

2.4 線性范圍試驗

精密稱取紫杉醇對照品50mg，加流動相溶解制成2mg/ml的溶液，搖勻，作為對照品儲備液。分別精密量取對照品儲備液0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml，置10ml容量瓶中，分別加流動相稀釋至刻度，搖勻。制成系列溶度溶液，分別精密量取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以紫杉醇的濃度為橫坐標，對應的峰面積為縱坐標，計算線性回歸方程，結果紫杉醇濃度在0.1mg/ml～0.8mg/ml的濃度范圍內線性關系良好。

2.5 準確度試驗

取紫杉醇對照品，精密稱定，加流動相溶解制成1mg/ml的溶液，作為對照品儲備溶液。領取紫杉醇注射液加流動相稀釋制成0.4mg/ml的溶液，作為供試品溶液，取供試品溶液及對照品溶液按照測定法測定供試品溶液濃度。領取供試品溶液及對照品儲備溶液，制成系列濃度溶液，即供試品溶液得80%、100%、120%組。精密量取對照品溶液及各供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算紫杉醇的含量，計算加樣回收率。結果平均回收率為100.6%，RSD為1.4%，符合規(guī)定。

2.6 重復性及中間精密度試驗

取供試品溶液，制備0.4mg/ml的溶液6份，作為重復性試驗樣品溶液。按照含量測定方法進行測定，結果平均含量為99.8%，RSD為0.1%，重復性符合規(guī)定。領取取供試品溶液，變動因素為實驗者、實驗時間，考察含量測定結果變化情況，結果6次測定平均含量為99.5%，RSD為0.4%，中間精密度符合規(guī)定。

2.7 溶液穩(wěn)定性試驗

精密量取供試品溶液，加流動相制成0.4mg/ml的溶液，作為供試品溶液；領取紫杉醇對照品，加流動相制成0.4mg/ml的溶液，作為對照品溶液。室溫條件下放置放置8小時，分別于0小時、1小時、2小時、4小時、6小時及8小時進樣。按照含量測定方法測定，考察各時間點主峰峰面積變化，結果8小時內供試品及對照品溶液峰面積RSD分別為0.5%及0.9%，供試品溶液及對照品溶液在8小時內穩(wěn)定。

2.8 樣品含量測定

取本品，精密稱定，用流動相溶解制成0.4mg/ml的溶液，按照所確定含量測定方法測定供試品含量，結果三批含量分別為99.1%、99.5%、99.8%。

3.討論

紫杉醇注射液含量測定方法可行，操作簡便，結果準確，重現性好，專屬性強，方法準確，可用于紫杉醇注射液含量測定。

[1]駱澤宇.紫杉醇的藥理與臨床研究進展.現代中西醫(yī)結合雜志,2006，12，15（24）：3457-3458.

[2]吳健敏,張才煜,張啟明.關于HPLC法測定紫杉醇有關物質方法的探討[J].中國藥事,2009,(11):1072-1075.

劉利檬（1982-），男，黑龍江省哈爾濱市，哈藥集團生物工程有限公司，質檢員、工程師、本科。